Өсімдіктер физиологиясы институты
МАЗМҰНЫ
Кіріспе ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
6
1
Атмосфераның ластану мәселесіне әдебиеттік шолу ... ... ... ... ... ... .
8
1.1
Энегетика өндірістерінің (ЖЭО, ЖЭС, ГЭС) атмосфера ауасының
ластануына қосатын үлесі ... ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .
8
1.1.1
Электр энергетикасы объектілерінің атмосфералық ауаға әсері ... ...
8
1.1.2
Атмосфера ауасының энергетика шығарындыларымен ластану
сипаты ... ... ... ... ... ... ... . ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
9
1.1.3
Атмосфералық ауаның ластануының адам денсаулығына әсері ... ...
11
1.1.4
Көмір өндіру саласы объектілерінің атмосфералық ауаға әсері ... ...
12
1.2
Тау-кен өндірісінің атмосфера ауасының ластануына қосатын
үлесі (шахта, түсті меллургия, байыту фабрикалары, металлургия зауыттары) ... ... ... ... ... ... . ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
13
1.2.1
Атмосфераға шығарындылар және атмосфералық ауаның
ластануы ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ..
20
1.3
Машина жасау өндірістерінің атмосфера ауасының ластануына
қосатын үлесі ... ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ..
22
2
Атморсфера ауасының мониторингін жасау әдістемесі ... ... ... ... ... .
28
2.1
Зерттеу нысандары ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
28
2.2
Атмосфера ауасының ластануын бақылау жұмыстарын
ұйымдастыру ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
28
2.3
Құралдар және нұсқа алу әдістемесі ... ... ... ... ... ... . ... ... ... ... ... ... ...
33
2.4
Зиянды заттар концентрациясын индикатор түтігімен анықтау ... ...
36
3
Зерттеу бөлімі ... ... ... ... ... ... ... . ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ..
40
4
Еңбек қауіпсіздігінің жай-күйін бағалау ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ..
46
Қорытынды ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .
51
Пайдаланған әдебиеттер тізімі ... ... ... ... ... ... ... . ... ... ... ... ... ... ... ... .
52
ҚЫСҚАРТУЛАР
BAP 6-бензиламинопурин
IBA - индол-3-май қышқылы
NAA - α-нафталин сірке қышқылы
ТДЗ - Тидиазурон
IAA - индол-3-сірке қышқылы
КІРІСПЕ
Соңғы уақытта Қазақстанда қалалар мен жаңа құрылыстар санының өсуіне байланысты жасыл желектер құру қажеттілігі туындап отыр, олардан скверлер, саябақтар, аллеялар мен топтық посадтар қалыптастырылуда. Аумақты көгалдандыру үшін қоғамдық жерлерде қылқан жапырақты және жапырақты ағаштар, бұталар, сондай-ақ эстетикалық функцияны ғана емес, сонымен қатар белгілі бір микро-климатты құратын гүлді сәндік өсімдіктердің әртүрлі формалары қолданылады. Өсімдіктердің өсуі мен дамуы үшін қолайсыз климаттың қатал болуына байланысты (температураның күрт өзгеруі, топырақтың тұздануы мен ылғал тапшылығымен бірге күннің жоғары оқшаулануы) Қазақстан аборигендік дендрофлора мен сәндік өсімдіктердің шектеулі құрамымен ерекшеленеді, бұл одан әрі көгалдандыру жұмыстарын жүргізу үшін өсімдіктерді жерсіндіру мен жерсіндіру қажеттілігін негіздейді. Раушанның көптеген сорттары дәстүрлі түрде шламмен таралады, көшеттерге немесе клональды қорларға егіледі. Алайда, вакцинация - бұл қымбат процедура,ал дәстүрлі өсіру-бұл еңбек процесі.
Биотехнологияның бір жаңалығы болды раушанның коммерциялық сорттарын микроклональды көбейту мен раушан өсірудің дәстүрлі әдістерінің баламасы. Селекциялық және тұқым өсіру жұмысының тиімділігін арттыру жасушалық технологияларды, атап айтқанда, in vitro микроклональды көбеюін қолданумен байланысты. Бұл әдіс бірегей генотиптерді (алыс гибридтер, асыл тұқымды үлгілер, биоинженерлік әдістерді қолдана отырып алынған формалар) тез арада таратуға және өндіріске жаңа сорттарды енгізуді тездетуге мүмкіндік береді (RuzicD., 2006: 149-153, Saxena G., 2000: 133-140). Микроклональды көбеюдің маңызды артықшылығы-бұл әдіспен алынған отырғызу материалы оған өсімдік берген генетикалық жағынан бірдей. Дәстүрлі әдістермен салыстырғанда бұл биотехнологиялық әдіс саңырауқұлақ және бактериялық патогендерден, вирустық, микоплазмалық және нематодты инфекциялардан сауықтырылған материал алуға, сондай-ақ көбеюдің жоғары коэффициентіне қол жеткізуге мүмкіндік береді, өйткені клондық микро көбею кезінде сіз жылына 100 000 клон ала аласыз, ал әдеттегі жағдайда-дәл сол уақытта тек 50-100 өсімдік алынады (DasP., 2010: 70-78,PratarK.P., 2006: 94-114). Селекциялық процестің тиімділігін азайту мүмкіндігі де маңызды болып табылады, нақты технологиялар климаттық жағдайларға қарамастан жыл бойы жұмыс істеуге және отырғызу материалын өсіру үшін қажетті аумақты үнемдеуге мүмкіндік береді. Технологияның экономикалық тиімділігі көптеген Еуропа елдерінде көрсетілген, олар сәндік өсімдіктердің сәндік материалдарын жаппай көбейту үшін микроклональды көбейту әдісін қолдана отырып, сәндік Гүл өсімдіктеріне жыл сайын өсіп келе жатқан сұранысты қанағаттандырады (KimS.W., 2009: 199-203, Khosravi P., 2007: 100-104, Nak-Udom N., 2009: 583-586). Қазақстанда сәндік гүл өсімдіктерінің коммерциялық сорттарының ландшафтық дизайны мен өсірілуі көп еңбекті қажет ететін көбейту әдістеріне балама болып табылатын сәндік өсімдіктердің сапалы отырғызу материалын жаппай тираждау және жылдам ұдайы молайтуға негізделген рентабельді және әмбебап технологияның болмауына байланысты нашар дамыған. Бұл жұмыс микроклональды көбейту In vitro әдісі негізінде қазақстандық селекцияның будандары мен раушандарының коммерциялық сорттарын жедел көбейтудің тиімді әдістерін жасауға арналған.
1. Роза гүлін in vitro жағдайында микрокөбейту әдісіне әдебиеттік шолу
1.1 Роза гүлі
Роза - гүлдердің патшайымы. Жалынды махаббат пен тәжім етудің, сүйкімділіктің нышаны. Раушан бағзы замандардан-ақ ең сәнді өсімдік саналып келген. Аталған гүлдің әдемілігі жағынан да, түсінің байлығы жағынан да, мұрныңызды жарардай хош исі тұрғысынан да теңдесі жоқ десек, артық айтқандық емес.
Ежелгі Иран халқында осы гүлдің көркемдігі туралы жүздеген томды кітаптар жазылған. Еңбектегі Иран халқының ақындарының айтуынша, раушан Тәңірдің тарту еткен сыйы екен. Күндердің күнінде Флора патшалығының балалары Құдайдан өздеріне қашанда ұйқыда жүріп, билеушіге тән міндеттерін есінен шығарып ала беретін Лотостан басқа патша тағайындап беруін жалынып сұрайды. Мейірімді Аллаһ Тағала өтініштеріне құлақ асып, оларға өткір тікенді, періштедей пәк ақ раушанды жібереді.
Раушан гүлінің тарихы жер бетінде адамзат баласы пайда болмай тұрғанда, яғни осыдан 25 миллион жыл бұрын басталатындығына көптеген ғалымдардың еңбектеріндегі деректер дәлел бола алады.
Раушан туралы қолжазбалардағы ең көне деректер Тигр мен Ефрат өзендерінің арасында орын тепкен Ура қаласындағы патша моласынан табылған (осыдан 5000 жыл бұрын).
Конфуцийдің еңбектеріне сүйенер болсақ, ежелгі Қытайдың патшалық кітапханасында раушан туралы 600 кітап болған екен. Және сол кездің өзінде қытайлықтар раушан майын дайындау тәсілін жетік білген. Б.з.д. 372-287 жылдары өмір сүрген Теофраст раушан гүлдің жабайы және бақта өсетін түрлерін ажыратып берген. Ал, көненің көзі саналатын Алтай қорғандарынан (б.з.д. V - IV ғ.ғ.) раушандар бейнеленген күміс тиындар табылған.
Раушандар әлеміндегі соңғы жаңалықтар:
::Әр түрлі елдердің селекционерлерінің арқасында бүгінде раушанның шамамен 25 000 сұрпы алынған.
::Раушанды сұрыптауды жүргізіп отырған алпауыт мемлекеттердің басында Франция, АҚШ және Англия тұр.
::Раушан гүлдері ақ, алқызыл, сары тіпті қара және көгілдір түсті болып келеді. Гавай аралдарының көгілдір аспандарының астында көгілдір күлтелі раушандар жайқалып тұрады.
::Раушандардың ең сирек кездесетін түрі - меруерт раушандар. Мұндай гүлдер Румынияның Клуж қаласындағы Напока ботаникалық бағында өсіріледі. Күлтелері ашық жасыл түсті бұл таңғажайып раушандар инеліктің қанатын еске түсіреді.
:: Бұл аз десеңіз, соңғы уақытта мұңды кейіптейтін қара раушандар дүниеге келген.
