Парафинді нысандарды кесекшеге құю

Химиялық заттар мен реактивтер. Нысандарды гистологиялық кескіндер жасауға дайындау

Орындаған:Темір Аида

Сыдық Жазира

Тексерген:Корбозова Назым

Әл-Фараби атындағы Қазақ Ұлттық университеті

Биология және биотехнология факультеті

Жоспар

Парафинге сіңіру және құю

Сусыздандыру

Парафинді сіңдіру

Парафиндер

Парафин ГОСТ 23683-89

П-2 маркалы Парафи

Парафин-воск ГОСТ 21179-2000

Парафин дайындау

Парафинді нысандарды кесекшеге құю

Целлоидин сұйықтығын дайындау

Тілінділерді целлоидиндеу

Целлоидин-парафинге сіңдіру

Сусыздандыру

Бұл әдісті жүргізу үшін, кеңірек әрі қақпағы тығыздалып жабылатын стакандарды этикеткалап, оған күштілігі жоғарылай (50°, 60°, 70°, 80°, 90°, 2 өлшем 96° және 100°) түсетін спиртті құю қажет.

Қақпағы тығыздалып жабылатын стакандар

Парафинге сіңіру және құю

Зерттеліп жатқан затты бекіткіш қалдығынан тазартып, жуу керек. Бұл әдіс, бекіткіш қалдықтарынан толық тазартуды көздейді. Затты бекіту үшін әртүрлі қоюлықтағы ерітінділер қолданылатындықтан, ағза тілінділерін сумен 5-24 сағат жуу қажет. Содан соң оларды парафинге қатыру үшін сусыздандырып, құрғату керек.

осми қышқылы

формалин

Абсолютті этил спиртін дайындау әдісі

Күйдірілген мыс сульфатының ұнтағын (100 мл этанолға шамамен 10 г) таза шыны бөтелкеге құйып, 96% этанол сол жерге құйылады. Содан кейін бөтелке ұнтақ біркелкі бөлінгенше шайқалады. Мұндай процедура 1-2 күн бойы қайталанады.

Егер зертханада мыс сульфатының ұнтағы болмаса, оны Фарфор шыныаяқтағы оттың үстіне кристалды тұзды күйдіру арқылы өзіңіз дайындауға болады (көк кристалдардан ақ ұнтақ пайда болғанша) .

Егер препарат суда жуылса, онда сусыздандыру 50% спирттен басталады, ал егер Ценкер сұйықтығынан кейін және т. б. болса, онда объект кейінгі күшті спиртке орналастырылады (70%- дан 80% - ға дейін және т. б. ) . Жұқа мөлшердегі цитологиялық зерттеулерде дегидратация 10-20% спирттерден басталады. Бөлшектердің жеке спирттерде болу уақыты олардың мөлшері мен қасиеттерімен анықталады. Орташа мөлшердегі объектілерді (қалыңдығы 5 мм) әлсіз спирттерде (60% дейін) 2-4 сағаттан, ал күшті спирттерде - 12-ден 24 сағатқа дейін ұстау жеткілікті.

Сусыздандыру процесінде қателіктер жіберілуі мүмкін:

толық сусыздандыру кезінде тығыздау;

сусыздандыру жеткіліксіз болған кезде қалыпты тығыздау.

Сондай-ақ, сусыздандыру процесінде спирттер тіндерден алынған заттармен, әсіресе майлармен тез ластанатынын ескеру қажет. Бірдей спиртті ұзақ уақыт қолдануға болмайды. Оларды уақтылы өзгерту керек

Ұлпа

спирті кұштілігі

Ұақыт (мин)

Паренхиматозды (бауыр, өкпе, бұйрек) ұлпалар, көлемі 1х1 см.

