Эдвин Саузер жасаған ДНҚ анықтау әдістемесі

Презентация қосу

СЕМЕЙ ҚАЛАСЫНЫҢ ШӘКӘРІМ
АТЫНДАҒЫ УНИВЕРСИТЕТІ
КОМЕРЦИЯЛЫҚ ЕМЕС
АКЦИОНЕРЛІК ҚОҒАМ

СӨЖ
Тақырыбы:Вестерн блодинг

Орындаған : Нұрлыбекова Дана
Тобы: ВМ-803
Тексерген: Сабырова.А.Қ
Жоспар
• Кіріспе
• Негізгі бөлім
2.1 Түрлері
2.2 Кезеңдері
2.3 Артықшылық пен кемшілік
• Қорытынды
Кіріспе .

Вестерн блотинг (Вестерн блот,
ақуыздық иммуноблот, Вестрн блотинг)

Вестерн блоттинг Джордж Старк
зертханасында жасалды (Стэнфорд,
Ұлыбритания)Атауы вестерн-блот берілді
техникасы. У. Нейлом Бурнеттом болып
табылады ойын сөздерді атау Саузерн Блоттинг
(Southern blotting). - бұрын Эдвин Саузер
жасаған ДНҚ анықтау әдістемесі
1. Ақуыздарды SDS-PAGE гель электрофорезі арқылы
бөлу/ Гель электрофорезінің көмегімен ақуыздар
ПРОТОКОЛ полиакриламидті гельде бөлінеді.
2. 2. Ақуыздарды мембранаға беру
3. 3. Бұғаттау және анықтауСодан кейін олар
антиденелерді қолдана отырып
анықталады:біріншіден, ақуыздар бастапқы (моно
немесе поликлональды) антиденелермен
байланысады, олар өз кезегінде байланысады
ферменттермен конъюгацияланған екінші
антиденелермен (желкек пероксидазасы немесе сілтілі
фосфатаза).
• Синтетикалық антидене немесе жануарларда
налынған антидене (бастапқы антидене деп а
талады) жасалады, ол белгілі бір мақсатты ақ
уызды танидыжәне байланыстырады.
Электрофорез мембранасыартық антиденеле
рді жуар алдында бастапқыантидене бар еріт
індімен жуылады. Екіншіантидене қосылады
, ол бастапқы антиденені танидыжәне оныме
н байланысады. Екінші антидене белгілібір
мақсатты ақуызды жанама түрде анықтауғам
үмкіндік беретін бояу, иммунофлуоресценци
яжәне радиоактивтілік сияқты әртүрлі әдісте
• Артықшылығы: сезімталдық
• Вестерн- блоттингтің пайдасына басты дәлелдердің бірі-оның сезімталдығы. Үлгіде ақуыздыңтек
0,1 нанограммасын анықтау қабілетінің арқасында, әдіс пациенттің үлгісінде вирустыңнемесе бакте
рияның ең аз иммуногендік реакциясын анықтай отырып, теориялық тұрғыданерте диагноз қоюдың
тиімді құралы бола алады. Жанама Вестерн блоттинг қосымша екіншіантидененің визуализация жү
йесі анықтаған сигналдың қарқындылығын арттыру қабілетінебайланысты осы сезімталдыққа негіз
делген. Үлкен сезімталдық тестілеу үшін аз антиденелерқажет екенін білдіреді, бұл зертханалық шы
ғындарды едәуір азайтады.
• Артықшылығы: Спецификасы
• Ветерн- блоттинг техникасы екі маңызды факторға байланысты. Біріншіден,
гель электрофорезі үлгіні әртүрлі мөлшердегі, зарядты және конформациялық ақуыздарғасұрыптайд
ы. Бұл процестің өзі анықтауға үлкен қадам болып табылады, өйткені гельде пайдаболған жолақтар
қызығушылық ақуызының немесе полипептидтің мөлшері туралы түсінікбереді. Антидене-
антигеннің өзара әрекеттесу ерекшелігі екінші маңызды фактор болыптабылады. Белгілі бір антиден
елер белгілі бір ақуыздарға жақындық танытатындықтан, процесс мақсатты ақуызды, тіпті 300
000 түрлі ақуыздардың қоспасында да іріктеп анықтайалады
• Кемшілігі: жалған немесе субъективті нәтижелерге бейімділік
• Оның сезімталдығы мен ерекшелігіне қарамастан, Вестерн блот әлі де қате нәтиже береалады.
Жалған оң нәтиже антидене оған арналмаған ақуызбен әрекеттескен кезде пайдаболады, бұл көб
інесе АИТВ-
ға тексерілген науқаста туберкулез немесе бірқатар паразиттікинфекциялар болған кезде пайда б
олады. Екінші жағынан, жалған теріс нәтиже, егер үлкенбелоктардың мембранаға дұрыс өтуіне
жеткілікті уақыт берілмесе, оңай пайда болуы мүмкін. Қате тегістеу және өңдеу көбінесе бұрма
лануға, түсіп кетуге немесе тіпті бірнеше жолаққаәкеледі, бұл сынақ нәтижелерін маманның түс
індіруіне мүмкіндік береді.
• Кемшілігі: жоғары құны және техникалық сұраныс
• Вестерн блодинг кептелісінің құны - бұл таңбаланған антиденелерге, білікті сарапшыларғажәне
зертханалық жабдықтарға үлкен жеке шығындардың жиынтығы. Нәзік процесс, батыстық блотт
инг үлгінің компоненттерін дұрыс анықтау үшін әр кезеңде дәлдікті қажететеді.
Реагент концентрациясындағы немесе инкубация кезеңіндегі шамалы қателік бүкілпроцесс үші
н апатты болуы мүмкін. Сонымен, анықтау және визуализация үшін қажетжабдық - химилюмин
есцентті, флуоресцентті, радиоактивті немесе лазерлік анықтаужүйелері - микробиологияның ор
таша бөлімі үшін тым қымбат болуы мүмкін.
• Вестерн блоттингінің ең көп қолданылатын процедурасы келтірілген.
Бұл процедурада бастапқы антиденелер зерттелетін ақ антиденеге тән,
ал пероксидаза пероксидазасымен байланысқан қайталама антиденелер
первич антиденесіне тән. Мұндай екі сатылы емдеу күшті сигнал береді
(өйткені бірнеше қайталама антиденелер бір бастапқы антиденемен
байланыса алады) және желкек пероксидазасын затбелгі ретінде
қолдану өте сезімтал химилюминесцентті анықтау әдісін қолдануға
мүмкіндік береді. Вестерн бұл процедурасы жасушада бірнеше
молекулалардың мөлшерінде болатын ақуыздарды анықтау үшін
жеткілікті сезімталдыққа ие.
Қорытыды

