Серологиялық реакция

Презентация қосу

Қазақ Ұлттық Аграрлық университеті
«Биологиялық қауіпсіздік »кафедрасы

Тақырыбы; Жұқпалы ауруларды
серологиялық балау әдістері (ИФТ)

ОРЫНДАҒАН; КЕНЖЕБЕК АЙГҮЛ
Серологиялық
реакция
Жұқпалы ауруларды балауға
серологиялық реакциялар кеңінен
пайдаланылады. Серологиялық
реакциялар антиген мен
антиденелердің организмнен тыс іп
vitro өзара әрекеттесуінің нәтижесінен
туындайды. Антиген мен антидененің
қатысуынсыз ешбір серологиялық
реакция жүрмейді. Сондықтан
серологиялық реакциялар
бактериологиялык және
вирусологиялық зерттеулердің басым
көпшілігінің құрам бөлігі болып
Иммуноферменттік талдау
(ИФТ)
.
• Фермент пен антидененің
молекулалары қосылғаннан кейін де
олар функцияларын сақтайды, яғни
антидене антигенмен әрекеттеседі, ал
фермент субстратты ыдыратады.
• Бұл әдістің негізгі классикалық
вариантында антиген тығыз ортаға
орналастырылады гетерогенді әдіс,
немесе тығыз фазалы ИФT деп
Алғаш ұсынғандар: 1972жылы Е.Энгвалл мен П.Переман
аталады.
Иммуноферментті талдау
тәсілін қою

ИФТ тәсілін ауру және өлген
малдардың мүшелерінде,
ұлпаларында ауру қоздырғышының
өзгеше антигенін табу,
қоздырушыны жұқтырылған клетка
өсіндісінде анықтау, ауырып
жазылған және ауруға қарсы егілген
малдардың қан сарысуында
антиденелерді анықтау үшін
қолданады.
ИФТ қойылатын
варианттары
1. ИФТ-ның тура варианты

2. ИФТ-ның сэндвич варианты

3. ИФТ-ның конкуренттi варианты

4. ИФТ-ның кері варианты
Иммуноферменттік
талдаудың
варианттарына
қолданылатын заттар
1. Тесті 96 шұңқырлы түбі
жайпақ полистирендік
планшеттерде
2. Антиген буферлі ерітіндісі
3. Коньюгатпен зерттейтін
еріткіш буферлі ерітінді
4. Планшеттерді жууға
буферлі ерітінді
5. Коньюгат
6. Реакцияны тежеу ерітіндісі
1. ИФТ-ның тура
варианты
Тура вариантында нақты антигенге қарсы антидене
таңбаланады.
Иммуноферменттік талдаудың тура вариантын
1. ИФТ-ның тура варианты
қою тәсілі
1. Табақшаларды сенсибилизациялау. Ұяшығы бар
полистирольды табақшаларды арнайы өсінді
антигенмен 3 сағат бойы 370C
сенсибидизациялайды немесе 16-18 сағат бойы
40С. Ол үшін ИФТ-на арналған титрі -1:64 кем
емес арнайы өсінділі антигенді 1:50 немесе l: 100
дейін 0,1 М-КББ рН 9,6 сұйылтады сосын одан 0,2
мл әр ұяшыққа енгізеді.
2. Сенсибилизациялағаннан кейін табақшаны үш
рет ИФТ арналған ерітіндімен шаяды, ауада
кептіріп ИФТ қоюға қолданады немесе
қолданғанша бір аптадай -200С-та сақтайды.
Зерттелетін қан сынамаларынан ИФТ ерітіндісінде
5. Одан кейін 5 рет шаяды, ауада
кептіріп әр ұяшыққа 0,1 мл
3. Зерттелетін антитүрлі конъюгаттын құяды.
қан
сынамаларынан ИФТ ерітіндісінде Табақшаны конъюгатпен 1 сағат
екі еселі қатынасын дайындайды 370С-та дамытады.
1:10-дан 1:1280 дейін. Байланыспаған конъюгатты
4. Сенсибилизацияланған табақшадан бес рет шайып
табақшаның тастайды.
1-ші қатарына ИФТ арналған
ерітіндіден құяды,
2-ші қатарына бақылауыш
қалыпты қан сарысуын,
3-ші қатарға бақылауыш арнайы
қан сарысуын,
4-12 қатардағы ұяшықтарға 6. Одан кейін 0,1 мл жұмыстық
тәжірибелі қан сарысу субстратты енгізеді. Табақшаны
сынамаларын құяды. Барлық қан субстратпен бөлме
сарысуларын 0,1 мл-ден құяды. температурасында 30-60 минут
2. ИФТ-ның сэндвич
варианты