Этил спирті 70°

Этил спирті 80°

Этил спирті 90°

Этил спирті 96° бірінші порция

Этил спирті 96° екінші порция

Абсолютті (изубутил немесе изопропил спирті) 100° бірінші порция

Абсолютті (изубутил немесе изопропил спирті) 100° екінші порция

Түссіздендіру:

Ксилол 1 бірінші порция

Ксилол ІІ екінші порция

Парафин сіңдіру:

Парафин І бірінші порция

Парафин ІІ екінші порция

Парафин - воск

1 сағат

Бұлшық ет ұлпаны сусыздандыру, көлемі 1х1 см.

Этил спирті 70°

Этил спирті 80°

Этил спирті 90°

Этил спирті 96° бірінші порция

Этил спирті 96° екінші порция

Абсолютті (изубутил немесе изопропил спирті) 100° бірінші порция

Абсолютті (изубутил немесе изопропил спирті) 100° екінші порция

Түссіздендіру:

Ксилол 1 бірінші порция

Ксилол ІІ екінші порция

Парафин сіңдіру:

Парафин І бірінші порция

Парафин ІІ екінші порция

Парафин - воск

30 мин

30мин

20 мин

1 сағат

Парафин сіңдіру

Спиртті жою үшін материалды абсолютті спирт пен хлороформның (1:1) қоспасына 1-3 сағатқа салып, содан кейін таза хлороформда ұстайды. Спиртті жою процесінде хлороформды 1-3 сағат арасында 2-3 рет ауыстырып тұрған да жөн. Бөлшектердің көлемі кішірек (1 х 1) болса, оны хлороформда 30 минуттан артық ұстамау қажет.

Тілінділерді термостат ішіндегі, алдын-ала ерітіліп, дайындалған парафиндердің 2-3 мөлшеріне салып, 3-4 сағаттай уақытта сіңіреді.

Парафиндер Парафин ГОСТ 23683-89

Парафин - С18-С35 жоғары молекулалық көмірсутектерінің қоспасы, негізінен мұнайды айдау кезінде алынған алифатты қалыпты құрылым.

П-2 маркалы Парафин

Жоғары тазартылған парафин, төмен температурада икемділікті сақтайтын тамақ өнімдерінің икемді қаптамасын жабу және сіңдіру үшін, сондай-ақ тамақ өнімдерін сақтауға арналған, бетон, металл ыдыстарды жабуға арналған қорытпалардың компоненттері ретінде қолданылады; әртүрлі балауыз композицияларын өндіруде; медициналық техника бұйымдары және косметикалық препараттар жасауда қолданылады.

Парафин-воск ГОСТ 21179-2000

Егер парафин тиісті дайындыққа қарамастан қаттылықты сақтаса, оған 2-5% таза воск қосу керек, бұл парафинге үлкен серпімділік береді.

Табиғи балауыздар - жануар немесе өсімдік тектес май тәрізді заттар. Табиғи балауыз май қышқылдарының күрделі эфирлерінен және бір немесе екі атомды жоғары спирттерден тұрады; құрамында бос жоғары спирттер, көмірсутектер және май қышқылдары бар.

Парафин дайындау

Көп жағдайда балқу температурасы 54-56 °С болатын парафин құю үшін қолданылады . Егер қоршаған ортаның төмен температурасында болса, онда балқу температурасы төмен (48-50 °C) парафинді қолданған дұрыс.

Нашар парафинді алу жолдары

Парафинді 1-2 см бөлшектерге кесіп, термостаттың үстіңгі бөлігіне 2 қабатты дәкеге салып, іліп қояды (темп. 58°С-60°С) . Оның жартысы еріп, ыдысқа аққаннан кейін, дәкеде ерімейтін бөлігі ғана қалады, сөйтіп жұмсақ парафиннің бірыңғай фракциясын алады. Серпімділігін көбейту үшін парафинге шамамен 0, 5% ара немесе тістік балауызын қосу керек. Парафинді еріту термостатта немесе ыстық суда жүргізіледі. Отта немесе электроплитада ерітсе, ол қатты сарғайып кетеді.