:: Италияда өткен гүлдер көремесіне сабағында бірде-бір тікен жоқ ақ раушан гүлі қойылған.
Қазақстан ғылым академиясының Бас ботаник. бағында 1957 -- 84 ж. аралығында Раушангүл тұқымдасының әсемдік түрі -- раушан гүлінің 16 сорты шығарылған. Ең бастылары: "Қазақстандық мерекелік" (биікт. 130 см-дей, гүлі қызыл түсті); "Алматыдан сәлем" (биікт. 130 см-дей, гүлі қызғылт түсті); "Алматы хош иістісі" (биікт. 190 см-дей, гүлі қызғылт түсті, хош иісті); "Қызжібек" (биікт. 110 см, гүлі қызыл күрең түсті); "Аққу" (биікт. 250 см-дей, гүлі ақ түсті); "Гүлсұлу" (биікт. 190 см-дей, гүлі қызыл күрең түсті, қыста үсімейді), т.б.
1.2 Клондық микро көбею
Жаңасын енгізу жолындағы маңызды кедергілердің бірі тәжірибеде сорттар-көп мөлшерде алу мүмкін еместігі вегетативті көбею үшін тұқым немесе отырғызу материалы. Бұл кедергі биотехнологияның көмегімен жойылады селекционерлерге микро көбейтудің тиімді және жылдам әдісі өсімдіктер. In vitro эксперименталды морфогенез процесін зерттеу ұйымның барлық деңгейлерінде - жеке тордан қашу шыңына дейін клондық микропроцессорлық технологияның пайда болуына әкелді көптеген елдерде қазірдің өзінде коммерциялық болып табылатын өсімдіктер. Клондық микропропагация-массалық асексуалдық жасушалар мен ұлпалар мәдениетінде Өсімдіктердің көбеюі өсімдіктердің пайда болған формалары генетикалық жағынан түпнұсқаға ұқсас данасына Бұл алынған отырғызу материалы өте маңызды өсімдіктің генетикалық жағынан ұқсас әдісі, ол өсімдіктердің соматикалық жасушаларынан пайда болады. Жыныстық көбею кезінде ұрпақтар бірігу нәтижесінде пайда болған зиготадан дамиды екі түрлі адамның ұрық жасушалары. Бұл зигота құрамында гендер бар әке мен ана ағзасы, сондықтан ұрпақ, жыныстық көбею кезінде пайда болатын, бірдей емес кейбір ата-аналарға және екі ата-ананың да тұқым қуалайтын бейімділігін көтереді. Клондық микропроцессордың артықшылықтары дәстүрлі әдістермен:
oo генетикалық біртекті отырғызу материалын алу; саңырауқұлақ және бактериялық патогендерден өсімдіктерді сауықтыру, вирустық, микоплазмалық және нематодты инфекциялар;
oo жоғары көбею коэффициенті: клональды микро көбейту жылына 100 000-1000 000 клон алуға болады, ал қалыпты жағдайда-сол мерзімде тек 5 100;
oo селекциялық процестің ұзақтығын қысқарту;
oo дәстүрлі түрде көбейту қиын өсімдіктердің таралуы тәсілдермен;
oo жыл бойы жұмыс жүргізу мүмкіндігі және үнемдеу;
oo отырғызу материалын өсіру үшін қажетті алаңдар.
Өнім санына сәйкес көбейту технологиясы in vitro-ны кішігірім және ауқымды деп бөлуге болады. Бұл бөлім мақсаттармен және қолдану салаларымен байланысты.
Клондық микропропагация қолданылады:
oo көп мөлшерді тез алу үшін вируссыз материал (бұл технология әдіске негізделген, апикальды меристематикалық тіндердің мәдениеті ретінде белгілі ірі масштабты технология);
oo аз санды сақтау және көбейту үшін селекциядағы жеке генотиптер (үлкен масштабты қажет етпейді);
oo жаңа өсірілген сорттарды тез көбейтуге арналған (дейін ай ішінде бірнеше мың өсімдік, ал дәстүрлі әдістерді қолдану бірнеше жылға созылады);
oo ағаш өсімдіктерін көбейту, өсіру және селекция ұзақтығына байланысты баяу жүзеге асырылатын немесе вегетативті көбеюдің болмауы (осы түрлердің көпшілігі вегетативті көбею қиын, ал кейбір жағдайларда, мысалы, монокотилонды пальмалар үшін және кейбір орман ағаштарының түрлері, жалпы вегетативті көбею мүмкін емес);
oo гетерозис гибридтерін немесе басқаларын ұстауға арналған өсімдіктерді кесіп өту кезінде бөлінетін гетерозиготалар;
oo сирек кездесетін және Құрып кету қаупі төнген түрлерді сақтауға арналған заттар, мысалы, женьшень, оның ауқымы Қиыр Шығыста (Қытай, Корея, Ресей), тек Қытайда Ресеймен шекарада сақталған .
Клондық микропроцессордың негізін қалаушы француз ғалымы Жорж Морель. 1960 жылы ол осы әдісті жасады орхидеялар үшін. Эксплант ретінде Ж. Морель жоғарғы жағын қолданды цимидиум (сем. Орхидея), өсу конусынан және белгілі бір жағдайларда екі жапырақты бүршіктерден тұрады сфералық түзілімдер пайда болды - протокормалар (сурет.1). Қалыптасқан хаттамаларды бөлуге болады, содан кейін жаңадан дайындалған қоректік заттарға өздігінен өсіріңіз жапырақты примордиялар мен тамырлар пайда болғанға дейінгі орта. Нәтижесінде атындағы бұл процесс шексіз және оны алуға болатындығы анықталды жоғары сапалы және генетикалық біртекті, безвирусный отырғызылатын материал. Біздің елде клондық микропроцессорлық жұмыстар болды 60-шы жылдары тіндер мәдениеті және морфогенез зертханасында басталды. Өсімдіктер физиологиясы институты. К. А. Тимирязева РАН. Астында профессор Р. Г. Бутенконың басшылығымен жағдайлар зерттелді картоптың, қант қызылшасының, Қалампырдың, гербераның микропозициялары, фреезиялар және басқа да өсімдіктер, өнеркәсіптік микропроцессорлық технологиялар.
Сур.1 протокормалардың пайда болуы: А-эпифит Laelia sincorana Schltr.; B-laelia iundii Rchb литофиті.f. et Warm.
Клондық микро көбеюді көптеген жолдармен жасауға болады. Клондық микропропагацияның негізгі түрлері:
oo апикальды үстемдікті басу және аксиларлы бүйректің дамуы;
oo микротүтікшелер;
oo білім микроклубней, микролуковиц;
oo әсер етуші бүйректің пайда болуының индукциясы;
oo содан кейін органогенез немесе эмбриоидогенез индукциясымен каллус тінін алу.
Аксиларлы қашу арқылы көбейту.
Жоғары өсімдіктердің көпшілігінде өсудің аралық түрі бар, онда жапырақтардың сүйектерінде қосымша меристематикалық ұлпалар болады, олар негізгі өсімдіктерге ұқсас өсінділерде пайда болады.
Сурет 2. Қолданыстағы меристемалардың дамуын белсендіру (I жол), эксплантта адвентивті бүршіктердің пайда болуын индукциялау (II жол) әдісімен өсімдіктердің клональды микро көбеюінің схемасы:
1 - Бастапқы эксплантты таңдау; 2 - стерильді дақыл алу; 3 - тікелей бастапқы эксплантта адвентивті бүршіктердің пайда болуы; 4 - бүйректің өсуі және микропобегтердің пайда болуы; 5 - микропобегтердің көбеюі (кесу); 7 - төмен температурада регенерант өсімдіктерін сақтау; 8-өсімдіктерді жылыжай жағдайларына ауыстыру; 9 - регенерант өсімдіктерін отырғызу топырақ.
Өсімдіктің осы түріне тән тармақталу түріне сәйкес аксиларлы меристематикалық тіндердің шектеулі саны дамиды. Олардың көпшілігінің дамуы тежелген апикальды үстемдік құбылысына байланысты (апикальды бүршіктердің басым дамуына байланысты бүйірлік бүршіктердің өсуін басу). Клондық микропроцессордың бұл әдісінің негізі апикальды үстемдікті жою және аксиларлы меристемаларды белсендіру болып табылады. Бұл қол жеткізу мүмкін жоюды верхушечной меристемы сабақтарының және кейіннен микрочеренкованием қашу in vitro безгормональной ортада (сур. 3). Апикальды үстемдік бірнеше гормоналды жүйелермен басқарылатын болса да, көптеген өсімдіктерде аксиларлы өсінділердің өсуі, сайып келгенде, меристематикалық тіндерді цитокининдермен қамтамасыз етуге байланысты. Апикальды үстемдікті алып тастау ортаға цитокинин белсенділігі бар заттарды енгізу арқылы да мүмкін (сурет. 3), бұл салыстырмалы түрде қысқартылған интеродтары бар өсінділердің пайда болуына әкеледі, ал аксиларлы өсінділер мен меристематикалық түйнектер жаңа өсінділерді тудырады.
Сурет 3. Аксиларлы меристемаларды белсендіру арқылы өсімдіктердің көбею схемасы:
1 - апикальды меристеманы алып тастау арқылы: 2-ортаға гормондар қосу арқылы.
