ДНҚ денатурациясы


Slide 1

СӨЖ

Денатурация мен ренатурацияның кинетикасы оның қолданылуы.

Нуклеотидтердің ДНҚ тізбегіндегі орналасу тәртібін анықтау əдістері. Максам-Гильберт жəне Сэнгер əдістері.

Slide 2

Жоспар

Кіріспе.

Негізгі бөлім:

ДНҚ денатурациясы;

ДНҚ ренатурациясы;

Нуклеин қышқылдарының гибридизациясы;

Тәжіибеде, медицина мен генетикада қолданылуы;

Нуклеотидтердің ДНҚ тізбегіндегі орналасу тәртібін анықтау əдістері;

Сэнгер және Максам-Гилберт әдістері.

Қорытынды.

Пайдаланылған әдебиет тізімі.

Slide 3

Кіріспе

Slide 4

ДНҚ денатурациясы

Slide 5

Температуралық диапазон

Температура мен рН жоғарылаған кезде алынған әдеттегі қос тізбекті ДНҚ-ның денатурация қисықтары

Slide 6

ДНҚ ренатурациясы

Slide 7

ДНҚ ренатурациясы

Толығымен денатурацияланған ДНҚ бар ерітіндіні тез салқындату кезінде оның ренатурациясы жүрмейді

Slide 8

Реассоциация әдісі

Slide 9

Нуклеин қышқылдарының гибридизациясы

Slide 10

Гибридті молекулалар

Slide 11

Тәжірибедегі денатурация

ДНҚ-ны денатурациялауға арналған жабдық

Slide 12

Медицинада және генетикада қолдану

Денатурация арқылы қол жеткізуге болатын негізгі міндеттердің бірі - рекомбинантты генетикалық кодты алу. Мұнда үш кезеңнен тұратын полимеразды тізбекті реакция әдісі қолданылады:

денатурация;

гибридизация;

полимеризация. Әдістің арқасында мутациялардың қатысуымен ДНҚ көшірмелерінің шексіз саны алынады. Көшірмелер негізінде вирустармен, бактериялық және саңырауқұлақ ауруларымен инфекцияның диагностикалық тәжірибелері өткізіледі. Полимеразды тізбекті реакцияны қолдану арқылы тәжірибелік геннің көшірмелері алынады.

Slide 13

Даму болашағы

Slide 14

Нуклеотидтердің ДНҚ тізбегіндегі орналасу тәртібін анықтау əдістері

Slide 15

Фредерик Сэнгер әдісі

Фредерик Сэнгер

Slide 16

Ф. Сэнгер мен Алан Коулсон ДНҚ секвенирлеудің «плюс-минус» әдісі

ДНҚ секвенирлеудің «плюс-минус» әдісі

Slide 17

Сэнгер бойынша ДНҚ секвенирлеу: «Терминаторлар» әдісі

Бірнеше жылдан кейін Сэнгер әріптестерімен бірге «Терминаторлар» әдісі немесе «тізбекті бұзу» әдісі деп аталатын тағы бір секвенирлеу әдісін ұсынды. Бұл әдістің мәні реакция қоспасына әдеттегі нуклеотидтердің аналогтары (дидезоксинуклеозид трифосфаттары) қосылады, олардың синтезделген тізбекке қосылуы оны одан әрі синтездеудің мүмкін еместігіне әкеледі (терминация, тоқтату), ал алынған «сынық» арқылы сіз реттелген ДНҚ фрагментінің соңғы әрпін орната аласыз.

