ДНҚ молекуласын бөліп

Молекуцла

GREAT

LIVE

ДНҚ молекуласын зерттеудің маңызы және ерекшеліктері

Биологиялық материалдан ДНҚ молекуласын бөліп алу

Орындаған: Махашбай Асылзат, Жеңісбекқызы Жібек, Төлегенова Тамила Бт18-42к

Қабылдаған: Тілеулес Ж. Б.

Жоспар

І. Кіріспе

ІІ. Негізгі бөлім

2. 1. ДНҚ молеуласын бөліп алу процесі

2. 2. Шаштан ДНҚ молекуласын алу

2. 3. Сүйек қалдықтарынан ДНҚ молекуласын бөліп алу

2. 4. Тістен ДНҚ бөліп алу

ІІІ. Қорытынды

IV. Пайдаланылған әдебиеттер

бИОМАТЕРИАЛ

GREAT

LIVE

ДНҚ-теріс заряды бар ұзын молекула: ол жеке ақуыздарды, жасушаларды, тіндерді және бүкіл ағзаларды жинау туралы нұсқауларды кодтайды. ДНҚ сирек жағдайларды қоспағанда, барлық жасушаларда болады: мысалы, жетілген сүтқоректілердің эритроциттері оттегін жақсы тасымалдау үшін генетикалық материалмен ядро жоғалтады.

ДНҚ молекуласын не үшін бөліп алады?

Себебі, Биоматериалды өңдеу және ДНҚ оқшаулау - молекулалық-биологиялық зерттеудің бірінші кезеңі. Генетикалық материал жасушалардың ядроларында сақталады, оларды жою керек, әйтпесе ДНҚ ерітіндіге енбейді және талдау мүмкін болмайды.

БИОМАТЕРИАЛ ТҮРЛЕРІ

Шаш, қан, сүйек, тіс, сүйек т. б.

ДНҚ сапасының дәрежесі биологиялық үлгінің сапасына, оқшаулау әдісіне де байланысты. Қазіргі уақытта ДНҚ оқшаулаудың көптеген әдістері жасалды.

• Липидтер және қант ерітіндіге түсуі үшін жасушалар мен жасуша ядроларының мембраналарын бұзу керек. Ол үшін SDS детергентімен (сілекей үшін) немесе гуанидин тиоцианатымен (қан үшін) лизис буферін қолданады. Детергент мембраналарды бұзады, ал ерітіндінің буферлік компоненті рН-ны ДНҚ үшін оңтайлы деңгейде ұстайды.

//Ақуыздардан тазарту.

Ерітіндіге енгізілген ДНҚ онымен байланысты ақуыздардан босатылуы керек. Лизис буферінің тағы бір компоненті жасуша ақуыздарының бұзылуына жауап береді, ол протеин К, фермент ақуызына байланысты. К әріпі кератиндерді ыдыратуға негізделген

Сақтау буферінде ДНҚ-ны ерітіңіз. Мембранамен байланысқан ДНҚ элюция үшін буфермен жуылады (элюция адсорбцияланған затты ерітіндіге шығару процесі деп аталады) . Буферде ерітілген ДНҚ бірнеше жыл бойы -20°C температурада сақталуы мүмкін

ДНҚ-ны қоспалардан тазарту. ДНҚ-мен байланысатын және жасушаның қалған органикалық компоненттерінің өтуіне мүмкіндік беретін кремний мембранасы бар пробиркаларда центрифугалаймыз. Центрифугалау мембрана арқылы сүзу жылдамдығын бірнеше есе арттырады. Изопропанол немесе этанол спиртімен ДНҚ мембранасы бірнеше рет шайылады

Лабораторияда

ДНҚ бөліп алу процесі

• Шаштың тамырында гендерлік және жеке сәйкестендіруді тексеру үшін қажет ядролық ДНҚ бар.

• Шаштың керемет үлгілері иықтың артқы жағында шаштың қалың және тамырлары үлкен жерлерде кездеседі.