Гормондарсыз негізгі ортада өсірілетін қашу ұштары, әдетте, апикальды үстемдігі бар жалғыз қашу түрінде дамиды. Цитокинині бар ортада өсірілгенде, негізгі қашу көбінесе дамымаған, одан кейін екінші ретті қашу, содан кейін үшінші және т. б. тез қалыптасады өсіп келе жатқан қашу. Мұндай байлам жеткілікті түрде дамығаннан кейін оны жалпы тамыр жүйесі бар кішкентай туфтерге немесе жаңа ортада өскенде бірдей қашу туфтерін құра алатын жеке өсінділерге бөлуге болады. Жақсы теңдестірілген орта болған кезде, бұл процесс шексіз жалғасуы мүмкін. Мысалы, гладиолидің тез өсетін өсінділері 11 жыл бойы физиологиялық нашарлаусыз сақталды.
Дамымаған аксиларлы өсінділердің пайда болу жылдамдығы in vitro жапырақтарының қалыптасу жылдамдығына байланысты. Соңғысы өсімдіктердің түріне және қоректік ортаның жарамдылығына байланысты өзгереді. Белгілі бір дәрежеде көбею жылдамдығын цитокинин концентрациясы мен Қолданылатын ыдыстың мөлшерімен басқаруға болады. Әр түрлі өсімдіктерде жылдамдық әр түрлі болады, жақсы өсетін өсімдіктер үшін ол 4 - тен 8 аптаға дейін бес-он есе артады. Мысалы, гербераны көбейту кезінде қашудың жоғарғы жағы 4,62 мкМл цитокинин бар қоректік ортаға орналастырылады. Сабақтың жоғарғы өсуі отырғызудан 7-8 күн өткен соң басталады. Негізінде жапырақтары бар вегетативті қашу 5-6 аптадан кейін пайда болады. Қашудың негізінде каллус дамып, тамырлар сараланады. Бүршіктер жапырақтардың сүйектеріне салынады. Цитокининнің ортаға 1,38 - 4,62 мкМл енгізілуі екінші және үшінші реттік аксиларлы өсінділерді құрайтын бүйірлік бүршіктердің оянуына және тез дамуына әкеледі. Аксиларлы бүршіктерден шыққан өсінділерді кинетиннің бірдей концентрациясы бар ортаға оқшаулау және беру кезінде аксиларлы бүршіктердің активтену процесі қайталанады, ал 3-4 аптада 8-10 қашу пайда болады.
2,31-13,29 мкмл концентрациясындағы BAP (6 - бензиламинопурин) таңқурай, шие, қара өрік, алма ағаштарының аксиларлы қашуының дамуын ынталандырады. Сонымен қатар, стерильді алынған бір шыңнан жылына бірнеше мың өсімдік алуға болады. Мысалы, in vitro таңқурай меристемасын өсіру кезінде 50 000 өсімдікке дейін ұрпақтар алуға болады, ал әдеттегі кесу әдісі жылына 50 өсімдік алуды қамтамасыз етеді.
Аксиларлы қашу алу үшін IN vitro-да пайда болған қашудың немесе қосалқы қашудың кесілген ұштары мәдениетке енгізіледі. Көбею үшін қажет тіндерді апикальды тіндерден кесуге болады немесе бүйірлік қашу. Сыртқы жапырақтарда ластануды болдырмау үшін матаның мөлшерін шектеңіз (1 - 5 мм).
Апикальды эксплуатация неғұрлым көп болса, соғұрлым ол тез өседі және өмір сүру мүмкіндігі соғұрлым жоғары болады. Апикальды эксплант әдетте цитокинин мен ауксин концентрациясы төмен ортаға орналастырылады. Әрбір келесі трансплантация кезінде ортадағы цитокинин деңгейі көбеюдің максималды жылдамдығына жеткенше біртіндеп артады. Егер тіннің түбінде каллустың пайда болу тенденциясы байқалса, ауксин ортадан шығарылады. Цитокининдер әрдайым дерлік тамырлардың пайда болуын тежейді, сондықтан келесі өсіру циклі нәтижесінде пайда болған қашу байламдары оңай бөлінеді. Цитокинині жоқ ортаға ауысқан кезде тамырлардың пайда болуы өздігінен жүреді, әсіресе монокотилонды өсімдіктерде.
Өсімдіктердің микро көбеюінің басты мәселесі-фитохормондардың қоршаған ортаға шоғырлануы. Микро көбеюге негіз болатын Мурасигтің еңбектерінде цитокининдердің жоғары концентрациясы туралы мәліметтер келтірілген, сонымен қатар қоректік орта құрамы мен өсіру шарттары туралы дайын ұсыныстар берілген. Алайда, көбеюдің максималды коэффициентін алу үшін цитокининдердің жоғары концентрациясын қолдану өсімдік морфологиясының өзгеруі, аксиларлы меристемалардың көбеюін басу және қашудың тамырлану қабілетін төмендету сияқты микро-көбеюге жағымсыз әсерлерді тудырады.
Микро-көбеюдің жеткілікті жылдамдығын қамтамасыз ететін цитокининдердің минималды концентрациясы бар қоректік ортаны пайдалану, сондай-ақ фитохормондардың төмен деңгейі бар ортада өсіру циклдерінің ауысуы цитокининдердің қоректік ортада үнемі болуына байланысты уытты әсерін болдырмауға көмектеседі.
1.3 Клондық микропроцессордың әртүрлі кезеңдеріндегі өсімдік тіндерін өсіру кезеңдері мен әдістері
Микро көбейту процесі бірқатар дәйекті операциялардан тұрады, олардың әрқайсысының өзіндік ерекшелігі бар. Клондық микропропагация кезеңдері:
oo тиісті экспланттарды іріктеу, оларды стерилизациялау және қоректік ортаға көшіру ;
oo микропроцессордың өзі;
oo өскіндердің тамырлануы, содан кейін оларды топырақ жағдайларына бейімдеу;
- жылыжай жағдайында өсімдіктерді өсіру және оларды далаға отырғызуға дайындау.
I кезең. Түсіндіруді таңдағанда, қолданылатын өсімдік түрін де, микро көбейту әдісін де ескеру қажет. Микроклондарды алу процесіне жыл мезгілі және ата-аналық өсімдіктің даму кезеңі әсер етеді, эксплант реакциясы көбінесе өсімдіктің қай мүшесінен алынғанына байланысты. Көптеген өсімдіктер белсенді өсу кезеңінде мәдениетке жақсы енсе де, кейбір өсімдіктердің экспланттары тек ұйқысыз фазада қашу түзеді. Лалагүл шамдарының таразыларының экспланттарынан жазда немесе қыста емес, көктемде немесе күзде қабылданса, балалардың қалпына келуін алу оңай. Наурыз айында оқшауланған апикальды карнавация меристемасы өміршең өсімдіктердің ең көп пайызын береді. Өсімдіктердің абсолютті жасы неғұрлым аз болса, қашу соғұрлым қарқынды өседі. Бұл тәуелділік әсіресе ағаш өсімдіктерінде айқын көрінеді.
Эксплантты оқшаулау және оны зарарсыздандыру туралы айтатын болсақ, стерилизацияның сәттілігіне әсер ететін экспланттың ата - аналық донор өсімдіктерін арнайы даярлау мәселесін елемеуге болмайды.
Рудбекия розеткалық өсімдігінің стерильді мәдениетін алу үшін оны сабақты созу үшін қысқа күннен бірнеше күнге ұзақ күннің жағдайына ауыстырған жөн. Бұл жердегі жапырақтардың розеткасының пайда болуына әкеледі өсімдіктердің сабақтарының бөліктері. Бұл жағдайда әдеттегі стерилизациялық ерітінділерді қолдану жақсы нәтиже береді.
Гербера-Розетка өсімдігі, оның қысқартылған сабағы апекспен бірге жерге батырылады. Сонымен қатар, қашудың жоғарғы жағы көптеген түктермен жабылған, олардың арасында жердің ұсақ бөлшектері жиналады. Мұның бәрі жалпы қабылданған шаралармен зарарсыздандыруды қиындатады. Тек аналық өсімдіктерді отырғызу әдісін өзгерту арқылы қанағаттанарлық нәтижелерге қол жеткізілді. Аналық өсімдіктерді сабақтың өсу нүктесі жерден жоғары болатындай етіп отырғызу керек.
Деберг пен Мейн микро көбеюде арнайы нөлдік кезеңді бөлуді ұсынады, оның мақсаты өсімдіктерді экспланттарды оқшаулауға дайындау болуы керек.
Нөлдік кезеңде өсімдіктерді төмен ылғалдылықпен және шектеулі суарумен жылыжайларда өсіру керек. Су топыраққа тікелей тамырға түсіп, арнайы капиллярлар арқылы енуі керек. Жоғарыдан суарудан аулақ болу керек. Бұл жағдайлар Өсімдіктердің өсуіне қолайлы емес, бірақ жұқтырған өсімдіктердің саны күрт төмендейді. Эксплантты оқшаулаудан бірнеше апта бұрын өсімдіктер пестицидтермен өңделеді, ал оның эксплант ретінде қызмет ететін бөлігі қоздырғыштардың жәндіктермен берілуіне жол бермеу үшін дәке сөмкесімен жабылады.
Қоректік ортаның химиялық құрамы, оның физикалық қасиеттері микропроцессордың әр кезеңінде қоршаған орта орындайтын міндеттерге сәйкес келуі керек. Бірінші кезеңде антиоксиданттар (цистеин, глутатион, аскорбин қышқылы) көбінесе қоректік ортаға енгізіледі, бұл гидролитикалық ферменттердің әсерін және отырғызылған экспланттардың өлімін болдырмайды. Мейер эксплантты оқшаулаудың барлық операцияларын аскорбин қышқылына малынған сүзгі қағазында жүргізуді ұсынады, ал экспланттарды дайындау кезінде және оларды трансплантациялау кезінде тіндерді құрамында антиоксиданттар бар ерітіндіге батырады.
