Клеткаларды өсіру әдісі

Презентация қосу

Клеткаларды өсіру
әдісі
Жоспар:

01 03
Клеткаларды өсіру
Клетканы өсіру әдіснің практикалық
әдісінің даму және теориялық
тарихы 02 маңызы

Клетка
культурасының
методикалары
Жасуша культурасы

Клеткаларды өсіру
Жасуша культурасы деген ұғымға
дегеніміз - ол биосистема өсімдіктен бөлініп
жасушаларының алынған клеткаларды,
организмнен тыс (in vitro) ұлпаларды, мүшелерді
жасанды ортада өсіп қоректік ортада
көбеюі. заласыздандырылған
жағдайда өсіру енеді.
Жасушалар мен тіндердің культурасы
Өсімдік клеткаларын іn vitro жағдайында нәтижелі өсіру жұмыстарын ХХ
ғасырдың 30-шы жылдары Ф. Уайт пен Р.Готре бастап еді. Өсімдіктің тірі
клеткасы лайықты коректік ортада өзіне тән тотипатенттік қасиетін
көрсетеді, яғни бүтін регенерант өсімдігін түзеді. Іn vitro жағдайында
пайда болған өркені мен тамыры жетілген өсімдікті регенерант деп атайды.
Тәжірибелік салада клетка культурасы
қолданылатын бағыттар:

Көп мөлшерде
Селекция биологиялық
заттарды алу

Өсімдіктердің Өсімдік, жануарлар
мен адамдардың
клондық жеке жасушаларын
көбеюі өсіру
Биологиялық тәжірибеде қолданылатын
жасушалық өсінділердің классификациясы
1. Каллустық жасуша - жасанды ортада өсірілетін өсімдік жасушасының басты түрі.
2. Алгашқы жасуша өсіндісі - ол тікелей организмнен алынып, in vitro өсірілген жасушалар (3-5
тәулікте пайда болады). Мұндай өсіндіні адам мен жануардың кез келген органынан немесе
ұлпасынан алуға болады.
3. Субкультуралар - ол алғашқы жасуша өсіндісінен бірінші пассаж (қайталап егу) жасалғаннан
кейін алынады (2-3 тәулікте пайда болады), көптеген жасушалық линиялардан тұрады.
4. Қайталап өсірілген жасуша өсінділері - ол, организмнен тыс шексіз өсуге қабілетті жасуша
өсінділері.
5. Диплоидты жасуша өсінділері дегеніміз морфологиялық бірқалыпты жасушалар
популяциялары. Бұл жасуша өсіндісінің тіршілігі шектеулі, пассаж кезінде өзінің
кариотипін сақтап қалады, контаминанттардан таза.
6. Дара қабатты жасуша өсіндісі деп қоректі ортаның беткі қабатында пайда болған жасуша
өсіндісін айтамыз.
7. Суспензиялық жасуша өсіндісі дегеніміз жасушалардың бос кеңістікте өсіп-көбеюі. Мұндaй
жасуша өсіндісін алу үшін суспензияны үнемі араластырып отыру қажет.
Каллус культурасы

● Каллус - өсіру кезінде меристемалық жасуша, өткізгіш жүйе элементтерін, пигментті
жасушалар ошағын түзетін ұйымдастырылған паренхималық жасушалардың
пролиферациялық массасы.
● Каллустық культуралар көптеген өсімдіктерде өндірістік жағдайда биопродуценттерді алу
мақсатында, сонымен қатар бастапқы өсімдікті көбейту үшін-донор мен самоклональды
алу үшін қолданылады.
● Каллусты индуцирлеу үшін бастапқы залалсыздандырылған материалды 2-4 мм өлшемінде
сегменттерге бөледі және оны пробирка немесе Петри табақшасындағы агарланған орта
бетіне салады. Егер эксплант ретінде сабақ сегменті алынса, онда оларды ортаға
апикальды жағынан орналастырады; астықтардың оқшауланған жас ұрықтарынан (10-14
күндік) каллус түзілу үшін ортаға қалқанынан жоғары қаратып салады. Егер мезокотиль,
астық ұрығынан каллус алғысы келсе, оны қалқанын төмен қаратып ортаға салады.
Сосудтарда жоғары ылғалдылықты сақтау үшін культуральды сосудтардың тығынын
немесе қақпағын парафин немесе лейкопластырмен бекітеді.
Клетканы
культиверлеу
Культиверлеудің негізгі принциптері

