Парафинді нысандарды кесекшеге құю

Презентация қосу

Әл-Фараби атындағы Қазақ Ұлттық
университеті
Биология және биотехнология
факультеті

Химиялық заттар мен реактивтер.
Нысандарды гистологиялық
кескіндер жасауға дайындау

Орындаған:Темір Аида
Сыдық Жазира
Тексерген:Корбозова Назым
Жоспар
⮚ Парафинге сіңіру және құю
⮚ Сусыздандыру
⮚ Парафинді сіңдіру
⮚ Парафиндер
✔ Парафин ГОСТ 23683-89
✔ П-2 маркалы Парафи
✔ Парафин-воск ГОСТ 21179-2000
⮚ Парафин дайындау
⮚ Парафинді нысандарды кесекшеге құю
⮚ Целлоидин сұйықтығын дайындау
⮚ Тілінділерді целлоидиндеу
⮚ Целлоидин-парафинге сіңдіру
Сусыздандыру
Бұл әдісті жүргізу үшін, кеңірек әрі қақпағы тығыздалып
жабылатын стакандарды этикеткалап, оған күштілігі жоғарылай
(50°, 60°, 70°, 80°, 90°, 2 өлшем 96° және 100°) түсетін спиртті
құю қажет.

Қақпағы тығыздалып жабылатын стакандар
Парафинге сіңіру және құю
Зерттеліп жатқан затты бекіткіш қалдығынан тазартып, жуу
керек. Бұл әдіс, бекіткіш қалдықтарынан толық тазартуды
көздейді. Затты бекіту үшін әртүрлі қоюлықтағы ерітінділер
қолданылатындықтан, ағза тілінділерін сумен 5-24 сағат жуу
қажет. Содан соң оларды парафинге қатыру үшін
сусыздандырып, құрғату керек.

осми
формалин
қышқылы
Абсолютті этил спиртін дайындау әдісі
Күйдірілген мыс сульфатының ұнтағын (100 мл этанолға
шамамен 10 г) таза шыны бөтелкеге құйып, 96% этанол сол
жерге құйылады. Содан кейін бөтелке ұнтақ біркелкі бөлінгенше
шайқалады. Мұндай процедура 1-2 күн бойы қайталанады.
Егер зертханада мыс
сульфатының ұнтағы болмаса,
оны Фарфор шыныаяқтағы
оттың үстіне кристалды тұзды
күйдіру арқылы өзіңіз
дайындауға болады (көк
кристалдардан ақ ұнтақ пайда
болғанша).
Егер препарат суда жуылса, онда сусыздандыру 50% спирттен басталады, ал егер
Ценкер сұйықтығынан кейін және т.б. болса, онда объект кейінгі күшті спиртке
орналастырылады (70%- дан 80% - ға дейін және т. б.). Жұқа мөлшердегі
цитологиялық зерттеулерде дегидратация 10-20% спирттерден басталады.
Бөлшектердің жеке спирттерде болу уақыты олардың мөлшері мен қасиеттерімен
анықталады. Орташа мөлшердегі объектілерді (қалыңдығы 5 мм) әлсіз спирттерде
(60% дейін) 2-4 сағаттан, ал күшті спирттерде — 12-ден 24 сағатқа дейін ұстау
жеткілікті.
● Сусыздандыру процесінде қателіктер жіберілуі мүмкін:
○ толық сусыздандыру кезінде тығыздау;
○ сусыздандыру жеткіліксіз болған кезде қалыпты
тығыздау.