Белсендірілген көмірді қосу қашудың өсуіне пайдалы әсер етеді. Белсендірілген көмір эксплант шығаратын улы заттарды адсорбциялайды. Сонымен қатар, көмір ортадан және биологиялық белсенді заттардан адсорбцияланады, бұл олардың бастапқы концентрациясын айтарлықтай төмендетеді.
Сондықтан белсендірілген көмірі бар ортада фитохормондардың жоғары концентрациясын енгізу қажет.
Микро көбеюдің бірінші кезеңінің маңыздылығы барлық кейінгі көбею процесі тіндердің немесе мүшелердің бастапқы мәдениетін алуға байланысты болатындығына байланысты.
Бірінші кезеңде қоректік ортада минералды тұздардың, көмірсулардың, дәрумендердің, цитокининдердің және ауксиндердің, кейде гиббереллиндердің жоғары концентрациясы болады.
II кезең-көбеюдің өзі. Кейбір жағдайларда екінші кезеңдегі қоректік ортаның құрамы (көбеюдің өзі) өзгеріссіз қалады. Басқа жағдайларда ол in vitro морфогенетикалық реакцияларды тудыратын гормондармен байытылады.
1 2 3
4 5 6
7 8
Сурет 8. Раушанның микроклональды көбеюі.
1-раушан өсімдіктері; 2-3 - кесу; 4 - экспланттарды зарарсыздандыру; 5 - қашудың пайда болуы; 6 - микро - өсімдіктердің ризогенезі; 7-құмыраларға микро-өсімдіктерді отырғызу; 8-жылыжайда микро-өсімдіктердің тамырлануы мен өмір сүруі үшін жоғары ылғалдылықты сақтау.
Көп жағдайда зерттеушілер Мурасиг пен Скуга ортасын қалайды. Экзогендік фитогормондардың көмегімен морфогенезді реттеу өсімдіктердің клональды микро көбеюінің негізі болып табылады. Ең көп қолданылатын цитокининдердің қатарына 0,5 мгл дейінгі концентрациядағы кинетин, БАП, зеатин, ауксиндер - ИУК және НУК жатады.
III-IV кезеңдер-микро-жүгірістердің тамырлануы, олардың топырақ жағдайларына бейімделуі және далаға отырғызылуы. Бұл ең көп уақытты қажет ететін кезеңдер, бұл клондық микропроцессордың сәттілігіне байланысты. Жерге тамырлау және отырғызу кезеңінде қоршаған ортаның негізгі құрамы әдетте өзгереді. Азайтады тұздарды және көмірсуларды, жоққа цитокинины қосады ауксины. Қашудың қалыпты тамырлануы үшін қажет ауксиндердің концентрациясын таңдау бірқатар себептерге байланысты. Олардың ішінде біз ата-аналық өсімдіктердің түрлері мен сорттық сипаттамаларына, қолданылатын ауксиннің түріне, сондай-ақ қашу өсіру сатысында фитохормондардың концентрациясы мен қатынасына байланысты қашудың тамырлануына тұқым қуалайтын бейімділігін атаймыз. Өскіндердің тамырлануы кезіндегі ауксиндердің тиімділігі микро көбеюдің бірінші және екінші кезеңдерінде қоректік ортаға енгізілген цитокининдердің жоғары дозаларының әсерінен айтарлықтай төмендейді. Алғашқы кезеңдерде өсіру кезінде алдымен цитокининдердің жоғары, содан кейін төмен концентрациясы бар ортаны қолданған жөн.
Кейбір жағдайларда тамырдың пайда болуы хлороген немесе ферул қышқылдарының қосылуымен ынталандырылады. Сондай - ақ, пробиркалардан алынған қашудың базальды бөлігін ауксин түріндегі стимуляторлардың ерітінділерімен 3-6 сағат жоғары концентрацияда емдеуді, содан кейін оларды гормоналды емес агаризацияланған ортада немесе қолайлы субстратта ex vitro-да тамырлауды ұсынуға болады. Бұл әдіс кейбір жағдайларда ауксиндердің ортада тұрақты болуына қарағанда қолайлы.
Микроклондарды жерге отырғызудың ең жақсы уақыты-бұл тамырлар өсе бастайтын кезең, ал жас жапырақтары жеткілікті дамыған және фотосинтезге қабілетті болады, бұл өсімдіктің толық дербестігін қамтамасыз етеді. Алдында высадкой топыраққа жарықтандыру, әдетте, арттырады дейін 10000 лк. Жарықтандырудың жоғары қарқындылығы өсімдіктердің өсуін кешіктіріп, кішкентай хлороздарды тудыруы мүмкін, алайда топырақтағы бұл өсімдіктер жарықтың жоғары қарқындылығына дейін алдын-ала қатайтылмаған өсімдіктерге қарағанда әлдеқайда жақсы және күшті өседі.
Түтікшелі өсімдіктерді жерге трансплантациялаудың ең қолайлы уақыты-көктем немесе жаздың басы. Екі-үш жапырақтары мен дамыған тамыр жүйесі бар өсімдіктер колбалардан немесе пробиркалардан пинцеттермен Мұқият алынып тасталады. Тамыры агар қалдықтарынан жуылады және топырақ субстратына отырғызылады, бұрын 85-90 0С-да 1-2 сағат бойы стерильденеді.көптеген өсімдіктер үшін қоспалар субстрат ретінде келесі қатынастарда қолданылады: шымтезек : құм (3:1); шымтезек : шымтезек : перлит (1:1:1); шымтезек : құм : перлит (1:1:1). Регенерант өсімдіктері өсірілетін сүңгуірлер немесе шымтезек құмыралары алдын-ала дайындалған топырақ субстратымен толтырылады.
Кемедегі қашу өсіру кезінде ауаның салыстырмалы ылғалдылығы 100% жететіні белгілі. Сондықтан қалпына келтірілген өсімдіктердің ex vitro акклиматизациясының негізгі міндеті трансплантациядан кейінгі алғашқы күндерде салыстырмалы түрде жоғары ылғалдылықты қалыптастыру болып табылады, өйткені судың едәуір жоғалуы микроклондардың өліміне әкелуі мүмкін. Өсімдіктердің жақсы өсуі үшін жасанды тұман жағдайлары жасалады. Мұндай жағдайларды жасау мүмкін болмаған жағдайда, өсімдіктер бар кәстрөлдер шыны банкалармен немесе пластикалық пакеттермен жабылған. Жоғары ылғалдылықпен жағдай жасамай, өте тез құлдырау байқалады регенеранттардың жапырақтары және өсімдіктердің кейінгі өлімі. Өсімдіктердің өліміне әкелетін себептердің бірі-жапырақтардың жоғары транспирациялық белсенділігі мен тамырлардың төмен сіңіру қабілеті нәтижесінде пайда болатын су тапшылығы болуы мүмкін. Сонымен қатар, судың шамадан тыс жоғалуы in vitro өсіретін өсінділерде кутикулярлық балауыздың болмауымен байланысты болуы мүмкін. Жерге отырғызылған Өсімдіктердің өмір сүруін арттыру үшін олар қатаяды: 1-1,5 апта ішінде олардың ашық ауада болу ұзақтығы артады.
Үнді ғалымдары in vitro өсіретін өсімдіктердің жапырақтарын дала жағдайларына трансплантациялау кезінде тез сусызданудың алдын алудың қарапайым әдісін ұсынды: акклиматизация кезеңінде жапырақтарды глицериннің 50% Сулы ерітіндісімен немесе парафин (май) және диэтил эфирінің қоспасымен шашырату керек (1:1). Бұл әдісті қолдану пробирка өсімдіктерін қатайтудың ұзақ және қиын процестерінен аулақ болуға көмектеседі және 100% өмір сүруді қамтамасыз етеді.
Отырғызудан 20-30 күн өткен соң, жақсы тамырланған өсімдіктер Кнудсон, Мурасиг және Скуга, Чесноков, Кнопа (өсімдік түріне байланысты) тұздарымен немесе күрделі минералды тыңайтқышпен қоректенеді. Микроклондар өскен сайын олар жаңа субстраты бар үлкен контейнерлерге отырғызылады. Жерсіндірілген өсімдіктерді одан әрі өсіру өсімдіктің осы түрін өсірудің қабылданған ауылшаруашылық технологиясына сәйкес келеді.
2 In vitro жолымен раушанның көбеюіне шолу
In vitro раушанының көбеюі қажетті сипаттамалары бар сорттардың тез таралуында және сау және аурусыз өсімдіктер алуда өте маңызды рөл атқарды. Соңғы бірнеше жыл ішінде in vitro раушандарын өсірудің әртүрлі тәсілдері жасалды. Апикальды бүршіктерді немесе түйіндік сегменттерді қолдану арқылы микропроцессор және әртүрлі кезеңдердегі нақты талаптарды түсіну әдебиетте жан-жақты қамтылған. Өскіндердің көбеюінің жоғары жылдамдығы және экономикалық әдістерді дамыту үшін хаттамаларды жетілдірудің жаңа мәселелері жақында маңызды болды. Өскіндердің өсуі мен раушан тамырларының индукциясы үшін сұйық статикалық мәдениеттің маңыздылығы осы шолуда талқыланады. Әрі қарай, өсімдіктерді жақсарту бағдарламалары үшін қолданылатын әртүрлі биотехнологиялық әдістерді сәтті енгізудің маңызды қадамы болып саналатын in vitro өсімдіктерді қалпына келтіру хаттамасын жасау әдебиетте тиісті назар аударды. Органогенез немесе соматикалық эмбриогенез нәтижесінде раушанның тез қалпына келуі және көбеюі туралы бірнеше мәліметтер бар. Жалпы, нақты шолу-бұл in vitro раушанының көбеюі туралы жиынтық есеп.
