Таза ашытқы дақылдарын алу

Презентация қосу

Қазақстан Республикасы Білім және Ғылым министірлігі

Әл-Фараби атындағы Қазақ Ұлттық Университеті
Биология және биотехнология факультеті

Тақырыбы: Ашытқыларды
бөліп алу және
идентификациялау

ОРЫНДАҒАН:
ТЕКСЕРГЕН: Бектілеуова Н. К
Ашытқыны бөліп алуға
арналған орта
1. Стандартты толық қоректік орта. Бұл орталар ашытқының көптеген
түрлерін толық есепке алу және оқшаулау үшін қолданылады. Ашытқының
көп бөлігін өсіру үшін кеңінен қолданылатын толыққанды орта-уыт,
суслоагар, Агар Сабуро (глюкозопептонды орта), аммоний-глюкоза ортасы.

2. Селективті орта. Олар белгілі бір мекендейтін жерлерден ашытқы үшін
қолданылады.
3. Дифференциалды орта. Олар басқа микроорганизмдермен қатты ластанған
субстраттардан ашытқы шығару үшін қолданылады. Микроорганизмдердің
өсуін басу үшін қоршаған ортаға әртүрлі ингибиторлар (кең спектрлі
қышқылдар мен антибиотиктер (стрептомицин, левомицетин, пенициллин)
қосылады).
Ашытқыны сандық есепке алу
және бөлу

Сандық есепке алу қажет болған жағдайда зерттелетін материалдың
массасы немесе көлемі бірлігіндегі n ашытқы санын есептеуді мынадай
формула бойынша жүргізеді:

мұндағы,
А - Бір Петри табақшасындағы колониялардың орташа саны;
Б - Сұйылту суспензиясындағы 1 мл тамшылардың саны;
В - Үлгінің сұйылту дәрежесі.

Жеке оқшаулағыштар (штамптар) жеке колониялардан пробиркаларға
бастапқы себу жүргізілген ортаға, бірақ нақты ингибиторларды қоспай
қайта себу арқылы алынады
Таза ашытқы дақылдарын алу
Таза микробтық дақыл - бұл микроорганизмнің бір түрінің
бір немесе бірнеше жасушаларының ұрпағы болып табылатын
популяция. Әрбір жаңа изолят әріптік белгі берілген штамп
деп аталады.
Рассалар физиологиялық белсенділіктің көріну дәрежесінде
ерекшеленетін ашытқының бір түрінің өндірістік штаптары
деп аталады.
Генетикалық зерттеулерде клондар деп аталады - бір спорадан
немесе гаплоидты жасушадан алынған таза дақылдар. Таза
ашытқы дақылдарын алудың тікелей және жанама әдістері бар.
Біріншісі микроскоп арқылы бір жасушаны немесе спораны
тікелей бақылауға шығаруға негізделген. Екінші жағдайда
жасушаларды бөлу үшін жанама әдістер қолданылады.
Тікелей әдістер
• Линднердің тамшылау әдісі. Ашытқы суспензиясын сұйық
ашытқымен 1 мл-де 100 жасуша концентрациясына дейін
сұйылтады және стерильді сурет қаламымен газ қыздырғышының
жалынында фламбирлеумен стерильденген майсызданбаған
жабын шынысына ең кішкентай жасушалар жағылады.
Тамшылар белгілі бір ретпен орналастырылады, әдетте екі
қатарға бес тамшы, яғни.әйнекке тек 10 тамшы. Содан кейін
әйнек минералды маймен жабылған дымқыл камераның үстіне
тез соғылады. Барлық тамшылар дереу микроскоппен қаралады
және бір жасушадан тұратын тамшыларды белгілейді. Егер
барлық тамшылардың құрамында бірнеше жасуша болса, онда
суспензияны сұйылту жоғарылайды және процедура
қайталанады. Үш, төрт күндік инкубациядан кейін, белгіленген
жасушалар микроколониялар пайда болған кезде, соңғысы
стерильді инемен немесе стерильді сүзгі қағазымен сұйық ортаға
өткізіліп, көбейеді.
Надсонның модификациясындағы
Линднер әдісі.