Ветерн- блотинг (Вестерн блот, ақуыздық иммуноблот, ағылш. West
ern blot) - үлгідегі ерекше ақуыздарды анықтау үшін
қолданылатын аналитикалық әдіс. Бірінші кезеңде ақуыз
электрофорезі полиакриламидті гельде денатуратталған
полипептидтерді ұзындығы бойынша (әдетте SDS болған кезде) не
месе ақуыздың үш өлшемді құрылымы бойынша (туғанкүйінде) бө
лу үшін қолданылады.
Әдебиеттер тізімі
• •1 Сайдулдин Т. Індеттану және жануарлардың жұқпал
ы аурулары. - Алматы: “Полиграфия-сервис К°”, 2009.
– 518 б.
• •2. Сайдулдин Т. Жануарлардың жұқпалы және аса қау
іпті аурулары. - Алматы: “Полиграфия-сервис К°”,
2013. – 520 б.
• •3. Қасымов Е.И. Індеттану және инфекциялық аурулар
мен күресшаралары. – Алматы, 2009.

Ұқсас жұмыстар

Саузерн бойынша блотгибридизациялау

САПАСЫН ТАЛДАУ ӘДІСТЕРІН ИГЕРУ

Тьюринг тезисі және оның негіздемесі. Марковтың нормальды алгоритмы. Нормальдау принциптері және оның негіздемесі. Марковтың нормальды алгоритмі және Тьюринг машинасының композициясы

Оқушыларды ауылшаруашылық техникасына баулуда жаңа технологияларды пайдаланудың әдістемесі

ПРЕЗЕНТАЦИЯ ОҚУШЫЛАРДЫҢ ТАНЫМДЫҚ

Максам Гилберт тізбектеу

Трансгенді ағзалар

ДНҚ тізбегінің реттілігін анықтаудағы классикалық әдістер

ДНҚ диагностикалық әдістер

ДНҚ зерттеу әдістері. ДНҚ диагностикасының тура және көлденең әдістері. ДНҚ – фингерпритинг

Пәндер