«Терминаторлар» әдісі

Slide 18

«Терминаторлар» әдісі:

ДНҚ полимеразасын, олигонуклеотидті праймерлерді және төрт (dNTPs) (A, T, G және C) қоспасын қолданады, олардың біреуі фосфаттың α-позициясымен (32p) радиоактивті түрде таңбаланған. Төрт реакцияның әрқайсысына бір-бірден 2', 3' дидезоксинуклеозид трифосфаты (ddatp, ddTTP, ddCTP немесе ddGTP) қосылады, олар одан әрі реакцияны тоқтатады (матрицадан ДНҚ молекуласының синтезі) - осылайша әр пробиркада бірдей нуклеотидпен аяқталатын әртүрлі ұзындықтағы ДНҚ фрагменттерінің жиынтығы пайда болады. Содан кейін алынған фрагменттер электрофорез арқылы бейнеленеді және төрт реакцияның фрагменттерінің ұзындығын DDATP, ddTTP, ddCTP немесе ddGTP-мен салыстыра отырып, ДНҚ тізбегін қалпына келтіреді.

«Терминаторлар» әдісі

Slide 19

Максам және Гилберт бойынша ДНҚ секвенирлеу: химиялық деградация әдісі

Slide 20

Әрі қарай, рентген пленкасын қолдана отырып, кескін (электрофорограмма) алынады, оның көмегімен сіз зерттелетін ДНҚ фрагментінің нуклеотидтер тізбегін қалпына келтіре аласыз, төрт жолдың қайсысы гельдегі тесіктерден ең алыс орналасқан ең жеңіл өнімнен кейінгі фрагмент екенін есептей аласыз. Осылайша, бір оқуда 200-ге дейін нуклеотидтерді анықтауға болады. Қазіргі уақытта бұл әдіс ДНҚ үлгілерін дайындаудың күрделілігіне және зиянды химикаттармен жұмыс істеуге байланысты қолданылмайды. 1990-шы жылдардың басында Максам-Гилберт технологиясына негізделген және үлгіні дайындауды едәуір жеңілдеткен автоматты секвенаторлардың пайда болуына қарамастан, бұл тәсіл ақыры Сенгер әдісіне ұтылды. Максам-Гилберт әдісінің артықшылығы (Сенгер әдісімен салыстырғанда) оның қайталама құрылымдардан толық тәуелсіздігі және қызығушылық тудыратын ДНҚ тізбегінің учаскесін білу қажеттілігінің болмауы (қажетті ДНҚ полимераза ферментін тазарту үшін) клондау сатысын болдырмайды.

Уолтер Гилберт

Slide 21

Қорытынды

Slide 22

Пайдаланылған әдебиет тізімі

Р. І. Берсімбай «Молекулалық биология» оқу құралы. Алматы «Қазақ Университеті» 2016

Анисимов А. А. «Основы биохимии»

https://studref. com

https://pubmed. ncbi. nlm. nih. gov

https://www. biologydiscussion. com/biomolecules/denaturation-and-renaturation-of-dna/25558

https://www. majordifferences. com

http://www. bio. bsu. by

http://propionix. ru/sekvenirovaniye-i-ptsr

http://www. bio-cat. ru


Ұқсас жұмыстар
ДНҚ тізбектерін ДНҚ полимеразамен көшіру әдісі
Прокариот ДНҚ - ның репликациясы
Мезельсон-Сталь тәжірибесі, прокариоттардың және эукариоттардың ДНҚ репликациясы, ДНҚ денатурациясы және ренатурациясы
Ақуыз.Нуклеин қышқылдары
ДНҚ молекуласының құрылымы
Алмаспайтын аминқышқылдары
Торша паталогиясы
Медициналық құралдарды залалсыздандыру тәртібі
Химиялық заттарды енгізу арқылы стерилизациялау
Генетикалық ақпараттың берілуінің молекулалық негіздері. ДНК – репликациясы
Пәндер



Реферат Курстық жұмыс Диплом Материал Диссертация Практика Презентация Сабақ жоспары Мақал-мәтелдер 1‑10 бет 11‑20 бет 21‑30 бет 31‑60 бет 61+ бет Негізгі Бет саны Қосымша Іздеу Ештеңе табылмады :( Соңғы қаралған жұмыстар Қаралған жұмыстар табылмады Тапсырыс Антиплагиат Қаралған жұмыстар kz