Раушан - ең маңызды тауарлық дақылдардың бірі. Ол әдетте кесу, төсеу, бүршіктеу және егу сияқты вегетативті әдістермен таралады. Тұқымдар түрлерді, жаңа сорттарды көбейту және тамыр өсіру үшін қолданылады ( Хорн, 1992 ). Раушандарды вегетативті жолмен көбейту басым әдіс болғанымен, ол сау және аурусыз өсімдіктерді қамтамасыз етпейді. Сонымен қатар, жыл мезгіліне тәуелділік және көбеюдің баяу қарқыны әдеттегі көбеюдегі басқа да негізгі шектеуші факторлардың бірі болып табылады.
Соңғы бірнеше жылда in vitro өсіру коммерциялық питомникте төңкеріс жасады (Пьер, 1991 ). In vitro көбею процедурасының маңызды белгілері-бұл салыстырмалы түрде қысқа уақыт ішінде оның үлкен мультипликативті қабілеті; сау және аурусыз өсімдіктерді өсіру; және оның жыл бойына насихаттауды қалыптастыру мүмкіндігі ( Дхаван және Бхожвани, 1986 ). Мартин (1985) осы технологияның көмегімен жыл сайын бір раушаннан 400 000-ға дейін өсімдіктерді клондауға болатындығын көрсетті. Бұл әдіс раушан өсіруші үшін өте маңызды, өйткені ол жаңа сорттарды тез көбейтуге мүмкіндік береді. Микро көбейту өсімдіктері кесілген гүлдерді өсіру үшін жақсы жұмыс істейді, өйткені олар ықшам ( Onesto et al., 1985), жақсырақ тармақталған және кейде көбірек гүлдер шығарады ( Reist, 1985). Сонымен қатар, қопсытылған өсімдіктерді өсіру үшін қолданылатын тіндік дақылдардан алынған ергежейлі раушандар өсу қарқыны жоғары, ерте гүлдейді және дәстүрлі түрде өсетін өсімдіктерге қарағанда қысқа қашу мен көбірек жақтарын көрсетеді ( Дубоис соавт.,1988 ).
Раушан тіндерін өсіру тарихы 1945 жылдан басталады, сол кезде Нобекур мен Кофлер ашылған бүршіктерге каллус пен тамыр ала алды. 1946 жылы Ламмент алғаш рет раушан өсіруде эмбрион мәдениетін қолдану туралы хабарлады. Зерттеулер Никелл мен Тулекке (1959) және Вайнштейн және т.б. басталды. (1962) дифференциация мен регенерацияны түсіну үшін жасуша, жасуша суспензиясы және каллус өсіру үшін. Хилл (1967) "Доктор"гибридті шай раушанында сүйек тіндерінен қашудың алғашқы органогенезі туралы хабарлады. Раушанның микро-көбеюіне ең алғашқы сілтемелерді Jacob et al жасады., 1969 , Jacob et al., 1970a , Jacob et al., 1970b ielliotta (1970) R. hybrida cv-де. Superstar және R. multiflora сәйкесінше.
Осы жаңашыл күш - жігерден бастап көптеген мәліметтер жиналды және микро-көбейтуге ерекше назар аудара отырып, in vitro раушандарын зерттеудің әртүрлі аспектілері бойынша бірқатар мақалалар жарияланды. Бұл шолуда раушан тіндерінің дақылдарын зерттеу туралы жиынтық есеп берілген.
Микро-көбеюдің ең маңызды әдісі-меристеманың өсуі, онда апикальды бүршіктер немесе аксиларлы бүршігі бар түйіндік сегменттер каллустың аралық фазасынсыз бірнеше қашуды қалпына келтіру үшін өсіріледі. Раушанның микро көбеюі бойынша жұмыс 1-кестеде келтірілген .
Кесте 1 . Әр түрлі эксплантаттарды қолдана отырып, in vitro раушандарын көбейту
Түрлері сортары
Эксплант
Жауаптары
Сілтеме
Роза мультифлора
apm
Умножение побегов
Эллиотт, 1970 г.
Роза мультифлора , Роза индика
ул
Умножение побегов
Грайфенберг и др., 1975 г.
Rosa hybrida cv. Навсегда твой
ул
Размножение побегов, укоренение
Скирвин и Чу, 1979 г.
Роза гибридная cvs. Королевский выкуп, Обильный парад, Благоухающее облако, Лили Марлен, Желтый гранат, Лимонный столб Пола
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Дэвис, 1980
Rosa hybrida cv. Улучшенное пламя и золотое свечение
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Хасэгава, 1980 г.
Rosa hybrida cv. Улучшенное пламя
ул
Умножение побегов
Брессан и др., 1982 г.
ул
Укоренение
Hyndman et al., 1982a
Роза гибридная cvs. Tropicana, Bridal Pink, Rosa damascena , Rosa canina
ул, ам
Размножение побегов, укоренение
Хош-Хуй и Раковина, 1982а
Роза гибридная cvs. Tropicana, свадебный розовый
ул
Размножение побегов, укоренение
Хош-Хуй и Раковина, 1982b
Роза гибридная cvs. Багровая слава, Гленфидитч
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Барве и др., 1984
Роза гибридная
фунт
Размножение побегов, укоренение
Зауэр и др., 1985
Rosa hybrida cv. Королева Елизавета
apm
Размножение побегов, укоренение
Дуглас и др., 1989 г.
Роза гибридная cvs. Ландора, Дева, Морская Жемчужина, Суперзвезда, Счастье, Королева Елизавета
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Рут и др., 1990
Миниатюрная роза 'Rosamini'
apm, am
Размножение побегов, укоренение
Кампос и Пайс, 1990 г.
Rosa chinensis cv. Минимумы
ул
Размножение побегов, укоренение
Чу и др., 1993
Чайно-гибридный сорт. Доктор Верхаге
apm, am
Размножение побегов, укоренение
Вовяци и др., 1995 г.
Роза гибридная cvs. Сладкое обещание, Мотреа
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Марселис ван Аккер и Шолтен, 1995 год.
Rosa bankiae , Rosa laevigata , Rosa odorata , Rosa rugosa , Rosa roxburghii , Rosa setigera , Rosa wichuraina
ул, фунт
Размножение побегов, укоренение
Ян и др., 1996
Чайно-гибридная роза сорт. Мир
ул, ам
Размножение побегов, укоренение
Ара и др., 1997
Миниатюрная роза 'The Fairy'
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Саху и Дебата, 1997 г.
Роза сентифолия
являюсь
Умножение побегов
Ганга и др., 1998 г.
Роза x hybrida cv. Соня
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Сингх и Шьямал, 1999 г.
Rosa damascena var. Джвала
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Кумар и др., 2001
Rosa hybrida cv. Baronesse
являюсь
Умножение побегов
Карелли и Эчеверригарай, 2002 г.
Роза дамасская и Роза бурбоньяна
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Pati et al., В печати
ам-аксиларлы меристемалар; апм-апикальды меристемалар; lb - бүйірлік бүйрек; st - ату ұшы.
2.1 . Микропропагация кезеңдері
Сәтті микро-көбейту протоколы бірнеше кезеңдерден өтеді, олардың әрқайсысында белгілі бір талаптар жиынтығы бар. Бұл (i) асептикалық дақылдардың басталуы, (ii) қашудың көбеюі, (iii) микробтардың тамырлануы және (iv) өсімдік тіндерінің өсірілген дақылдарының өрісіне қатаюы және берілуі.
2.1.1 . Асептикалық мәдениеттерді бастамашылық ету
2.1.1.1 . Эксплантатты таңдау
Өсіруді бастау үшін эксплантатты таңдау көбінесе in vitro көбейту үшін қолданылатын әдіске байланысты. Вегетативті меристемалары бар эксплантаттар көбінесе күшейтілген аксиларлы бұтақтарға жарайды (1-кесте ). Ең жиі қолданылатын экспланттар-бұл бірнеше өсінділерді қалыптастыру үшін аксиларлы бүршіктер кеңейтілген түйін сегменті ( сурет 1 ). Түйін сегменттерінің сипаттамалары қашу ұштарына қарағанда әлдеқайда жақсы (Хорн, 1992 ).
Сурет 1 . (A-G) Rosa damascena микро көбеюі . (а) аксиларлы бүйректің өсуі. (B)сұйық ортада және агармен ортада, гельмен ортада қашу некрозы. (c) сұйық ортада тамырлау. (d) Кәстрөлдердегі қатайтылған өсімдіктер.
Микропроцессордың бастапқы кезеңіне әртүрлі параметрлер әсер етеді. Медерос пен Энрикес (1987) қылқан жапырақты сабақтардан алынған бүршіктер жапырақтарға қарағанда анағұрлым сезімтал екенін анықтады. Rout et al. (1989a) және Bressan et al. (1982) R. hybrida әр түрлі сорттарындағы сабақтағы түйіннің орналасуына байланысты қашудың көбею жылдамдығында айтарлықтай айырмашылықтар байқалды . Жоғарғы және сабақтың түбіне жақын орналасқан бүршіктер дамудың ең баяу жылдамдығын көрсетті, бірақ сабақтың ортаңғы бөлігіндегі бүршіктер өте тез өсті. Негізгі осьтегі позициямен байланысты аксиларлы бүршіктердің өсу потенциалы бірнеше гормондар арасындағы тепе-теңдікпен анықталады ( Sato and Mori, 2001). Сонымен қатар, өсімдіктердің ортаңғы бөлігіндегі аксиларлы бүршіктер өсу әлеуетіне ие; алайда олар шыңның үстемдігіне байланысты бұзылмаған өсімдіктерде өсе алмайды. Апикальды үстемдікті жою бұл тепе-теңдікті өзгерте алады. Ашу Rout et al. (1989a) және Bressan et al. (1982) осы контексте түсінуге болатын сабақтың түйінінің орналасуына байланысты қашу өсіру жылдамдығындағы айырмашылықтар туралы.