Сондай-ақ, сусыздандыру процесінде спирттер тіндерден
алынған заттармен, әсіресе майлармен тез ластанатынын
ескеру қажет. Бірдей спиртті ұзақ уақыт қолдануға
болмайды. Оларды уақтылы өзгерту керек
Ұлпа спирті кұштілігі Ұақыт (мин)
Паренхиматозды (бауыр, өкпе, Этил спирті 70° 20
бұйрек) ұлпалар, көлемі 1х1 см. Этил спирті 80° 20
Этил спирті 90° 20
Этил спирті 96° бірінші порция 20
Этил спирті 96° екінші порция 20
Абсолютті (изубутил немесе изопропил спирті) 100° бірінші 20
порция 15
Абсолютті (изубутил немесе изопропил спирті) 100° екінші
порция 15
Түссіздендіру:
Ксилол 1 бірінші порция 15
Ксилол ІІ екінші порция 15
Парафин сіңдіру:
Парафин І бірінші порция 1 сағат
Парафин ІІ екінші порция 1 сағат
Парафин – воск 1 сағат
Бұлшық ет ұлпаны сусыздандыру, Этил спирті 70° 30 мин
көлемі 1х1 см. Этил спирті 80° 30 мин
Этил спирті 90° 30 мин
Этил спирті 96° бірінші порция 30 мин
Этил спирті 96° екінші порция 30мин
Абсолютті (изубутил немесе изопропил спирті) 100° бірінші
порция 20 мин
Абсолютті (изубутил немесе изопропил спирті) 100° екінші
порция 20 мин
Түссіздендіру:
Ксилол 1 бірінші порция 15
Ксилол ІІ екінші порция 15
Парафин сіңдіру:
Парафин І бірінші порция 1 сағат
Парафин ІІ екінші порция 1 сағат
Парафин – воск 1 сағат
Парафин сіңдіру
Тілінділерді термостат ішіндегі, алдын-ала ерітіліп,
дайындалған парафиндердің 2-3 мөлшеріне салып, 3-4
сағаттай уақытта сіңіреді.

Спиртті жою үшін материалды абсолютті спирт пен
хлороформның (1:1) қоспасына 1-3 сағатқа салып, содан кейін
таза хлороформда ұстайды. Спиртті жою процесінде
хлороформды 1-3 сағат арасында 2-3 рет ауыстырып тұрған да
жөн. Бөлшектердің көлемі кішірек (1 х 1) болса, оны
хлороформда 30 минуттан артық ұстамау қажет.
Парафиндер
Парафин ГОСТ 23683-89
● Парафин — С18-С35 жоғары молекулалық
көмірсутектерінің қоспасы, негізінен мұнайды айдау кезінде
алынған алифатты қалыпты құрылым.

• бензин
• эфир
Прафиндер
• май және эфир
майлары
П-2 маркалы Парафин
Жоғары тазартылған парафин, төмен температурада икемділікті
сақтайтын тамақ өнімдерінің икемді қаптамасын жабу және
сіңдіру үшін, сондай-ақ тамақ өнімдерін сақтауға арналған,
бетон, металл ыдыстарды жабуға арналған қорытпалардың
компоненттері ретінде қолданылады; әртүрлі балауыз
композицияларын өндіруде; медициналық техника бұйымдары
және косметикалық препараттар жасауда қолданылады.
Парафин-воск ГОСТ 21179-2000

Егер парафин тиісті дайындыққа қарамастан қаттылықты
сақтаса, оған 2-5% таза воск қосу керек, бұл парафинге үлкен
серпімділік береді. Табиғи балауыздар - жануар
немесе өсімдік тектес май тәрізді
заттар. Табиғи балауыз май
қышқылдарының күрделі
эфирлерінен және бір немесе екі
атомды жоғары спирттерден
тұрады; құрамында бос жоғары
спирттер, көмірсутектер және
май қышқылдары бар.
Парафин дайындау

• Парафиннің бірнеше сорттары
Бөлме бар:
температурасында • жұмсақ (балқу температурасы
ғы Парафин-
45-54 °C )
қатты, біртекті
зат. • қатты (балқу температурасы
58-60 °C).

Көп жағдайда балқу температурасы 54-56 °С болатын
парафин құю үшін қолданылады . Егер қоршаған ортаның
төмен температурасында болса, онда балқу температурасы
төмен (48-50 °C) парафинді қолданған дұрыс.
Нашар парафинді алу жолдары
Парафинді 1-2 см бөлшектерге кесіп, термостаттың үстіңгі
бөлігіне 2 қабатты дәкеге салып, іліп қояды (темп. 58°С-60°С).
Оның жартысы еріп, ыдысқа аққаннан кейін, дәкеде ерімейтін
бөлігі ғана қалады, сөйтіп жұмсақ парафиннің бірыңғай
фракциясын алады. Серпімділігін көбейту үшін парафинге
шамамен 0,5% ара немесе тістік балауызын қосу керек.
Парафинді еріту термостатта немесе ыстық суда жүргізіледі.
Отта немесе электроплитада ерітсе, ол қатты сарғайып кетеді.
Парафинге құю екі негізгі
шартты мұқият
орындауды талап етеді:
• 1) препарат толығымен
сусыздануы керек,
• 2) құрамында спирт
болмауы керек.