Спиртті ығыстыру қабілеті бар парафинді еріткіштердің бірімен өңделеді. Бұл заттарға хлороформ, бензол, толуол, ксилол, күкіртті көміртегі, мұнай эфирі, төрт хлорлы көміртек (CCl4) жатады.

Спиртті кетіру процесінде ксилол 1-3 сағат ішінде 2-3 рет өзгереді (заттың қасиеттеріне және бөліктердің қалыңдығына байланысты) . 1 х 1 см бөліктің шамасында оны ксилолда 30 минут ұстайды, содан кейін ксилолды парафинмен біртіндеп алмастыру принципін сақтай отырып, зат парафиннің (жақсырақ жұмсақ) және ксилолдың тең бөліктерінің қоспасына орналастырылады. Бөлме температурасында қатып қалған бұл қоспа 37 °C дейін қызған кезде ериді және сұйық консистенцияға ие болады. Бөлшектер ксилол-парафинде 37 °C температурада 3-6 сағат ішінде болады (56 °C температурада уақыт 30 мин - 1 сағатқа дейін қысқарады) . Қажет болса, материалды одан әрі өңдеуді кейінге қалдыруға болады, объектіні парафинмен ксилол қоспасына батырғаннан кейін, ыдысты термостаттан шығарып, бөлме температурасында түнде (немесе тіпті бірнеше күн) жабық күйде қалдырыңыз, содан кейін 56 °C температурада термостатта қайтадан балқытып, жақын жерде ыстық парафинге жіберіңіз. Нысанның еріген ксилол-парафинде шамадан тыс болуы кесу сапасын нашарлатады.

Парафинді нысандарды кесекшеге құю

Парафин сіңірген бөліктерді кесекшелерге құяды. Нысандар кішкене болса, сағат шынысына құюға болады, тек оның түбіне глицерин жағу керек. Одан ірі нысандарды, көлемі олардан 4-5 есе үлкен қағаздан жасап қайыққа құяды.

Нысандарды кесекшеге құюды термостаттың жанында істеу керек. Керекті Петри табақшасын суымен, іскек, спирт шамы, препараттық инені дайындап алады. Ауа көпіршіктерін болдырмау үшін қыздырылған қалақшамен дұрыстап тұру керек.

Нысандарды кесекшеге құю үшін арналған қайық жасау жобасы.

Целлоидин сұйықтығын дайындау

Нағыз целоидин дегеніміз коллоидты нитроклетчатканың жоғарғы сорты, ол қалайыдан жасалған ыдыста желатин тәрізді, жартылай мөлдір түсті түрінде сатылады. Бұл пластинкаларды қолданар алдында ұсақтап, сүзгіш қағаздар арасында t=+37°+40° құрғатып, абсолютті спиртке спирт эфир (1:1) қосып, сұйықтық жасау керек: бірінші өлшемі қоюлығы ара балындай, (8-10%), ал екінші глицерин қоюлығындай (4-5%) сұйықтық жасалады. Ол үшін қою целлоидин сұйықтығына (8-10%), абсолютті спирт және эфир қосу керек (1:1) .

Тілінділерді целлоидиндеу

Ағза тілімдерін сусыздандыру күштілігі жоғарылай түсетін спирттерде өтеді, содан соң 96° спирт-эфир (1:1) қоспасына ұзақтығы 6-24 сағаттай салып қояды.

Ағза тілінділерін ағынды суда жуу

24 сағат

Күші өсе түсетін спирттерде сусыздандыру

12-24 сағат

2 өлшем абсолютті спирт

12-24 сағат

Ұқсас жұмыстар

Құю парафин

ПАРАФИН БЛОКТАРЫНАН СЕКЦИЯЛАРДЫ ДАЙЫНДАУ

Балқитын үлгіге құю

Мұнайдың химиялық және технологиялық жіктелуі

Гистологиялық препараттарды жасау және бояу әдістері