Ағылшынша — Sandwіch — «қыстырылған»,
«екеудің арасында» мағынасында.
Алдымен беткейге таңбаланған антидене
орналастырылып, оған антигені бар
субстрат, содан кейін антигенге қарсы
таңбаланған антидене коньюгаты қосылады.
Осылайша анықталатын антиген
таңбаланбаған және таңбаланған екі
антидененің арасында қалады.
Бұл реакцияны антиденені анықтау үшін де
қоюға болады. Ондай жағдайда антидене екі
антигеннің арасында қалады. Антигенді
таңбаланбаған күйінде алып, оған
таңбаланған антиглобулин коньюгатымен
3. ИФТ-ның конкуренттi
варианты

• ИФТ-ның конкуренттi варианты.
• Беткейге таңбаланбаған
антиген немесе антидене
бекітіліп, оның үстіне тиісінше
айқындалатын антиген немесе
антидене қосылады.
• Содан кейін беткейдегі антиген
немесе антиденеге қарсы
таңбаланған антидене немесе
антиген коньюгаты қосылады.
• Нәтижесі тура вариантына
қарама қарсы бағаланады.
4. ИФТ-ның кері варианты

• Иммуноферменттік талдаудың кері
әдісін ауруды анықтауға немесе
зерттеудің сапасын растауға
қолданады.
• Бірақ реакцияның сезгіштік және
ерекшелігі иммуноглобулин
коньюгаттың ерекшелігіне
байланысты, сонымен қатар
сынаулардың таңдалған сұйылту
коэффицентеріне көңіл бөледі.
• Коньюгатты кең ерекшелігі бар және
әлсіз сарысу сұйылтуда реакцияның
сезгіштігі жоғарылайды.
• Тар ерекшелікті коньюгат (мысалы
1. Антигенді бекіту буферлі
Тәжірибені жүргізу . ерітінді
сұйылтады,
концентрацияда
титрі шахмат
ретінде анықталған (1 мг/мл
шамалы).
• Барлық шұңқырларға 100 мкл
көлемінде құйылады. Содан
соң аз көлемде планшеттарды
2 сағатқа 370 С немесе 40 С
бір түнге қояды..
2. Энзиматикалық коньюгатті
буферлі ерітіндіге сұйылтады
100 мкл–нен барлық
шұңқырларға қосады.
Планшетті жауып айналмалы
бұлғауышы бар термостатқа
370 С бір сағатқа салады
толассыз сілкіндірумен.
3. Субстрат ерітінді қоспасы қолдану алдында
әзірленеді. Субстрат ерітіндіні барлық
шұңқырларға 100 мкл нен құяды. Планшетті
айналмалы бұлғауышы бар термостатқа 370 С 15
минутқа салады.

4. 15 минуттан кейін барлық шұңқырларға реакция
тоқтататын реагент құйылады. 100 мкл нен
планшеттерді айналдырады шұңқырдағы
құрамдарын араластыруға. Шұңқырларда 200 мкл -
нен болу керек.

5. Зерттелудің боялуы планшетта фотометр
көмегімен, 405 немесе 414 нм интерферен сүзгіні
Қорытынды
нәтижелері
1. Спектрофотометр нәтиже есебінде оң деп есептелінеді, зерттейтін
сарысу сұйылту дәрежесі 1:400 ден басталғанда, теріс бақылау
сары суынан ОТ екі есе жоғары болу керек.
2. Есепті көзбен қарағанда зерттелетін сары судан 1:400
1 2 3 4
сұйылтуында үш крестен кем емес, түрі қоңырсары боялғанда
реакция оң деп есептелінеді, бақылау теріс сары суында және
сынама сарысуларында ақшыл сары немесе ақ болған жағдайда
реакция теріс деп есептейді.
3. Сынама сары суында күдікті нәтиже теріс болғанда,ОТ-саны екі
есе жоғары болады.Сынама сарысудың қорытынды нәтижелері
зертханаға балау бағасын (оң, теріс, күдікті және сары судың
титрін нәтижеде белгілеу керек).
4. 14. 15-20 күннен кейін қайталап зерттейді, екі рет күдікті реакция
оң деп есептелінеді.
BUSI

NESS

TEMP

LATE

НАЗАРЛАРЫҢЫЗҒА
рахмет
BUSI

NESS

TEMP

LATE

Ұқсас жұмыстар

СЕРОЛОГИЯЛЫҚ РЕАКЦИЯЛАР

Індеттанулық балау

Бруцеллезды серологиялық балау

Серологиялық реакция түрлері және олардың қолданылуы

Вирусологиялық балау әдістері

Гемагглютинация реакциясы және оның компоненттері

Инфекция қоздырушысының бастауы - ауру жэне микроб алып жүретін жануарлар

Гемагглютинацияық реакция

Гемагглютинация және гемагглютинацияны тежеу реакциясы

Гемагглютинация реакциясы туралы мәлімет

Пәндер