Спиртті ығыстыру қабілеті бар парафинді еріткіштердің
бірімен өңделеді. Бұл заттарға хлороформ, бензол,
толуол, ксилол, күкіртті көміртегі, мұнай эфирі, төрт
хлорлы көміртек (CCl4) жатады.
Спиртті кетіру процесінде ксилол 1-3 сағат ішінде 2-3 рет өзгереді
(заттың қасиеттеріне және бөліктердің қалыңдығына байланысты). 1 х 1
см бөліктің шамасында оны ксилолда 30 минут ұстайды, содан кейін
ксилолды парафинмен біртіндеп алмастыру принципін сақтай отырып,
зат парафиннің (жақсырақ жұмсақ) және ксилолдың тең бөліктерінің
қоспасына орналастырылады. Бөлме температурасында қатып қалған бұл
қоспа 37 °C дейін қызған кезде ериді және сұйық консистенцияға ие
болады. Бөлшектер ксилол-парафинде 37 °C температурада 3-6 сағат
ішінде болады (56 °C температурада уақыт 30 мин — 1 сағатқа дейін
қысқарады). Қажет болса, материалды одан әрі өңдеуді кейінге қалдыруға
болады, объектіні парафинмен ксилол қоспасына батырғаннан кейін,
ыдысты термостаттан шығарып, бөлме температурасында түнде (немесе
тіпті бірнеше күн) жабық күйде қалдырыңыз, содан кейін 56 °C
температурада термостатта қайтадан балқытып, жақын жерде ыстық
парафинге жіберіңіз. Нысанның еріген ксилол-парафинде шамадан тыс
болуы кесу сапасын нашарлатады.
Парафинді нысандарды кесекшеге құю

Парафин сіңірген бөліктерді кесекшелерге құяды. Нысандар
кішкене болса, сағат шынысына құюға болады, тек оның түбіне
глицерин жағу керек. Одан ірі нысандарды, көлемі олардан 4-5 есе
үлкен қағаздан жасап қайыққа құяды.
⮚ Нысандарды кесекшеге құюды термостаттың жанында
істеу керек. Керекті Петри табақшасын суымен, іскек,
спирт шамы, препараттық инені дайындап алады. Ауа
көпіршіктерін болдырмау үшін қыздырылған қалақшамен
дұрыстап тұру керек.
Нысандарды кесекшеге құю үшін арналған
қайық жасау жобасы.
Материал өте ұсақ болса, оны жоғалтып алмау үшін, келесі
әдісті қолдануға болады

• Центрифуга пробиркасына материалды салып, оған
бекітуші сұйықтықты құйып, центрифугаға салады.
Материалды бояу қажет болмаса, оны жуған соң, күші
жоғарылайтын спирт тізбегінен өткізіп, ағартып, әр
сұйықтықта центрифугаға 1-2 минутқа салып, парафинге
құяды. Сағат әйнегіне ерітілген парафинді құйып, оны
қатырады. Содан кейін парафиннің ортасында шұңқыр
жасап, пробиркаға құяды.
• Ұсақ нысандарды кесекшеге құю үшін шыны түтікшелерді
пайдалануға болады. Бір жағын жұқа капрон немесе
планктон торымен байлап, екінші жағынан нысанды құю
керек. Парафинге сіңіруді термостатта өткізіп, уақыты
біткенше суық суда ұстау керек.
Целлоидин сұйықтығын дайындау

