ПАРАФИН БЛОКТАРЫНАН СЕКЦИЯЛАРДЫ ДАЙЫНДАУ

Презентация қосу

Бұл микроскоппен зерттеу үшін арнайы шыны кесегінде
дайындалған гистологиялық және цитологиялық
препараттар. Белгілі бір ауруды анықтау үшін олар әртүрлі
бояғыштармен боялады. Стакандарды дайындау үшін
парафинді блок жұқа бөлікке кесіледі
Парафинді блок қалыңдығы 0,5-
тен 10-15 мкм-ге дейін
(қажеттілікке байланысты)
гистологиялық кесінділерді алу
үшін көз ретінде қызмет етеді.
Бөлімдер микротомдардың
көмегімен жасалады. Төмен
профильді немесе жоғары
профильді микротомды
пышақтар бұл жағдайда шығын
материалдары ретінде қызмет
етеді.
IHC үшін алынған кесінділер теріс зарядталған арнайы
стақандарға орналастырылады. Гистологиялық кесінділері
бар мұндай белгіленген микропрепараттар көп сатылы
бояу кезінде өңдеуге ұшырайды. Иммуногистохимиялық
бояуға маңызды дайындық кезеңі депарафинизация
процедурасы - гистологиялық кесінділерден парафинді алу
болып табылады. Үлгіні дайындау кезінде парафинді
кетірудің жеткіліксіздігі реагенттердің антигендерге енуін
болдырмайды және осылайша үлгілердің әлсіз боялуына
әкеледі.
Патологиялық-анатомиялық сараптамадан алынған
гистологиялық препараттар мен материалдардың
парафинді блоктары 3 жыл сақталады және акт жасамай
жойылады.
ПАРАФИН БЛОКТАРЫНАН СЕКЦИЯЛАРДЫ ДАЙЫНДАУ

Кесу.

Ағаш блокқа жапсырылған парафинді блок микротомды
қысқышқа мықтап бекітілген, оның ұзын осі микротомның
ұзындығына параллель. Содан кейін қажетті кесу бұрышын
және пышақтың дұрыс көлбеу бұрышын орнатып, ол
бұрандалы қысқыштармен мықтап бекітіліп, блоктың үстіне
қойылады. Осыдан кейін бұрандаларды, беру механизмін
реттей отырып, блок оның жоғарғы жазықтығы көлденең
күйде және пышақ жүзіне 0,5-1 мм жетпейтіндей етіп
орнатылады.
Блокты пышаққа алдын ала реттеу аяқталғаннан кейін
микрометр шкаласы қалың (25-30 мкм) кесінділерді алу
үшін орнатылады және пышақ сырғымасын жылжыту
арқылы олар блокты бірінші толық кесулер алынғанша
бере бастайды. одан. Содан кейін блок имитацияланады:

су басқан объектінің айналасында 2-3 мм аспайтын қабат
қалдырып, артық парафинді скальпельмен кесіп тастаңыз
және блокқа төртбұрышты пішін беріңіз. Осыдан кейін
микрометрлік шкаланы қажетті кесу қалыңдығына
орнатыңыз және материалдың соңғы кесілуіне өтіңіз.
Есте сақтау керек, пышақ сырғанауының рейстік жол
бойымен көзғалысы біркелкі жане артық күш жұмсамай
жасаса керек. Тұтқаны жоғарыдан баспаңыз, өйткені бүл
жылжымалы жақсырақ арасындағы май қабатының
жылжуына жане пышақтың төмендеуіне әкеледі,
нәтижесінде кесулер біркелкі емес. блоктын устинен оту
кезинде микротомды пышактын козгалысы жылдам
орнындалу керек.

