Клеткаларды өсіру әдісі

Жоспар:

Жасуша культурасы

Жасушалар мен тіндердің культурасы

Өсімдік клеткаларын іn vitro жағдайында нәтижелі өсіру жұмыстарын ХХ ғасырдың 30-шы жылдары Ф. Уайт пен Р. Готре бастап еді. Өсімдіктің тірі клеткасы лайықты коректік ортада өзіне тән тотипатенттік қасиетін көрсетеді, яғни бүтін регенерант өсімдігін түзеді. Іn vitro жағдайында пайда болған өркені мен тамыры жетілген өсімдікті регенерант деп атайды.

Селекция

Тәжірибелік салада клетка культурасы қолданылатын бағыттар:

Көп мөлшерде биологиялық заттарды алу

Өсімдіктердің клондық көбеюі

Өсімдік, жануарлар мен адамдардың жеке жасушаларын өсіру

Биологиялық тәжірибеде қолданылатын жасушалық өсінділердің классификациясы

Каллустық жасуша - жасанды ортада өсірілетін өсімдік жасушасының басты түрі.

Алгашқы жасуша өсіндісі - ол тікелей организмнен алынып, in vitro өсірілген жасушалар (3-5 тәулікте пайда болады) . Мұндай өсіндіні адам мен жануардың кез келген органынан немесе ұлпасынан алуға болады.

Субкультуралар - ол алғашқы жасуша өсіндісінен бірінші пассаж (қайталап егу) жасалғаннан кейін алынады (2-3 тәулікте пайда болады), көптеген жасушалық линиялардан тұрады.

Қайталап өсірілген жасуша өсінділері - ол, организмнен тыс шексіз өсуге қабілетті жасуша өсінділері.

Диплоидты жасуша өсінділері дегеніміз морфологиялық бірқалыпты жасушалар популяциялары. Бұл жасуша өсіндісінің тіршілігі шектеулі, пассаж кезінде өзінің кариотипін сақтап қалады, контаминанттардан таза.

Дара қабатты жасуша өсіндісі деп қоректі ортаның беткі қабатында пайда болған жасуша өсіндісін айтамыз.

Суспензиялық жасуша өсіндісі дегеніміз жасушалардың бос кеңістікте өсіп-көбеюі. Мұндaй жасуша өсіндісін алу үшін суспензияны үнемі араластырып отыру қажет.

Каллус культурасы

Каллус - өсіру кезінде меристемалық жасуша, өткізгіш жүйе элементтерін, пигментті жасушалар ошағын түзетін ұйымдастырылған паренхималық жасушалардың пролиферациялық массасы.

Каллустық культуралар көптеген өсімдіктерде өндірістік жағдайда биопродуценттерді алу мақсатында, сонымен қатар бастапқы өсімдікті көбейту үшін-донор мен самоклональды алу үшін қолданылады.

Каллусты индуцирлеу үшін бастапқы залалсыздандырылған материалды 2-4 мм өлшемінде сегменттерге бөледі және оны пробирка немесе Петри табақшасындағы агарланған орта бетіне салады. Егер эксплант ретінде сабақ сегменті алынса, онда оларды ортаға апикальды жағынан орналастырады; астықтардың оқшауланған жас ұрықтарынан (10-14 күндік) каллус түзілу үшін ортаға қалқанынан жоғары қаратып салады. Егер мезокотиль, астық ұрығынан каллус алғысы келсе, оны қалқанын төмен қаратып ортаға салады. Сосудтарда жоғары ылғалдылықты сақтау үшін культуральды сосудтардың тығынын немесе қақпағын парафин немесе лейкопластырмен бекітеді.

Клетканы культиверлеу

Культиверлеудің негізгі принциптері

Жасушалар тұрақты температурада арнайы қоректік орталарда өсіріледі.

Өсімдік жасушаларының дақылдары үшін бақыланатын жарықтандыру қолданылады, ал сүтқоректілердің жасушалары үшін әдетте жасуша культурасының инкубаторында ұсталатын арнайы газ ортасы қажет.

Әртүрлі жасуша дақылдары үшін қоректік орталар құрамы, рН, глюкоза концентрациясы, өсу факторларының құрамы және басқалары бойынша ерекшеленеді.

Сүтқоректілердің жасушалық қоректік орталарында қолданылатын өсу факторлары көбінесе қан сарысуымен бірге қосылады.

Бұл жағдайда қауіп факторларының бірі жасуша мәдениетін приондармен немесе вирустармен жұқтыру мүмкіндігі болып табылады. Өсіруде маңызды міндеттердің бірі ластанған ингредиенттерді пайдалануды болдырмау немесе азайту болып табылады.

Ең жақсы, бірақ сонымен бірге ең қымбат әдіс - сарысудың орнына тазартылған өсу факторларын қосу.

Жасушаларды суспензияда немесе адгезивті күйде өсіруге болады. Кейбір жасушалар (мысалы, қан жасушалары) табиғи түрде суспензияда болады. Сондай-ақ, беттерге жабыспайтын етіп жасанды түрде өзгертілген жасуша сызықтары бар; бұл культурадағы жасушалардың тығыздығын арттыру үшін жасалады.

Жасушаларды өсіру кезінде тұрақты бөліну салдарынан олардың культурада шамадан тыс көп болуы мүмкін және нәтижесінде келесі мәселелер туындайды:

Қоректік ортада экскреция өнімдерінің, соның ішінде улы заттардың жинақталуы.

Тіршілік әрекетін тоқтатқан өлі жасушалардың мәдениетінде жинақталуы.

Жасушалардың көп жиналуы жасушалық циклге кері әсер етеді, өсу мен бөліну баяулайды, жасушалар қартая бастайды және өледі (байланыс өсуінің тежелуі) .

Дәл сол себепті жасушалық дифференциация басталуы мүмкін.