Нағыз целоидин дегеніміз коллоидты нитроклетчатканың
жоғарғы сорты, ол қалайыдан жасалған ыдыста желатин тәрізді,
жартылай мөлдір түсті түрінде сатылады. Бұл пластинкаларды
қолданар алдында ұсақтап, сүзгіш қағаздар арасында
t=+37°+40° құрғатып, абсолютті спиртке спирт эфир (1:1)
қосып, сұйықтық жасау керек: бірінші өлшемі қоюлығы ара
балындай , (8-10%), ал екінші глицерин қоюлығындай (4-5%)
сұйықтық жасалады. Ол үшін қою целлоидин сұйықтығына (8-
10%), абсолютті спирт және эфир қосу керек (1:1).
Тілінділерді целлоидиндеу
Ағза тілімдерін сусыздандыру күштілігі жоғарылай түсетін
спирттерде өтеді, содан соң 96° спирт-эфир (1:1) қоспасына
ұзақтығы 6-24 сағаттай салып қояды.
1 Ағза тілінділерін ағынды суда 24 сағат
жуу
2 Күші өсе түсетін спирттерде 12-24 сағат
сусыздандыру
3 2 өлшем абсолютті спирт 12-24 сағат
4 Спирт-эфирде (1:1) 4-20 сағат
5 2% целоидин сұйығында 2-6 күн
6 4-6% целоидинде 2-6 күн
7 Қою 8-10%-тік целоидинде 2-7 күн

Бұл әдісті мезенхимды ағзалар мен кесу уақытында үгітіліп
кететін ағзаларға (трахея, тері т.б.) қолдануға болады.
Целлоидин-парафинге сіңдіру

Спирт-эфирден кейін кесекшелердің сіңіруі 1-3 күн 2%
целлоидинмен тең мөлшерлі кастор майы бар қоспада жүреді.
Келесі кезеңде әрбір сағат сайын 3 рет хлороформды
ауыстырып отырып, ағза тілінділерінен кастор майын жою.
Одан кейін кесекшеге парафин сіңіру және құю стандартты
әдіс бойынша жүргізіледі.
Зертханада тек арнайы Халатпен, сондай-ақ қолғап пен
респиратормен жұмыс істей аласыз. Арнайы киімсіз зертханаға
кіруге тыйым салынады. сөйлесулер мен шуларға көңіл бөлуге
болмайды, өйткені қауіпті заттармен жұмыс көп көңіл бөлуді
қажет етеді. Жұмыс кезінде жүгіруге, айғайлауға, қолды
бұлғауға және кенет қозғалыстар жасауға
болмайды.Зертханада денсаулыққа қауіпті заттар
болғандықтан, мұндай бөлмеде ішу және тамақтану қатаң
түрде ұсынылмайды.
Химиялық заттарды зертханада
сақтау ережелеріҚауіпсіздікті
қамтамасыз ету үшін реагенттерді
тікелей зертханада дұрыс сақтау
маңызды:
біріншіден, олардың саны көп
болмауы керек;екіншіден,
заттардың әр тобы олардың әрекет
ету қабілетіне қарай сақталады.
Бір-бірімен әрекеттесетін заттарды шкафтар мен
сөрелерге бір-біріне жақын орналастыруға болмайды.
Концентрлі қышқылдар полимерлі тығындары бар шыны
ыдыстарда сақталады. Контейнер мүмкіндігінше тығыз
жабылуы керек.Концентрлі сілтілер полиэтилен
ыдыстарда қышқылдардан алыс сақталады. Егер заттың
қатты иісі болса, иістердің таралмауы үшін резеңке
тығыны бар ауа өткізбейтін ыдыста сақталады.
Қорытынды Зертханада жұмыс істеудің қауіпсіздік
ережелері жұмыс істейтін өрт сөндіргіштердің (соның
ішінде көмірқышқыл газын), алғашқы медициналық көмек
көрсету үшін қажет болуы мүмкін дәрі-дәрмектері бар
алғашқы медициналық көмек қобдишаларының болуы
міндетті екенін көрсетеді. Жанғыш заттарды қолданып
зерттеу жүргізу кезінде көрпелер мен киіз төсеніштер
қажет.

Ұқсас жұмыстар

Құю парафин

ПАРАФИН БЛОКТАРЫНАН СЕКЦИЯЛАРДЫ ДАЙЫНДАУ

Балқитын үлгіге құю

Мұнайдың химиялық және технологиялық жіктелуі

Гистологиялық препараттарды жасау және бояу әдістері

Гидростатикалық деңгей өлшеуіш

Мұнай және газ өнкәсібі

Жекешелендірудің инвистициялық купондары мен жекешелендіру

Тірі жасушалар мен тіндерді зерттеу тәсілдері

Суретті слайдтың өзінен кірістіру оңай

Пәндер