Окытуда лаборант калындыгы 14-16 микрон гистология
кесінділерди дайындаудан бастаганы дурыс жане кесу
техника сон менгерген сайын бірте-бірте кесінділер
калындыгын азайткан жо.
Бөлмедегі оңтайлы температурада дұрыс толтырылған
органдар мен тіндердің кішкене бөліктері жақсы кесіледі
және кесу, әдетте, түзетілген күйде пышаққа жатады (кесу
бұрышы түзу). Үлкен блоктарды және қатты материалды
кесу кезінде кесу жиі бұралып қалады. Дегенмен, кесу
процесінде щеткамен кесілген жерді алдыңғы жиегінен
ұстап, көтеру арқылы мұны болдырмауға болады.
Кесудің пышаққа басылмауын қамтамасыз ету керек,
өйткені бұл жағдайда оны желімдеу және зақымдау орын
алады. Дайын кесінді пышақтан дымқыл щеткамен (артқы
жағынан пышаққа қарай) мұқият алынып тасталады және
дайындалған слайдқа немесе жылы (Z5—40°C) тазартылған
суы бар шыныаяққа ауыстырылады. Кесектердің төменгі
бетінде ауа көпіршіктерінің пайда болуын болдырмау үшін
су алдын-ала қайнатылады (оны суда ерітуге болады), бұл
кесектердің әйнекке біркелкі жабысуына жол бермейді.
Кесінділер суға (слайдқа) пышаққа іргелес бетпен
орналастырылуы керек, оны тән жылтырлығымен
анықтауға болады (жоғарғы жағы әрдайым күңгірт).
Кесу кезінде щеткадан шыққан түктер пышақтың кесу
жиегінің астына түспеуін қамтамасыз ету керек, себебі бұл
пышақтың зақымдалуына әкеледі. Бірқатар зерттеулер
үшін сериялық бөлімдерді алу қажет. Слайдқа желімдеу
кезінде сериялық бөлімдердің ретін шатастырмау өте
маңызды. ол үшін кесілген таспаны скальпельмен слайдтың
ұзындығы шамамен % болатын жеке фрагменттерге кесіп,
әрқашан әйнектің бойымен немесе бойымен белгілі бір
тәртіппен орналастырады . Объектінің көлеміне және
слайдтың мөлшеріне байланысты бір әйнекте әртүрлі
кесінділер саны болуы мүмкін (2-4-тен 25-30-ға дейін).
Парафинді блоктарда биопсия кезінде алынған тін дұрыс
температура режимі сақталған жағдайда өте ұзақ уақыт
сақталуы мүмкін. Блоктарды қайталанатын
иммунологиялық, жасушалық, ісіктің генетикалық
зерттеулері үшін пайдалануға болады. Бұл дұрыс емдеу
әдісін таңдауда өте маңызды болуы мүмкін.Әртүрлі
клиникаларда және әлемнің әртүрлі елдерінде зерттеу
әдістері өте көп және зерттеу жүргізу мүмкіндіктері бірдей
емес екенін түсіну керек. Оның үстіне ісіктерді емдеуге
арналған жаңа препараттар пайда болды. Сондықтан
бастапқы диагноздан кейін бірнеше жылдан кейін тіндерді
қайта талдау қажет болуы мүмкін және емдеуді таңдауға
әсер етеді.
Жасушалық және тіндік деңгейде патологиялық
процестерді зерттеу микроскопиялық зерттеулерді қолдану
арқылы жүзеге асырылады. Гистологиялық зерттеу әдісі
қалыпты жағдайдағы, патологиялық және тәжірибелік
кезеңдегі жасушалардың құрылымы мен қызметін зерттеу
үшін қажет. Гистологиялық зерттеу үшін тіндер мен
мүшелердің элементтері алынады. Сынақ үлгісінің
қалыңдығы 1 см3 аспауы керек
Тіндердің үлгілерін адам қайтыс болғаннан кейін бірден
алуға болады (соғұрлым тезірек жақсырақ) - аутопсия.
Сондай-ақ, материалды хирургиялық араласу кезінде
немесе арнайы құралдарды - биопсияны пайдаланып
тікелей диагностикалық мақсаттарда алуға болады.Үлгіні
дайындауҮлгіні дайындау бірнеше кезеңнен
тұрады:Материалды бекіту.Дайындауды кесу.Кесу процесі.
Материалды бекітудің мәні тіндер мен жасушалардағы
табиғи процестерді тоқтату болып табылады. Бұл тіндердің
