Иммуноферменттік талдау (ИФА): принциптері, сэндвич-әдісі және қолдану салалары

БОӨЖ Имунды ферментіік талда:әдістің принципі және кезеңдері

Орындаған:Хайдарова Клара

Топ:212б

Мамандығы:Жалпы Медицина

Қабылдаған:Серібекқызы Г

Жоспары: Иммундық ферменттік талдау Спецификалық антиденелерді анықтау әдісі сэндвич әдісі Қортынды

Иммуноферменттік талдау

Иммуноферменттік талдау ИФА-антиген-антидененің ерекше реакциясына негізделген әртүрлі шағын молекулалы қосылыстарды, макромолекулаларды, вирустарды және т. б. сапалы немесе сандық анықтаудың зертханалық иммунологиялық әдісі.

70-шы жылдардың басында ИФТ әдісін ашқан ғалымдар: Швеция ғалымдары - Engvall және Perlmann Нидерланд ғалымдары - van Weemen және Schuur, АҚШ ғалымы - Rubenstein

ELISA (ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY ) -

Әдіс антиген мен оған сәйкес антидене арасындағы спецификалық әрекеттесу принципімен жасалады. Комплексті анықтау үшін ферментті белгімен (пероксидаза, сілтілі фофатаза, глюкозооксидаза, ацетилхолинэстераза, каталаза және т. б. ) байланысқан анти-антидене болып табылатын арнайы конъюгат (адам Ig қарсы қоян антиденелері немесе моноклондық антиденелер) қолданылады .

Спецификалық антиденелерді анықтау әдісі (сэндвич әдісі) Планшет ойықтарына қоздырғыштың антигені орнатылып, зерттелетін сары сумен бірге инкубацияланады. Спецификалық антиденелер болған жағдайда олар байланысып, антиген-антидене комплексі түзіледі. Одан кейін бұл комплекс конъюгатпен инкубацияланған кезде анти-антиденелер антиген-антидене комплекстерімен байланысады. Ферменттік реакция (түрлі-түсті реакция) сутегі тотығы мен пероксидазды реакция процесінде тотығып, боялатын субстраттың қатысумен жүреді. Боялу қарқыны анықталатын спецификалық антиденелердің санына байланысты болады. Нәтижесі спектрофотометрмен немесе визуалды бағаланады.

Бұл схемада антигендер (2) планшеттің ойықтарына (1) орнатылған. Ойыққа зерттелетін сары су енгізіледі. Егер сары суда антигендерге қарсы антиденелер (3) болса, инкубациялану кезінде антиген/антидене байланысы түзіледі

Планшеттің ойықтарын байланыспаған субстанциялардан (яғни спецификалық емес антиденелерден) тазалап, оған екінші антиденелер (4) қосылады. Бұл антиденелерге белсенді фермент (Е) бекітілген. Мұндай комплекстік байланысу конъюгат деп аталады. Инкубациялану кезінде ойықта сэндвич тәрізді құрылым түзіледі.

Планшеттің ойықтарын байланыспаған конъюгаттан тазалап, оған түссіз субстрат (5) қосылады, бұл субстратқа фермент (Е) әсер етіп, оны бояйды (6)

Иммуноферментті талдаудың қолданылуы: Жұқпалы ауруларды диагностикалау (IgA, IgM, IgG антиденелері), аурудың кезеңін анықтау Аутоиммундық ауруларды диагностикалау Аллергияны диагностикалау Гормондарды анықтау Онкомаркерлерді анықтау Цитокиндерді анықтау

Диагностика кезінде ескеру керек Зерттеуді аурудың ерте кезеңінде өткізу керек. Бір уақытта бірнеше спецификалық антиденелерді анықтаған (немесе IgM және IgG антиденелерін) жөн, бұл біріншілік инфекцияны диагностикалау үшін қажет. Аурудың динамикасын бағалау үшін антиденелердің санын анықтау қажет. Белсенді және жасырын инфекцияны айыру үшін IgG авидтілігі деңгейін сараптау. Бұрын жұқтырылған инфекцияның нәтижесінде антиденелер төмендеген иммунитетте, ақуызды ашығу кезінде анықталмауы мүмкін.

Қортынды Иммуноферменттік талдау әдісі (ИФТӘ) антиденелердің түзілуін тудыруы мүмкін заттарды анықтауға және олардың мөлшерін анықтауға арналған. ИФТӘ спецификалық (иммунохимиялық) антиген-антидене реакциясына негізделген (антиденелер басқа антигендермен емес, тек белгілі бір антигендермен байланысады) . ИФТӘ иммунология, ветеринария, микробиология және тамақ өнеркәсібінде ғылыми және диагностикалық мақсаттарда бірнеше ондаған жылдар бойы сәтті қолданылып келеді. Бұл әдістің кең таралуы оның бірегей ерекшелігін өте жоғары сезімталдықпен біріктіріп, 97-99% жетуіне байланысты.

Ұқсас жұмыстар

ДНҚ талдау әдістері мен қолдану салалары

Газ хроматографиясы: принциптері, құрал-жабдықтары және қолдану салалары

Биосенсорлар мен биочиптер: принциптері, құрылымы және қолдану салалары

Тензометрлік датчиктер: түрлері, жұмыс принциптері және қолдану салалары

Лазерлер: жұмыс істеу принциптері, түрлері, құрылысы және қолдану салалары

Газ және газ-сұйық хроматография: принциптері, құрал-жабдықтары және қолдану салалары

Блокчейн технологиясы: принциптері, майнинг түрлері және қолдану салалары

GPS жүйесінің жұмыс істеу принциптері, техникалық ерекшеліктері және қолдану салалары

Экстракцияға арналған жабдықтар: экстракторлардың түрлері, жұмыс принциптері және қолдану салалары

Мультиплекстеу технологиялары: мультиплексорлардың түрлері, жұмыс принциптері және қолдану салалары

Пәндер