ТАЕ буферін дайындау

ТАЕ, ТБЕ буфері, молярлық, милимолярлық концентрация, ПТР өнімінің рестрикциясы, гель құжаттау жүйесі

Орындаған:

Қазақ Ұлттық Аграрлық Университеті

Акушерлік, хирургиялық және өсіп-өну биотехнология факультеті

Алматы - 2020ж.

Кіріспе

1. 1 ТАЕ, ТБЕ буфері, молярлық, милимолярлық концентрация, ПТР өнімінің рестрикциясы, гель құжаттау жүйесі

II. Негізгі бөлім

2. 1 ТАЕ буферін дайындау

2. 2 ТВЕ буферін дайындау

III. Қорытынды

Жоспары

молекулалық биология және генетика түйіндерінде биология саласы. Шындығында бұл молекулалық биология секцияларының бірі. Генетика саласында молекулярлық биология тұқым қуалайтын заттың химиялық табиғатын анықтады, жасушадағы ақпаратты сақтаудың физикалық-химиялық алғышарттарын көрсетті және бірнеше ұрпаққа берілу үшін дәл көшірді.

Молекулярлық генетика -

TAE (Tris-acetate-EDTA)

50 х ТАЕ буфері

құрамында трис, сірке қышқылы және ЭДТА бар буферлік ерітінді ( қышқылы) . Молекулалық биологияда негізінен нуклеин қышқылдарының фрагменттерін бөлу кезінде гель-электрофорез үшін қолданылады.

1X Tae буферін дайындау үшін 20 мл концентрацияланған 50x TAE буферін 1 л-ге дейін тазартылған су қосып, жақсылап араластырыңыз.

1X Tae буфері бөлме температурасында сақталады.

Нуклеин қышқылдарын визуализациялау үшін Элек - тродты 1X Tae буферге 0. 3 мкг/мл концен - трацияға дейін бром этидиясын қосу ұсынылады.

50Х TAE электрофорез буферін дайындау

Пайдаланудағы шектеу:

Тек ғылыми-зерттеу мақсаттары үшін. TAE - ДНК-ның агарозды гельді талдау үшін қолданылатын өте таралған электрофорез буферлерінің бірі.

Thermo Scientific 10X TBE буфері

(Tris-borate-EDTA)

ДНҚ және РНК полиакриламидті гель электрофорезі үшін ең көп қолданылатын буфер.

TBE теңестірілмейтін немесе denaturing (7 M несепнәр) гельдерімен қолданылады.

ДНҚ автоматты түрде реттелетін гель үшін үнемі қолданылады.

TBE Buffer (5X)

Бұл агарозелі гель электрофорезінде (AGE) пайдаланылатын ерітінді, әдетте нуклеин қышқылдарының бөлінуі (яғни ДНҚ және РНҚ) .

Tris-Borate-EDTA (TBE) тек қана нуклеин қышқылының агарозымен және полиакриламидті гель электрофорезінде ғана емес, агарозды және полиакриламид гелін дайындауда да қолданылады.

Пайдалану нұсқаулары

1. Таңбалау температурасынан 15-30 ° C температурада TBE Electrophoresis Buffer (5X) бөтелкесін алыңыз және жапсырманы оқыңыз.

2. Бөтелкенің қақпағы тығыз екенін тексеріңіз.

3. Гомогендікті қамтамасыз ету үшін бөтелкедегі ерітіндіді мұқият бұраңыз.

4. Шөлмек сыртын 70% этанол сияқты дезинфекциялаушы ерітіндімен сүртіңіз.

5. Ламинарлы-ағынды культура астында асептикалық / стерильді техниканы қолдану және белгіленген хаттамаларға сәйкес жұмыс жасау.

6. TBE Electrophoresis Buffer Concentrate пайдаланудан бұрын 1X жұмыс концентрациясына дейін таратылуы керек.

7. Әр электрофорез үшін 1X жұмыс концентрациясында жаңа TBE буферін пайдаланыңыз.

ТBE буферінде TBE-қа қарағанда буферлік әлеуеті төмен, сондықтан оны кеңейтілген және қайталанатын электрофорезге жол бермеу керек.

TAE буфері ДНК фрагменттерін ДНК-модифицирующие ферменттері арқылы өзгертуге тура келетін гелді қолдану үшін қолайлы.

дәйекті электрофорез кезінде таусылып қалады.

TAE буфері үлкен ДНҚ фрагменттері үшін пайдалы (<2, 0кб), бірақ TBE кішірек ДНҚ үзінділерінің жоғары ажыратымдылығын алу үшін тиімді (мысалы, 300bp) . Орташа өлшемді ДНҚ үзінділері үшін бұл буфер жеткілікті. TBE дәстүрлі TAE-мен салыстырғанда әлдеқайда тұрақты және жоғары буферлік әлеуетке ие емес, сонымен бірге агарозды гельдердегі кіші ДНҚ фрагменттерінің жоғары ажыратымдылығын алу үшін тиімдірек болады.

Айырмашылықтары