Жасушаларды бөліп алу
01

Жасушаларды культиверлеу
02

Жасуша линияларының айқаспалы ластануы
03
Культиверлеудің негізгі принциптері

04
Жасушаларды өсірудің ерекшеліктері

05
Жасушалардың өтуі/пассиверленуі

06
Трансфекция және трансдукция
• Жасушалар тұрақты температурада арнайы қоректік орталарда
өсіріледі.
• Өсімдік жасушаларының дақылдары үшін бақыланатын жарықтандыру
қолданылады, ал сүтқоректілердің жасушалары үшін әдетте жасуша
культурасының инкубаторында ұсталатын арнайы газ ортасы қажет.
• Әртүрлі жасуша дақылдары үшін қоректік орталар құрамы, рН, глюкоза
концентрациясы, өсу факторларының құрамы және басқалары бойынша
ерекшеленеді.
• Сүтқоректілердің жасушалық қоректік орталарында қолданылатын өсу
факторлары көбінесе қан сарысуымен бірге қосылады.
Бұл жағдайда қауіп факторларының бірі жасуша
мәдениетін приондармен немесе вирустармен жұқтыру
мүмкіндігі болып табылады. Өсіруде маңызды
міндеттердің бірі ластанған ингредиенттерді пайдалануды
болдырмау немесе азайту болып табылады.

Ең жақсы, бірақ сонымен бірге ең қымбат әдіс -
сарысудың орнына тазартылған өсу факторларын қосу.

Жасушаларды суспензияда немесе адгезивті күйде
өсіруге болады. Кейбір жасушалар (мысалы, қан
жасушалары) табиғи түрде суспензияда болады.Сондай-
ақ, беттерге жабыспайтын етіп жасанды түрде өзгертілген
жасуша сызықтары бар; бұл культурадағы жасушалардың
тығыздығын арттыру үшін жасалады.
Жасушаларды өсіру кезінде тұрақты бөліну салдарынан олардың культурада
шамадан тыс көп болуы мүмкін және нәтижесінде келесі мәселелер
туындайды:
Қоректік ортада экскреция өнімдерінің, соның ішінде улы заттардың
жинақталуы.
Тіршілік әрекетін тоқтатқан өлі жасушалардың мәдениетінде жинақталуы.
Жасушалардың көп жиналуы жасушалық циклге кері әсер етеді, өсу мен
бөліну баяулайды, жасушалар қартая бастайды және өледі (байланыс
өсуінің тежелуі).
Дәл сол себепті жасушалық дифференциация басталуы мүмкін.
• Жасуша дақылдарының қалыпты жұмысын сақтау үшін,
сондай-ақ жағымсыз құбылыстардың алдын алу үшін
қоректік орта мезгіл-мезгіл ауыстырылады,
жасушалардан өту және трансфекция жүргізіледі.

• Дақылдардың бактериялармен, ашытқылармен немесе
басқа жасуша линияларымен ластануын болдырмау үшін
барлық манипуляциялар әдетте стерильді қорапта
асептикалық жағдайда жүргізіледі.

• Микрофлораны басу үшін қоректік ортаға
антибиотиктерді (пенициллин, стрептомицин) және
зеңге қарсы препараттарды (амфотерицин В) қосуға
болады.
In vitro өсіру
Өсімдік жасушаларының дақылдары
әдетте сұйық қоректік ортада суспензия
түрінде немесе қатты қоректік негізде
каллус дақылы ретінде өсіріледі.
Дифференциацияланбаған жасушалар
мен каллусты өсіру ауксиндер мен
цитокининдердің өсімдік өсу
гормондарының белгілі бір тепе-теңдігін
сақтауды талап етеді.
In vitro жасуша өсіру ерекшеліктері

Жасушаларды өсіру Қоректік ортада
кезінде олардың үнемі
бөлінуіне байланысты
секреция Жасушалардың көп жиналуы
мәдениетте олардың өнімдерінің, соның жасушалық циклге кері әсер
көптігі пайда болуы ішінде улы етеді, өсу мен бөліну баяулайды,
мүмкін. заттардың жиналуы. жасушалар қартая бастайды
Нәтижесінде келесі Культурада өлі және өледі.
мәселелер туындауы Дәл сол себепті жасушалық
жасушалардың дифференциация да басталуы
мүмкін: жиналуы. мүмкін.

Ұқсас жұмыстар

Жасанды қоректік ортада өсетін клеткалардың артықшылықтары

Клетка культурасы

Каллус клеткаларын алу және өсіру

Өсімдік клеткаларын өсіру

Жасанды ұрықтандырудың дамуы

КЛЕТКАНЫ ЗЕРТТЕУ ӘДІСТЕРІ ЦИТОЛОГИЯ ГИСТОЛОГИЯ

Биотехнологиялық объект ретінде өсімдік жасушаларын өсіру. Өсімдік жасушаларының биосинтездік қасиетін өңеркәсіпте пайдалану

Жасушалық селекция

Клеткаларды зерттеу әдістері

Жануарларды клондау

Пәндер