Mederos және Enriquez (1987) түйіндік эксплантаттарда жапырақшалардың болуы қашу өсуіне ингибиторлық әсер ететіндігін хабарлады. Бұл есеп R. hybrida бойынша Marcelis van Acker and Scholten (1995) жұмысымен қосымша расталды . Салехи мен Хош-Хуй ( 1997) эксплантаттың ұзындығы мен диаметрі миниатюралық раушан қашуының көбеюі мен өсуінде маңызды рөл атқаратынын анықтады (R. chinensis cv. Минима)," кішкентай Буккаро", " Baby Masquerado "және"Sourati". Сондай - ақ, олар қашудың ең жақсы өсу және өсу қарқыны ұзындығы шамамен 9,0 - 10,0 мм және диаметрі шамамен 3,0-3,5 мм болатын эксплантаттардан алынғанын хабарлады. бурбониана (Пати, 2002 ). Алехно мен Высоцкий (1986) гибридті шаймен , флорибунда және раушанның миниатюралық сорттарымен жұмыс істей отырып, өсіп келе жатқан өсінділер тік өсінділермен салыстырғанда көлденеңінен өсіп келе жатқанын хабарлады. Эксплантатты көлденең орналастыру кезінде аксиларлы пролиферацияның жоғарылауы қоршаған ортамен байланыстың жоғарылауына байланысты қоршаған орта компоненттерінің көп сіңуіне байланысты болуы мүмкін (Маккай және Китто, 1988 ). Ұқсас нәтижелер алмұрт ( Lane, 1979 ) және лалагүл ( Hildebrandt and Harney, 1983) үшін де алынды.
2.1.1.2 . Стерилизация
Асептикалық дақылдарды бастау үшін Өсімдіктердің физиологиялық мәртебесі мен әртүрлі патологиялық ластаушы заттарға сезімталдығын мұқият білу қажет. Көптеген экспланттарда әдетте қолданылатын процедура бастапқы экспланттардың 70% беттік стерилизациясын қамтиды (об. Об.) Этанол 20-30 с, содан кейін 0,1% HgCl 2 5-7 минут ішінде және стерильді дистилденген сумен шаю (Rout et al. al., 1989a , Rout et al., 1989b , Rout et al., 1990 , Skirvin et al., 1990 ). Алайда, Хош-хуи және раковина, 1982а, Хош-хуи және раковина, 1982b , Скирвин және Чу (1979) және Хасегава (1979)қашудың ұштарын натрий гипохлоритімен (5,25%) және "егіз 20" немесе Triton X (0,1%) 5-10 минут ішінде зарарсыздандырып, содан кейін стерильді тазартылған суда жуады. Салехи мен Хош-Хуй (1997) әр түрлі антибиотиктердің стерильді ерітіндісін (гентамицин, ампициллин, тетрациклин немесе амоксициллин) әр түрлі концентрацияда және ұзақтықта ішкі ластанудан зарарсыздандыру үшін қолданды. Олар бетті зарарсыздандырмас бұрын антибиотик ерітіндісін қолдану сәтсіз болғанын байқады. Алайда, беткі стерилизациядан кейін 100 мг л концентрациясы бар гентамицин немесе ампициллин ерітіндісіне батыру дезинфекцияланған эксплантаттардың ең көп пайызына әкелді. Бұл айырмашылықты түсінуге болады, өйткені беткі зарарсыздандыру кезінде эксплантаттың ашық ұштары алынып, жаңа өткізгіш ұлпаны қалдырады, бұл антибиотик ерітінділерінің ұлпаның ішіне терең енуіне мүмкіндік береді, нәтижесінде дезинфекция жылдамдығы жоғарылайды.
2.1.1.3 . Ортаны қуыру
Ортаның қызаруы-бұл PvP (поливинилпирролидон), лимон қышқылы немесе аскорбин қышқылы немесе жиі субкультивация ( Rout et al., 1999 ) немесе егуден кейін толық қараңғылықта бір-екі күн бойы дақылдарды инкубациялау, өйткені полифенол оксидазасының белсенділігі жарықпен индукцияланғаны анықталды ( Питтет және Монкоусин, 1981 ). Curir et al. (1986) көмір бар ортада өсірудің 3 күні, содан кейін жаңа ортаға көшу бастапқы экспланттардың өсуін күшейту үшін жоғары тиімді болды деп мәлімдеді.
2.1.2 . Қашуды көбейту
Бұл микропроцессордың ең маңызды кезеңі. Микро көбейту хаттамасының сәттілігі көбінесе қашудың жылдамдығы мен әдісіне байланысты. Төменде in vitro раушанында қашудың көбеюіне әсер ететін әртүрлі факторлар келтірілген.
2.1.2.1 . Түрлері генотиптері сорттары
Хорн (1992) генотиптердің Флорибунда мен шай-гибридті раушанның әртүрлі сорттарында in vitro көбеюіне айқын әсерін атап өтті. Ол кардинал мен Лилли Марлен сорттарын өсіру оңай екенін, ал антена, Мерседес, Пасадена және Алтын Таймс өсіру өте қиын екенін байқады. Хош-хуи және раковина, ... жалғасы
Сіз бұл жұмысты біздің қосымшамыз арқылы толығымен тегін көре аласыз.
Кіріспе ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
6
1
Атмосфераның ластану мәселесіне әдебиеттік шолу ... ... ... ... ... ... .
8
1.1
Энегетика өндірістерінің (ЖЭО, ЖЭС, ГЭС) атмосфера ауасының
ластануына қосатын үлесі ... ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .
8
1.1.1
Электр энергетикасы объектілерінің атмосфералық ауаға әсері ... ...
8
1.1.2
Атмосфера ауасының энергетика шығарындыларымен ластану
сипаты ... ... ... ... ... ... ... . ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
9
1.1.3
Атмосфералық ауаның ластануының адам денсаулығына әсері ... ...
11
1.1.4
Көмір өндіру саласы объектілерінің атмосфералық ауаға әсері ... ...
12
1.2
Тау-кен өндірісінің атмосфера ауасының ластануына қосатын
үлесі (шахта, түсті меллургия, байыту фабрикалары, металлургия зауыттары) ... ... ... ... ... ... . ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
13
1.2.1
Атмосфераға шығарындылар және атмосфералық ауаның
ластануы ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ..
20
1.3
Машина жасау өндірістерінің атмосфера ауасының ластануына
қосатын үлесі ... ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ..
22
2
Атморсфера ауасының мониторингін жасау әдістемесі ... ... ... ... ... .
28
2.1
Зерттеу нысандары ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
28
2.2
Атмосфера ауасының ластануын бақылау жұмыстарын
ұйымдастыру ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
28
2.3
Құралдар және нұсқа алу әдістемесі ... ... ... ... ... ... . ... ... ... ... ... ... ...
33
2.4
Зиянды заттар концентрациясын индикатор түтігімен анықтау ... ...
36
3
Зерттеу бөлімі ... ... ... ... ... ... ... . ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ..
40
4
Еңбек қауіпсіздігінің жай-күйін бағалау ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ..
46
Қорытынды ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .
51
Пайдаланған әдебиеттер тізімі ... ... ... ... ... ... ... . ... ... ... ... ... ... ... ... .
52
ҚЫСҚАРТУЛАР
BAP 6-бензиламинопурин
IBA - индол-3-май қышқылы
NAA - α-нафталин сірке қышқылы
ТДЗ - Тидиазурон
IAA - индол-3-сірке қышқылы
КІРІСПЕ
Соңғы уақытта Қазақстанда қалалар мен жаңа құрылыстар санының өсуіне байланысты жасыл желектер құру қажеттілігі туындап отыр, олардан скверлер, саябақтар, аллеялар мен топтық посадтар қалыптастырылуда. Аумақты көгалдандыру үшін қоғамдық жерлерде қылқан жапырақты және жапырақты ағаштар, бұталар, сондай-ақ эстетикалық функцияны ғана емес, сонымен қатар белгілі бір микро-климатты құратын гүлді сәндік өсімдіктердің әртүрлі формалары қолданылады. Өсімдіктердің өсуі мен дамуы үшін қолайсыз климаттың қатал болуына байланысты (температураның күрт өзгеруі, топырақтың тұздануы мен ылғал тапшылығымен бірге күннің жоғары оқшаулануы) Қазақстан аборигендік дендрофлора мен сәндік өсімдіктердің шектеулі құрамымен ерекшеленеді, бұл одан әрі көгалдандыру жұмыстарын жүргізу үшін өсімдіктерді жерсіндіру мен жерсіндіру қажеттілігін негіздейді. Раушанның көптеген сорттары дәстүрлі түрде шламмен таралады, көшеттерге немесе клональды қорларға егіледі. Алайда, вакцинация - бұл қымбат процедура,ал дәстүрлі өсіру-бұл еңбек процесі.