• Таза жабын әйнегі қыздырғыштың жалыны арқылы үш рет
өткізіледі және оның шеттері мастикамен қоршалған. Орталық
бөлікке 10% желатиннен немесе 0,5% агардан тұратын мөлдір
орта тамшысы қолданылады. Мұндай сұйылтудың суспензиясы
инемен жылы және әлі қатпаған ортаға енгізіледі, сонда тамшыға
бірнеше жасуша түседі. Шыны дымқыл камераға салынып,
микроскоптың аз өсуімен препарат қарастырылады.
• Суспензиялар, ауа көпіршіктері немесе әйнектің ақаулары болуы
мүмкін белгілерді табыңыз және нұсқауларға қатысты жалғыз
ашытқы жасушалары бар картаны салыңыз. Әрбір 10-20 сағат
сайын препарат заттық шыныда қайта зерттеледі және
Микроскоптың шамалы үлкейген кезінде көздің бақылауымен
материалды инемен пробиркаларға ауыстырады.
Вункович жеңілдеткен
Линднер әдісі
• Вунковичтің Линднер әдісін өзгертуі 3-4
жасушадан тұратын суспензия тамшылары
стерильді ортаға алдын-ала түсірілген циклмен
алынып, тығыз ортаның бетіне соққы береді.
Біраз уақыттан кейін микроколониялар пайда
болады, олардың саны белгіленген тамшыдағы
бастапқы жасушалардың санына сәйкес келуі
керек.
• Бұл колониялардан таза дақылдар ерекшеленеді.
Осылайша сіз қысқа уақыт ішінде бірнеше бір
клеткалы дақылдарды ала аласыз.
Микроманипулятор көмегімен
ашытқы спораларын бөлу.
• Микроманипуляторды қолдану негізінен қажет болған
жағдайда спораларды асктерден оқшаулауға жүгінеді,
өйткені вегетативті жасушалар микроманипуляция кезінде
оңай зақымдалады.
• Аски микроманипулятордың инелерін механикалық түрде
бұзады немесе суспензияны ферменттермен алдын-ала
өңдейді (мысалы, Helix pomatia жүзім ұлуларының ас
қорыту жолынан), ашытқының жасуша қабырғасын
лизирлейді.
• Микроманипулятормен жұмыс істеу үшін арнайы микро
инелер мен дымқыл камералар қажет. Аскоспораларды
ашытқыларды алу кезінде оларды дайындау әдістемесі мен
жұмыс бөлшектері генетика және ашытқы селекциясы
жөніндегі нұсқаулықтарда сипатталған.
Жанама әдістер
• Бұл топқа қоректік ортадағы жасушалардың бөлінуіне және
олардың өсуіне қолайлы жағдай жасау үшін жеке түрлердің
нақты биологиялық сипаттамаларын қолдануға негізделген
әдістер кіреді.
• Агар ортасында беттік себу әдісі. Дақылдар суспензиядан
пипеткамен де жүргізіледі немесе штрих әдісімен.
• Ашытқы жасушалары бар суспензияның бір тамшысы
Петри ыдысындағы қатып қалған кептірілген ортаның
бетіне жағылады. Стерильді шыны шпатель тамшыны
бетіне біркелкі таратады. Сол шпательмен, егер
біріншісінде колониялардың өте тығыз өсуі болса, тағы 2-3
шыны себуге болады. Таза мәдениетті бөлу процесі
оқшауланған колониядан пробиркаға қайта егумен
аяқталады.
Баллистоспоралық ашытқылардың таза дақылдарын бөлу.

• Баллистоспоралық ашытқыларды таза
мәдениетте оңай алуға болады, олардың
спораларды едәуір қашықтыққа тастау қабілетін
қолданады. Егер егуден кейін Агар ортасының
бетіне балқытылған агарды Петри ыдысына
құйып, төңкерілген күйде инкубацияласа, онда
біраз уақыттан кейін төменгі пластинада
баллистоспоралардың өніп шығуы нәтижесінде
колониялар пайда болады.
Ашытқыларды идентификациялау
Әр таксонды сипаттайтын белгілердің жиынтығын
төрт үлкен топқа бөлуге болады:
1. Жеке жасушалар мен олардың популяциясын
сипаттайтын Морфологиялық белгілер, сондай-ақ
вегетативті көбею әдістері.
2. Жыныстық процестің сипаттамасы.
3. Тамақтану түрін, өсу мен энергия метаболизмін
сипаттайтын физиологиялық белгілер.
4. Әр түрлі метаболиттердің түзілу ерекшеліктерін,
ферментативті белсенділікті және жасуша
компоненттерінің құрамын біріктіретін
биохимиялық белгілер.

Ұқсас жұмыстар

Қоректік ортаның құрамы

Сүт және сүт өнімдері технологиясы

Сүт және Сүт өнімдерін өндіру технологиясы

Өсімдіктің өсу стимуляторларын қолдану

Микроорганизмдерді гендік инженерия мен биотехнологияда қолдану мысалдары

Сүттің түзілуі және сүт алу технологиясы

Сыра алу технологиясы

Жетілмеген саңырауқұлақтар

Микроорганизмдердің өсуі және дақылдау

Сүт және сүт өнімдері

Пәндер