құрылымындағы ыдырау процесін және ферментативті
өзгерістерді уақытында тоқтату үшін қажет.Физикалық-
химиялық процестерге байланысты бекітілген тіндерде
белоктар мен липоидты компоненттің коагуляциясы
(коагуляциясы) жүреді. Бұл күй тіндердің әртүрлі әсерлерге
реакциясыз ұзақ уақыт бойы өзгеріссіз сақталуына
мүмкіндік береді. Қарапайым тілмен айтқанда, тіндерді
бекіту биологиялық материалдың интравитальді
құрылымын сақтау үшін жүзеге асырылады.
Тіндерді бекіту үшін арнайы сұйықтықтар (бекіткіштер)
қолданылады. Ең танымал бекіткіштерге келесі сұйықтық
нұсқалары кіреді:Формальдегид.Алкоголь (96, 100%).Ось
қышқылы.Жоғарыда айтылғандар қарапайым бекіткіштер.
Сондай-ақ тіндерді бекіту үшін фиксаторлардың
(ерітінділердің) күрделі нұсқалары қолданылады:
Алкоголь-формол.Зенкер сұйықтығы.Калий бихроматы.
Иммуногистохимиялық зерттеу жүргізу үшін парафин
блогында бекітілген және қоршалған тін үлгісі
қолданылады. Биологиялық материалы бар парафин
блогын ұзақ уақыт сақтауға болады, бұл кез келген уақытта
иммуногистохимиялық талдауға мүмкіндік береді.
Парафинді блоктарды қолданған кезде антигендерді
қалпына келтіру үшін реактивтерді қолдану қажеттілігін
ескеру қажет, (trilogy және Declere ұсынылған реактивтері),
өйткені формалинді бекіту және парафинді құю
процедурасы сияқты Материалды өңдеу қадамдары
қажетті антигендердің қол жетімділігінің төмендеуіне
әкеледі.
Архивтік материалды талдау кезінде биоүлгілерді сақтау
мерзімдері мен шарттарын ескеру қажет. Сонымен, M.
Economou c бірлескен автор. (2014) парафин блоктарын
бөлме температурасында сақтағаннан кейін IGH бояу
нәтижелерінің айтарлықтай нашарлауын атап өтті, бұл
жалған теріс нәтижелерге әкеледі. Антигендерге зиянды
әсер сақтау ұзақтығы, Тотығу реакциясы, гидролиз, толық
сым уақыты, күн сәулесінің әсері, бекіту уақыты, бекіту түрі
сияқты факторларға әсер етеді.Парафин блогы қалыңдығы
0,5-тен 10-15 мкм-ге дейін (қажеттілікке байланысты)
гистологиялық бөлімдерді алу үшін көз ретінде қызмет
етеді. Бөлімдер микротомдардың көмегімен жасалады.
Төмен немесе жоғары профильді микротомды пышақтар
бұл жағдайда шығын материалдары ретінде қызмет етеді.
ИГХ үшін алынған кесінділер арнайы теріс зарядталған
шыныларға орналастырылады. Гистологиялық тілімдері бар
мұндай таңбаланған микропрепараттар көп сатылы бояу
кезінде өңделеді. Иммуногистохимиялық бояудың
маңызды дайындық кезеңі-депарафинизация процедурасы
- парафинді гистологиялық бөлімдерден шығару. Үлгіні
дайындау кезінде парафинді жеткіліксіз алып тастау
Реактивтердің антигендерге енуіне кедергі келтіруі мүмкін
және осылайша үлгілердің әлсіз боялуына әкелуі
мүмкін.Ұзақ мерзімді сақтау қажет болған жағдайда
антигендердің жақсы сақталуы үшін M. Economou c
бірлескен. (2014) бөлімдерді парафинді "пленкада"
тоңазытқышта +4с температурада ұстауды ұсынады.
Олардың айтуынша, бұл антигеннің жоғалуына жол
бермейді.

Ұқсас жұмыстар

Аммалық - селитті жарылғыш заттар

Құю парафин

Парафинді нысандарды кесекшеге құю

Эмульсиялық майлар және суппозиторийларды дайындау технологиясы

Гистологиялық препараттарды дайындау әдістері

Балқитын үлгіге құю

Пластырлер түсінігі

Политетрафторэтиленнің қасиеттері

Швейцариялық ірімшік

Абразивті құралдармен өңдеу

Пәндер