Биотехнологияның бір жаңалығы болды раушанның коммерциялық сорттарын микроклональды көбейту мен раушан өсірудің дәстүрлі әдістерінің баламасы. Селекциялық және тұқым өсіру жұмысының тиімділігін арттыру жасушалық технологияларды, атап айтқанда, in vitro микроклональды көбеюін қолданумен байланысты. Бұл әдіс бірегей генотиптерді (алыс гибридтер, асыл тұқымды үлгілер, биоинженерлік әдістерді қолдана отырып алынған формалар) тез арада таратуға және өндіріске жаңа сорттарды енгізуді тездетуге мүмкіндік береді (RuzicD., 2006: 149-153, Saxena G., 2000: 133-140). Микроклональды көбеюдің маңызды артықшылығы-бұл әдіспен алынған отырғызу материалы оған өсімдік берген генетикалық жағынан бірдей. Дәстүрлі әдістермен салыстырғанда бұл биотехнологиялық әдіс саңырауқұлақ және бактериялық патогендерден, вирустық, микоплазмалық және нематодты инфекциялардан сауықтырылған материал алуға, сондай-ақ көбеюдің жоғары коэффициентіне қол жеткізуге мүмкіндік береді, өйткені клондық микро көбею кезінде сіз жылына 100 000 клон ала аласыз, ал әдеттегі жағдайда-дәл сол уақытта тек 50-100 өсімдік алынады (DasP., 2010: 70-78,PratarK.P., 2006: 94-114). Селекциялық процестің тиімділігін азайту мүмкіндігі де маңызды болып табылады, нақты технологиялар климаттық жағдайларға қарамастан жыл бойы жұмыс істеуге және отырғызу материалын өсіру үшін қажетті аумақты үнемдеуге мүмкіндік береді. Технологияның экономикалық тиімділігі көптеген Еуропа елдерінде көрсетілген, олар сәндік өсімдіктердің сәндік материалдарын жаппай көбейту үшін микроклональды көбейту әдісін қолдана отырып, сәндік Гүл өсімдіктеріне жыл сайын өсіп келе жатқан сұранысты қанағаттандырады (KimS.W., 2009: 199-203, Khosravi P., 2007: 100-104, Nak-Udom N., 2009: 583-586). Қазақстанда сәндік гүл өсімдіктерінің коммерциялық сорттарының ландшафтық дизайны мен өсірілуі көп еңбекті қажет ететін көбейту әдістеріне балама болып табылатын сәндік өсімдіктердің сапалы отырғызу материалын жаппай тираждау және жылдам ұдайы молайтуға негізделген рентабельді және әмбебап технологияның болмауына байланысты нашар дамыған. Бұл жұмыс микроклональды көбейту In vitro әдісі негізінде қазақстандық селекцияның будандары мен раушандарының коммерциялық сорттарын жедел көбейтудің тиімді әдістерін жасауға арналған.
1. Роза гүлін in vitro жағдайында микрокөбейту әдісіне әдебиеттік шолу
1.1 Роза гүлі
Роза - гүлдердің патшайымы. Жалынды махаббат пен тәжім етудің, сүйкімділіктің нышаны. Раушан бағзы замандардан-ақ ең сәнді өсімдік саналып келген. Аталған гүлдің әдемілігі жағынан да, түсінің байлығы жағынан да, мұрныңызды жарардай хош исі тұрғысынан да теңдесі жоқ десек, артық айтқандық емес.
Ежелгі Иран халқында осы гүлдің көркемдігі туралы жүздеген томды кітаптар жазылған. Еңбектегі Иран халқының ақындарының айтуынша, раушан Тәңірдің тарту еткен сыйы екен. Күндердің күнінде Флора патшалығының балалары Құдайдан өздеріне қашанда ұйқыда жүріп, билеушіге тән міндеттерін есінен шығарып ала беретін Лотостан басқа патша тағайындап беруін жалынып сұрайды. Мейірімді Аллаһ Тағала өтініштеріне құлақ асып, оларға өткір тікенді, періштедей пәк ақ раушанды жібереді.
Раушан гүлінің тарихы жер бетінде адамзат баласы пайда болмай тұрғанда, яғни осыдан 25 миллион жыл бұрын басталатындығына көптеген ғалымдардың еңбектеріндегі деректер дәлел бола алады.
Раушан туралы қолжазбалардағы ең көне деректер Тигр мен Ефрат өзендерінің арасында орын тепкен Ура қаласындағы патша моласынан табылған (осыдан 5000 жыл бұрын).
Конфуцийдің еңбектеріне сүйенер болсақ, ежелгі Қытайдың патшалық кітапханасында раушан туралы 600 кітап болған екен. Және сол кездің өзінде қытайлықтар раушан майын дайындау тәсілін жетік білген. Б.з.д. 372-287 жылдары өмір сүрген Теофраст раушан гүлдің жабайы және бақта өсетін түрлерін ажыратып берген. Ал, көненің көзі саналатын Алтай қорғандарынан (б.з.д. V - IV ғ.ғ.) раушандар бейнеленген күміс тиындар табылған.
Раушандар әлеміндегі соңғы жаңалықтар:
::Әр түрлі елдердің селекционерлерінің арқасында бүгінде раушанның шамамен 25 000 сұрпы алынған.
::Раушанды сұрыптауды жүргізіп отырған алпауыт мемлекеттердің басында Франция, АҚШ және Англия тұр.
::Раушан гүлдері ақ, алқызыл, сары тіпті қара және көгілдір түсті болып келеді. Гавай аралдарының көгілдір аспандарының астында көгілдір күлтелі раушандар жайқалып тұрады.
::Раушандардың ең сирек кездесетін түрі - меруерт раушандар. Мұндай гүлдер Румынияның Клуж қаласындағы Напока ботаникалық бағында өсіріледі. Күлтелері ашық жасыл түсті бұл таңғажайып раушандар инеліктің қанатын еске түсіреді.
:: Бұл аз десеңіз, соңғы уақытта мұңды кейіптейтін қара раушандар дүниеге келген.
:: Италияда өткен гүлдер көремесіне сабағында бірде-бір тікен жоқ ақ раушан гүлі қойылған.
Қазақстан ғылым академиясының Бас ботаник. бағында 1957 -- 84 ж. аралығында Раушангүл тұқымдасының әсемдік түрі -- раушан гүлінің 16 сорты шығарылған. Ең бастылары: "Қазақстандық мерекелік" (биікт. 130 см-дей, гүлі қызыл түсті); "Алматыдан сәлем" (биікт. 130 см-дей, гүлі қызғылт түсті); "Алматы хош иістісі" (биікт. 190 см-дей, гүлі қызғылт түсті, хош иісті); "Қызжібек" (биікт. 110 см, гүлі қызыл күрең түсті); "Аққу" (биікт. 250 см-дей, гүлі ақ түсті); "Гүлсұлу" (биікт. 190 см-дей, гүлі қызыл күрең түсті, қыста үсімейді), т.б.
1.2 Клондық микро көбею
Жаңасын енгізу жолындағы маңызды кедергілердің бірі тәжірибеде сорттар-көп мөлшерде алу мүмкін еместігі вегетативті көбею үшін тұқым немесе отырғызу материалы. Бұл кедергі биотехнологияның көмегімен жойылады селекционерлерге микро көбейтудің тиімді және жылдам әдісі өсімдіктер. In vitro эксперименталды морфогенез процесін зерттеу ұйымның барлық деңгейлерінде - жеке тордан қашу шыңына дейін клондық микропроцессорлық технологияның пайда болуына әкелді көптеген елдерде қазірдің өзінде коммерциялық болып табылатын өсімдіктер. Клондық микропропагация-массалық асексуалдық жасушалар мен ұлпалар мәдениетінде Өсімдіктердің көбеюі өсімдіктердің пайда болған формалары генетикалық жағынан түпнұсқаға ұқсас данасына Бұл алынған отырғызу материалы өте маңызды өсімдіктің генетикалық жағынан ұқсас әдісі, ол өсімдіктердің соматикалық жасушаларынан пайда болады. Жыныстық көбею кезінде ұрпақтар бірігу нәтижесінде пайда болған зиготадан дамиды екі түрлі адамның ұрық жасушалары. Бұл зигота құрамында гендер бар әке мен ана ағзасы, сондықтан ұрпақ, жыныстық көбею кезінде пайда болатын, бірдей емес кейбір ата-аналарға және екі ата-ананың да тұқым қуалайтын бейімділігін көтереді. Клондық микропроцессордың артықшылықтары дәстүрлі әдістермен:
oo генетикалық біртекті отырғызу материалын алу; саңырауқұлақ және бактериялық патогендерден өсімдіктерді сауықтыру, вирустық, микоплазмалық және нематодты инфекциялар;
oo жоғары көбею коэффициенті: клональды микро көбейту жылына 100 000-1000 000 клон алуға болады, ал қалыпты жағдайда-сол мерзімде тек 5 100;
oo селекциялық процестің ұзақтығын қысқарту;
oo дәстүрлі түрде көбейту қиын өсімдіктердің таралуы тәсілдермен;
oo жыл бойы жұмыс жүргізу мүмкіндігі және үнемдеу;
oo отырғызу материалын өсіру үшін қажетті алаңдар.
Өнім санына сәйкес көбейту технологиясы in vitro-ны кішігірім және ауқымды деп бөлуге болады. Бұл бөлім мақсаттармен және қолдану салаларымен байланысты.
Клондық микропропагация қолданылады:
oo көп мөлшерді тез алу үшін вируссыз материал (бұл технология әдіске негізделген, апикальды меристематикалық тіндердің мәдениеті ретінде белгілі ірі масштабты технология);
oo аз санды сақтау және көбейту үшін селекциядағы жеке генотиптер (үлкен масштабты қажет етпейді);
oo жаңа өсірілген сорттарды тез көбейтуге арналған (дейін ай ішінде бірнеше мың өсімдік, ал дәстүрлі әдістерді қолдану бірнеше жылға созылады);
oo ағаш өсімдіктерін көбейту, өсіру және селекция ұзақтығына байланысты баяу жүзеге асырылатын немесе вегетативті көбеюдің болмауы (осы түрлердің көпшілігі вегетативті көбею қиын, ал кейбір жағдайларда, мысалы, монокотилонды пальмалар үшін және кейбір орман ағаштарының түрлері, жалпы вегетативті көбею мүмкін емес);
oo гетерозис гибридтерін немесе басқаларын ұстауға арналған өсімдіктерді кесіп өту кезінде бөлінетін гетерозиготалар;
oo сирек кездесетін және Құрып кету қаупі төнген түрлерді сақтауға арналған заттар, мысалы, женьшень, оның ауқымы Қиыр Шығыста (Қытай, Корея, Ресей), тек Қытайда Ресеймен шекарада сақталған .
