Гистологиялық техника, Гистологиялық материалды жануарлардан алу

Презентация қосу

Гистологиялық техника,
Гистологиялық материалды
жануарлардан алу. Бекіту
Жоспар:
1. Гистологиялық техника
2. Лабораториялық құрал-жабдықтар
3. Гистологиялық препарат жасау
Гистологиялық техника
• Гистологиялық техника бұл әдістемелер кешені.
• Гистология және патологияда оларды кейіннен микроскопиялау үшін
жасушалар, тіндер мен мүшелер препараттарын дайындау кезінде қолданады.
• Тұрақты гистолдарды дайындау. жұқа тілімдер түріндегі препараттар
іздерден тұрады, негізгі кезеңдері: бөлшектерді бекіту, жуу, сусыздандыру
және құю, кесектерді дайындау, бояу, дегидратация.
• Бекіту-құрылымды сақтау және белгілі бір дәрежеде химиялық заттарға тез
әсер ету арқылы жасушалар мен тіндердің құрамы немесе физикалық
өлімнен кейінгі өзгерістердің дамуына жол бермейтін агенттер.
• Бекіту үшін формальдегид (4%), Глутаральдегид (2-6%), сірке суы бар
қоспаларды (Карнуа сұйықтығы), пикрин к-ту (Буэн сұйықтығы) қолданады
Гистологиялық техника арқылы
зерттелетін материалдар
Экспериметалды жануардың
мүшелері

Адам ұлпалары

Мәйіт материалы
Бюкс-әр түрлі диаметрлі және биіктікті
тегістелген қақпақтары бар шағын
дөңгелек шыны стақандар.
Биологиялық шынылар —дөңгелек , сопақ
немесе төртбұрышты шыныға орнатылған
гистологиялық бөлімдерді жүргізу үшін
қолданылады. Тұрақтылық беру және
орналастыру тәртібін қамтамасыз ету үшін олар
ағаштан немесе пластмассадан жасалған арнайы
тіректерге, өңдеу әдісіне байланысты бірнеше
қатарға орналастырылады
Петри табақшалары-кең, жалпақ,
қақпағы бар шыны табақшалар -әртүрлі
манипуляцияларға жарамды (еркін
жүзетін және шыныға жабыстырылған
кесектерді бояу, бюкс тіректері ретінде
пайдалану және т.б.).
Заттық шынылар -тұрақты
препараттарды дайындау процесінде
гистологиялық қималарды Жабын шынысы әртүрлі мөлшердегі жұқа
орналастыруға арналған, қалыңдығы (қалыңдығы 0,15-0,2 мм) тақталар. Олар
1 мм 76*25 мм тікбұрышты слайдтарда орналасқан Өңделген бөліктерді
пластиналар. жабуға қызмет етеді. Жабын шынысының
өлшемдері объектінің ауданына байланысты
таңдалады.
Құралдар. Гистологиялық зертханада қолданылатын құралдарға
пинцеттер, скальпельдер, гемостатикалық қысқыштар, корнцанг,
шпательдер, тік және иілген, металл және шыны дайындық инелері
кіреді. Металл инелерді қолдануға болмайтын кезде күмісті сіңіру үшін
шыны инелер қажет, Сондай-ақ, спиртовка, микротомдық пышақтан
тілімдерді алу үшін шаш щеткасы, сүзгі қағазы, инелер, жіптер,
материалды заттаңбалауға арналған қалың қағаз, шыныда
лейкопластырь мен қарындаш болуы қажет
Материалды алу
Тәжірибелік жануарлардың мүшелерінің бөліктері гистологиялық зерттеуге материал ретінде
қызмет ете алады. Адам тінінің бөліктерін (биопсия), мәйітті материалды, сұйық сынақ
материалдарының жағындыларын (қан, сүйек кемігін) интравитальді кесу арқылы алынады.
Өлтіргеннен кейін жануардың денесі жатқан күйде тез бекітіледі. Бақалар, тышқандар және
басқа да ұсақ зертханалық жануарлар тақталарға, балауызға немесе тығыннан жасалған
пластинкаларға бекітіліп, екі жаққа созылған аяқтарымен бекітіледі. Орташа және ірі
зертханалық жануарларды бекіту үшін арнайы станоктар немесе осы мақсатқа арналған
тақтайшалар қолданылады (мырышпен қапталған немесе аяқ-қолдарды байлау үшін
шеттерінен ілмектермен немесе қалампырлармен боялған)
Құрсақ және кеуде қуысын ашу техникасы барлық зертханалық жануарларға бірдей. Дегенмен,
жүндері бар жануарларда ішкі ағзалардың ластануын болдырмау үшін алдымен жеткілікті кең
тері жамылғысын алып тастау керек. Ол үшін құрсақ қабырғасының төменгі бөлігінің терісін
ортаңғы сызық бойымен ұстап, көтеру (хирургиялық пинцет көмегімен), қалыптасқан қатпар
қайшымен басына қарай кесіледі, тері жамылғысын қажетті ұзындықта кеседі.
1. Жануардың мәйітін арқасына жатқызып, аяқ-қолдарын инемен
бекітіңіз
2. Мойын, кеуде және құрсақ қабырғасының терісін антисептикалық
ерітіндімен ылғалдандырамыз.
3. Пинцетпен іштің төменгі бөлігіндегі тері астындағы тіндері бар
теріні ұстап, көтеріп, оны кесіп, құрсақ қабырғасы бүтін болып
қалатындай етіп құрсақ қуысының ақ сызығы бойымен шаптан
төменгі жақ түбіне дейін бойлық кесу жасаңыз. (b, c).
4. Шап аймағында ортаңғы сызықтан аяғына дейін екі тері тесігін
жасаңыз
5. Құрсақ қабырғасы аймағындағы теріні қайшының доғал ұшымен
немесе абайлап бөліп, құрсақ қабырғасын қыспауға тырысыңыз, теріні
саусақтарыңызбен ажыратамыз және оны инелермен бекітіңіз
Фиксация
•Бекітудің мақсаты - жасушаны өлтіру, ондағы процестерді тоқтату (ең алдымен
ферментативті) және мүмкіндігінше оның интравитальді құрылымын сақтау.