• Толық жеке профиль алу үшін жеткілікті ДНҚ-ны қамтамасыз ету үшін тамырлары бар 15-20 шашты жинау керек.

• Шаш үлгілері құрғақ күйде сақталып, бөлме температурасында конверттерге жіберілуі керек. Құрғағыш дорбаны конвертпен бірге дәлелдемелер пакетіне немесе Ziploc-қа салу керек.

• Кептіретін дорба ылғалдың ДНҚ-ның бұзылуына жол бермейді.

Стерильді дистилденген суда дайындалған Chelex ион алмастырғыш шайырының 20% суспензиясын қолдану керек. Әдістің принципі-әр түрлі қоспаларды, соның ішінде ақуыз қоспаларын сіңіретін Chelex ион алмастырғыш шайырымен қайнатылған кезде шашты гидролиздеу, "еріту".

Шаштан ДНҚ

бөліп алу

Шашты микроскоптайды, жуады, шаш тамырын 2-3 мм өзектен кесіп, "Эппендорф"пробиркасына салады.

Пробиркаға Chelex ион тәрізді шайыры жүзгінінің 20% 100 мкл қосылады.

Термостатта 12 сағат (түн) бойы 56 °С температурада ұстайды.

Жоғары жылдамдықта вортексте 5-10 с шайқайды.

Содан кейін түтік шашты қайнаған суға 8 мин. шашты толығымен ерітіндіге батыру керек.

Жоғары жылдамдықпен 5-10 с үшін шайқау үшін қайтадан вортекске салынады.

Шаш гидролизатын центрифугалайды 2-3 мин 10 000 - 15 000 айн / мин. Супернатант ПТР реакциясын қою үшін қолданылады. Реакцияға ПТР реакция қоспасының жалпы көлемі 25 мкл болған кезде үлгінің 15 мкл аспайды.

Қанша көлемде жиналу керек?

“

Ақуыз кератинмен толтырылған мүйізді қабығынан тұрады.

. Осыны ескере отырып, тырнақ пластиналары белгісіз адамдарды анықтау кезінде сот-медициналық сараптама объектісі ретінде қолданылады, ал тырнақ фрагменттері заттай дәлелдерге сот-медициналық сараптама жүргізу кезінде болжамды қылмыскердің биологиялық ізі ретінде зерттелуі мүмкін

Тырнақ пластинкаларынан ДНҚ молекуласын бөліп алу

Тырнақ пластиналары мен олардың бөліктері жеткілікті генетикалық материалдан тұрады және жұмсақ ұлпаларға қарағанда ыдырауға төзімді

Бастапқыда ДНҚ-ны тырнақтардан оқшаулау үшін фенолхлороформды экстракция әдісі қолданылды, содан кейін ДНҚ препаратын тазарту және шоғырландыру.

Бұл улы реактивтерді қолданумен байланысты және ДНҚ-ның үлкен шығындарымен бірге жүретін көп сатылы, көп уақытты қажет ететін және ұзақ процесс. Қазіргі уақытта ДНҚ-ны оқшаулаудың тиімді және ыңғайлы әдістері жасалды, бұл көп жағдайда фенол әдісінен бас тартуға мүмкіндік береді.

Процедура сүйек қалдықтарынан ДНҚ алу кезеңдерін қамтиды және оны тіндер мен сүйек кемігінсіз құрғақ сүйектер үшін қолдануға болады. ДНҚ экстракциясына натрий додецилсульфаты мен К протеиназасының қатысуымен жасуша ядросының лизисі кіреді.

ДНҚ экстракциясының тиімділігін арттыру үшін жасушалық лизатқа қосымша реагенттер - Тио - қалпына келтіргіштер, мысалы, дитиотрейтол немесе 2-меркаптоэтанол енгізіледі, олар дисульфидті ақуыз қосылыстарын бұзады, осылайша молекулааралық жасуша ансамбльдерін ыдыратады

Фенол/хлороформ ақуыздарының фрагменттерінен тазарту жүргізіледі, ДНҚ ерітіндісін концентрациялау Centricon100 концентраторының көмегімен жүзеге асырылады