Серологиялық реакция

Орындаған; Кенжебек Айгүл

Қазақ Ұлттық Аграрлық университеті

«Биологиялық қауіпсіздік »кафедрасы

Тақырыбы; Жұқпалы ауруларды серологиялық балау әдістері (ИФТ)

Серологиялық реакция

Жұқпалы ауруларды балауға серологиялық реакциялар кеңінен пайдаланылады. Серологиялық реакциялар антиген мен антиденелердің организмнен тыс іп vitro өзара әрекеттесуінің нәтижесінен туындайды. Антиген мен антидененің қатысуынсыз ешбір серологиялық реакция жүрмейді. Сондықтан серологиялық реакциялар бактериологиялык және вирусологиялық зерттеулердің басым көпшілігінің құрам бөлігі болып табылады. 0

Иммуноферменттік талдау

(ИФТ)

Фермент пен антидененің молекулалары қосылғаннан кейін де олар функцияларын сақтайды, яғни антидене антигенмен әрекеттеседі, ал фермент субстратты ыдыратады.

Бұл әдістің негізгі классикалық вариантында антиген тығыз ортаға орналастырылады гетерогенді әдіс, немесе тығыз фазалы ИФT деп аталады.

Алғаш ұсынғандар: 1972жылы Е. Энгвалл мен П. Переман

Иммуноферментті талдау тәсілін қою

ИФТ тәсілін ауру және өлген малдардың мүшелерінде, ұлпаларында ауру қоздырғышының өзгеше антигенін табу, қоздырушыны жұқтырылған клетка өсіндісінде анықтау, ауырып жазылған және ауруға қарсы егілген малдардың қан сарысуында антиденелерді анықтау үшін қолданады.

ИФТ қойылатын варианттары

1. ИФТ-ның тура варианты

2. ИФТ-ның сэндвич варианты

3. ИФТ-ның конкуренттi варианты

4. ИФТ-ның кері варианты

Иммуноферменттік талдаудың варианттарына қолданылатын заттар

Тесті 96 шұңқырлы түбі жайпақ полистирендік планшеттерде

Антиген буферлі ерітіндісі

Коньюгатпен зерттейтін еріткіш буферлі ерітінді

Планшеттерді жууға буферлі ерітінді

Коньюгат

Реакцияны тежеу ерітіндісі

Тура вариантында нақты антигенге қарсы антидене таңбаланады.

1. ИФТ-ның тура варианты

Иммуноферменттік талдаудың тура вариантын қою тәсілі

Табақшаларды сенсибилизациялау. Ұяшығы бар полистирольды табақшаларды арнайы өсінді антигенмен 3 сағат бойы 370C сенсибидизациялайды немесе 16-18 сағат бойы 40С. Ол үшін ИФТ-на арналған титрі -1:64 кем емес арнайы өсінділі антигенді 1:50 немесе l: 100 дейін 0, 1 М-КББ рН 9, 6 сұйылтады сосын одан 0, 2 мл әр ұяшыққа енгізеді.

кейін табақшаны үш рет ИФТ арналған ерітіндімен шаяды, ауада кептіріп ИФТ қоюға қолданады немесе қолданғанша бір аптадай -200С-та сақтайды. Зерттелетін қан сынамаларынан ИФТ ерітіндісінде екі еселі қатынасын дайындайды 1:10-дан 1:1280 дейін.

1. ИФТ-ның тура варианты

3. Зерттелетін қан сынамаларынан ИФТ ерітіндісінде екі еселі қатынасын дайындайды 1:10-дан 1:1280 дейін.

4. Сенсибилизацияланған табақшаның

1-ші қатарына ИФТ арналған ерітіндіден құяды,

2-ші қатарына бақылауыш қалыпты қан сарысуын,

3-ші қатарға бақылауыш арнайы қан сарысуын,

4-12 қатардағы ұяшықтарға тәжірибелі қан сарысу сынамаларын құяды. Барлық қан сарысуларын 0, 1 мл-ден құяды.

6. Одан кейін 0, 1 мл жұмыстық субстратты енгізеді. Табақшаны субстратпен бөлме температурасында 30-60 минут дамытады.

5. Одан кейін 5 рет шаяды, ауада кептіріп әр ұяшыққа 0, 1 мл антитүрлі конъюгаттын құяды. Табақшаны конъюгатпен 1 сағат 370С-та дамытады. Байланыспаған конъюгатты табақшадан бес рет шайып тастайды.

Ағылшынша - Sandwіch - «қыстырылған», «екеудің арасында» мағынасында.

Алдымен беткейге таңбаланған антидене орналастырылып, оған антигені бар субстрат, содан кейін антигенге қарсы таңбаланған антидене коньюгаты қосылады. Осылайша анықталатын антиген таңбаланбаған және таңбаланған екі антидененің арасында қалады.

Бұл реакцияны антиденені анықтау үшін де қоюға болады. Ондай жағдайда антидене екі антигеннің арасында қалады. Антигенді таңбаланбаған күйінде алып, оған таңбаланған антиглобулин коньюгатымен әсет етеді.

2. ИФТ-ның сэндвич варианты

ИФТ-ның конкуренттi варианты.

Беткейге таңбаланбаған антиген немесе антидене бекітіліп, оның үстіне тиісінше айқындалатын антиген немесе антидене қосылады.

Содан кейін беткейдегі антиген немесе антиденеге қарсы таңбаланған антидене немесе антиген коньюгаты қосылады.

Нәтижесі тура вариантына қарама қарсы бағаланады.

3. ИФТ-ның конкуренттi варианты

Иммуноферменттік талдаудың кері әдісін ауруды анықтауға немесе зерттеудің сапасын растауға қолданады.

Бірақ реакцияның сезгіштік және ерекшелігі иммуноглобулин коньюгаттың ерекшелігіне байланысты, сонымен қатар сынаулардың таңдалған сұйылту коэффицентеріне көңіл бөледі.

Коньюгатты кең ерекшелігі бар және әлсіз сарысу сұйылтуда реакцияның сезгіштігі жоғарылайды.

Тар ерекшелікті коньюгат (мысалы қарсы-IgGI) және сынама сұйылту дәрежесі көбірек болғанда реакцияның балау ерекшелігі жоғарылайды.

4. ИФТ-ның кері варианты

Антигенді бекіту буферлі ерітінді концентрацияда сұйылтады, титрі шахмат ретінде анықталған (1 мг/мл шамалы) .

Барлық шұңқырларға 100 мкл көлемінде құйылады. Содан соң аз көлемде планшеттарды 2 сағатқа 370 С немесе 40 С бір түнге қояды. .

Энзиматикалық коньюгатті буферлі ерітіндіге сұйылтады 100 мкл-нен барлық шұңқырларға қосады. Планшетті жауып айналмалы бұлғауышы бар термостатқа 370 С бір сағатқа салады толассыз сілкіндірумен.

Тәжірибені жүргізу.