•Бірқатар жалпы бекіту ережелері бар:
•1) бекіту сұйықтығының көлемі тіннің бекітілген бөлігінің көлемінен кемінде 20 есе көп
болуы керек;
•2) ысырманың барлық жағынан бекітілетін материалға кіру мүмкіндігі болуы керек,
сондықтан ыдыстың түбіне мақта немесе сүзгі қағазының бір бөлігі қойылады немесе
жіпке бір бөлігі ілінеді;
• 3) бекіту ұзақтығы фиксатордың қасиеттеріне, ең алдымен тінге фиксатордың ену
жылдамдығына байланысты;
• 4) әртүрлі фиксаторлар жасушаның әртүрлі құрылымдық және химиялық компоненттерін
сақтайды.
Гистологиялық фиксаторларға
қойылатын талаптар:
• Бекіткіштер тез жұмыс істеуі керек.
• Тіндердің деформациясын тудырмауы немесе оларды нәзік етпеуі
керек.
• Жасуша құрамын препаратты одан әрі өңдеу кезінде
қолданылатын суда және басқа сұйықтықтарда ерімейтін күйге
аудару керек.
• Олар препараттың күңгірттенуіне әкелмеуі керек, керісінше оның
ағартылуына ықпал етуі керек.
• Препараттың таңдалған әдіспен боялуына кедергі болмауы керек
Фиксатор түрлері:

Пикрин
Формалин Спиртті қышқылына
негізделген

Осмий
Сулемді
қышқылды
Формалин
• Фиксаторлардың ең көп таралған түрі.
Қарапайым, арзан, жұмысшы үшін
салыстырмалы түрде қауіпті емес.
Формальдегидтің сулы ерітінділері таза
түрінде және басқа заттармен, мысалы, сірке
қышқылымен қоспалардың бөлігі ретінде
қолданылады.
• Формалинді бекіткіштердің жетіспеушілігі-
тіндердің шамадан тыс тығыздалуы. Сонымен
қатар, таза формалинді қолданған кезде ақ
тұнба (құмырсқа қышқылының кристалдары)
жиі түсуі мүмкін. Сондықтан "буферленген"
бейтарап формалин жиі қолданылады.
Спиртті фиксатор
• Таза этил спирті сирек жағдайларда қолданылады, себебі ол
материалдың мыжылуына әкелуі мүмкін.
• Шаффер қоспасы-80% этил спиртінің 2 бөлігінен және формалиннің 1
бөлігінен тұрады. Бекіту ұзақтығы 1-2 күн.
• Карнуа қоспасы-абсолютті этил спиртінің 6 бөлігі, хлороформның 3
бөлігі және сірке қышқылының 1 бөлігі. Қолданар алдында бірден
дайындалады. Бекіту ұзақтығы 1/2-3 сағат. Қоспа тығыз қабықтары бар
заттарды (жәндіктер, дөңгелек құрттар) бекітуге жарамды.
• Дитрих сұйықтығы-этил спирті, формалин, сірке қышқылы және
судың қоспасы. Бекіту ұзақтығы 8-24 сағат. Буынаяқтылар үшін
жарамды
Сулемді және Осмий қышқылды фиксаторлар

Сулема негізіндегі бекіту
қоспалары баяу жұмыс
істейді. Гистологияда
қолданылады. Жақсы Осмий қышқылына негізделген бекіткіштер
тіндер мен жасушалардың құрылымын аз
ядролық ұстағыштар
өзгертеді. Жақсы ядролық фиксаторлар.
Майларды қара түске бояйды . Электрондық
микроскопияда ол контрастты зат ретінде
қолданылады. Жоғары бағасы осмий
фиксаторларын қолдануды шектейді.
Пикрин қышқылына негізделген
• Пикрин қышқылына негізделген қоспалармен бекітілген заттар суда
тұрақсыз, сондықтан бекітілгеннен кейін объект 70% спиртке ауыстырылады.
• Бекітілгеннен кейін объект сары түске ие болады, бұл әдетте жұмысқа
кедергі болмайды.
• Пикрин және сірке қышқылдарының қоспасы. 10% сірке қышқылындағы
пикрин қышқылының қаныққан ерітіндісі. Кішкентай және нәзік заттарға
жарамды.
• Буэн Қоспасы. 15 бөлік пикрин қышқылының қаныққан сулы ерітіндісі, 5
бөлік формалин, 1 бөлік сірке қышқылы. Бекіту ұзақтығы 2 сағат. Содан
кейін нысандар ұзақ уақыт бойы бұзылмай түзеткіш ерітіндіде тікелей
сақталуы мүмкін
Гистологиялық кесінділерді бояу
Жасушалар мен тіндерді бояу Бояудың мақсаты жасушалар мен
негізіне бояғышта да, тіндердің әртүрлі компоненттерін
микроқұрылымдарда да болатын нақты анықтау. Кейбір бояғыштар
бұл әсерді бейтарап майлар сияқты
физикалық химиялық процестер анықталған компоненттерде еріту
(диффузия, адсорбция, арқылы қамтамасыз етеді. Басқа
абсорбция, ерігіштік және т.б.) бояғыштар химиялық реакцияны
жатады. Бояудың тізбегін мен тудырады. Көптеген жағдайларда
жылдамдығын анықтайтын бояу процесі тек дәрінің қатысуымен
ұлпаның тығыздығы мен ғана мүмкін болады, мысалы,
гематоксилин ұлпаны металл
бояғыштың дисперсиясы үлкен тұздарының қатысуымен бояйды.
мәнге ие.
Қолданылған әдебиеттер:
Роскин Г. И. Микроскопическая техника. — М.: Государственное издательство
«Советская Наука», 1946

Ұқсас жұмыстар

Құю парафин

ПАРАФИН БЛОКТАРЫНАН СЕКЦИЯЛАРДЫ ДАЙЫНДАУ

Гистологиялық препараттарды дайындау әдістері

Гистологиялық препараттарды жасау және бояу әдістері

Жарық микроскопы

Микоз қоздырғыштары

Биопсия түрлері

Салыстырмалы диагностика дермоидты киста, липома

Сыртқы жыныс мүшелерін қарау

КЛЕТКАНЫ ЗЕРТТЕУ ӘДІСТЕРІ ЦИТОЛОГИЯ ГИСТОЛОГИЯ

Пәндер