Клондық микропроцессордың негізін қалаушы француз ғалымы Жорж Морель. 1960 жылы ол осы әдісті жасады орхидеялар үшін. Эксплант ретінде Ж. Морель жоғарғы жағын қолданды цимидиум (сем. Орхидея), өсу конусынан және белгілі бір жағдайларда екі жапырақты бүршіктерден тұрады сфералық түзілімдер пайда болды - протокормалар (сурет.1). Қалыптасқан хаттамаларды бөлуге болады, содан кейін жаңадан дайындалған қоректік заттарға өздігінен өсіріңіз жапырақты примордиялар мен тамырлар пайда болғанға дейінгі орта. Нәтижесінде атындағы бұл процесс шексіз және оны алуға болатындығы анықталды жоғары сапалы және генетикалық біртекті, безвирусный отырғызылатын материал. Біздің елде клондық микропроцессорлық жұмыстар болды 60-шы жылдары тіндер мәдениеті және морфогенез зертханасында басталды. Өсімдіктер физиологиясы институты. К. А. Тимирязева РАН. Астында профессор Р. Г. Бутенконың басшылығымен жағдайлар зерттелді картоптың, қант қызылшасының, Қалампырдың, гербераның микропозициялары, фреезиялар және басқа да өсімдіктер, өнеркәсіптік микропроцессорлық технологиялар.
Сур.1 протокормалардың пайда болуы: А-эпифит Laelia sincorana Schltr.; B-laelia iundii Rchb литофиті.f. et Warm.
Клондық микро көбеюді көптеген жолдармен жасауға болады. Клондық микропропагацияның негізгі түрлері:
oo апикальды үстемдікті басу және аксиларлы бүйректің дамуы;
oo микротүтікшелер;
oo білім микроклубней, микролуковиц;
oo әсер етуші бүйректің пайда болуының индукциясы;
oo содан кейін органогенез немесе эмбриоидогенез индукциясымен каллус тінін алу.
Аксиларлы қашу арқылы көбейту.
Жоғары өсімдіктердің көпшілігінде өсудің аралық түрі бар, онда жапырақтардың сүйектерінде қосымша меристематикалық ұлпалар болады, олар негізгі өсімдіктерге ұқсас өсінділерде пайда болады.
Сурет 2. Қолданыстағы меристемалардың дамуын белсендіру (I жол), эксплантта адвентивті бүршіктердің пайда болуын индукциялау (II жол) әдісімен өсімдіктердің клональды микро көбеюінің схемасы:
1 - Бастапқы эксплантты таңдау; 2 - стерильді дақыл алу; 3 - тікелей бастапқы эксплантта адвентивті бүршіктердің пайда болуы; 4 - бүйректің өсуі және микропобегтердің пайда болуы; 5 - микропобегтердің көбеюі (кесу); 7 - төмен температурада регенерант өсімдіктерін сақтау; 8-өсімдіктерді жылыжай жағдайларына ауыстыру; 9 - регенерант өсімдіктерін отырғызу топырақ.
Өсімдіктің осы түріне тән тармақталу түріне сәйкес аксиларлы меристематикалық тіндердің шектеулі саны дамиды. Олардың көпшілігінің дамуы тежелген апикальды үстемдік құбылысына байланысты (апикальды бүршіктердің басым дамуына байланысты бүйірлік бүршіктердің өсуін басу). Клондық микропроцессордың бұл әдісінің негізі апикальды үстемдікті жою және аксиларлы меристемаларды белсендіру болып табылады. Бұл қол жеткізу мүмкін жоюды верхушечной меристемы сабақтарының және кейіннен микрочеренкованием қашу in vitro безгормональной ортада (сур. 3). Апикальды үстемдік бірнеше гормоналды жүйелермен басқарылатын болса да, көптеген өсімдіктерде аксиларлы өсінділердің өсуі, сайып келгенде, меристематикалық тіндерді цитокининдермен қамтамасыз етуге байланысты. Апикальды үстемдікті алып тастау ортаға цитокинин белсенділігі бар заттарды енгізу арқылы да мүмкін (сурет. 3), бұл салыстырмалы түрде қысқартылған интеродтары бар өсінділердің пайда болуына әкеледі, ал аксиларлы өсінділер мен меристематикалық түйнектер жаңа өсінділерді тудырады.
Сурет 3. Аксиларлы меристемаларды белсендіру арқылы өсімдіктердің көбею схемасы:
1 - апикальды меристеманы алып тастау арқылы: 2-ортаға гормондар қосу арқылы.
Гормондарсыз негізгі ортада өсірілетін қашу ұштары, әдетте, апикальды үстемдігі бар жалғыз қашу түрінде дамиды. Цитокинині бар ортада өсірілгенде, негізгі қашу көбінесе дамымаған, одан кейін екінші ретті қашу, содан кейін үшінші және т. б. тез қалыптасады өсіп келе жатқан қашу. Мұндай байлам жеткілікті түрде дамығаннан кейін оны жалпы тамыр жүйесі бар кішкентай туфтерге немесе жаңа ортада өскенде бірдей қашу туфтерін құра алатын жеке өсінділерге бөлуге болады. Жақсы теңдестірілген орта болған кезде, бұл процесс шексіз жалғасуы мүмкін. Мысалы, гладиолидің тез өсетін өсінділері 11 жыл бойы физиологиялық нашарлаусыз сақталды.
Дамымаған аксиларлы өсінділердің пайда болу жылдамдығы in vitro жапырақтарының қалыптасу жылдамдығына байланысты. Соңғысы өсімдіктердің түріне және қоректік ортаның жарамдылығына байланысты өзгереді. Белгілі бір дәрежеде көбею жылдамдығын цитокинин концентрациясы мен Қолданылатын ыдыстың мөлшерімен басқаруға болады. Әр түрлі өсімдіктерде жылдамдық әр түрлі болады, жақсы өсетін өсімдіктер үшін ол 4 - тен 8 аптаға дейін бес-он есе артады. Мысалы, гербераны көбейту кезінде қашудың жоғарғы жағы 4,62 мкМл цитокинин бар қоректік ортаға орналастырылады. Сабақтың жоғарғы өсуі отырғызудан 7-8 күн өткен соң басталады. Негізінде жапырақтары бар вегетативті қашу 5-6 аптадан кейін пайда болады. Қашудың негізінде каллус дамып, тамырлар сараланады. Бүршіктер жапырақтардың сүйектеріне салынады. Цитокининнің ортаға 1,38 - 4,62 мкМл енгізілуі екінші және үшінші реттік аксиларлы өсінділерді құрайтын бүйірлік бүршіктердің оянуына және тез дамуына әкеледі. Аксиларлы бүршіктерден шыққан өсінділерді кинетиннің бірдей концентрациясы бар ортаға оқшаулау және беру кезінде аксиларлы бүршіктердің активтену процесі қайталанады, ал 3-4 аптада 8-10 қашу пайда болады.
2,31-13,29 мкмл концентрациясындағы BAP (6 - бензиламинопурин) таңқурай, шие, қара өрік, алма ағаштарының аксиларлы қашуының дамуын ынталандырады. Сонымен қатар, стерильді алынған бір шыңнан жылына бірнеше мың өсімдік алуға болады. Мысалы, in vitro таңқурай меристемасын өсіру кезінде 50 000 өсімдікке дейін ұрпақтар алуға болады, ал әдеттегі кесу әдісі жылына 50 өсімдік алуды қамтамасыз етеді.
Аксиларлы қашу алу үшін IN vitro-да пайда болған қашудың немесе қосалқы қашудың кесілген ұштары мәдениетке енгізіледі. Көбею үшін қажет тіндерді апикальды тіндерден кесуге болады немесе бүйірлік қашу. Сыртқы жапырақтарда ластануды болдырмау үшін матаның мөлшерін шектеңіз (1 - 5 мм).
Апикальды эксплуатация неғұрлым көп болса, соғұрлым ол тез өседі және өмір сүру мүмкіндігі соғұрлым жоғары болады. Апикальды эксплант әдетте цитокинин мен ауксин концентрациясы төмен ортаға орналастырылады. Әрбір келесі трансплантация кезінде ортадағы цитокинин деңгейі көбеюдің максималды жылдамдығына жеткенше біртіндеп артады. Егер тіннің түбінде каллустың пайда болу тенденциясы байқалса, ауксин ортадан шығарылады. Цитокининдер әрдайым дерлік тамырлардың пайда болуын тежейді, сондықтан келесі өсіру циклі нәтижесінде пайда болған қашу байламдары оңай бөлінеді. Цитокинині жоқ ортаға ауысқан кезде тамырлардың пайда болуы өздігінен жүреді, әсіресе монокотилонды өсімдіктерде.
Өсімдіктердің микро көбеюінің басты мәселесі-фитохормондардың қоршаған ортаға шоғырлануы. Микро көбеюге негіз болатын Мурасигтің еңбектерінде цитокининдердің жоғары концентрациясы туралы мәліметтер келтірілген, сонымен қатар қоректік орта құрамы мен өсіру шарттары туралы дайын ұсыныстар берілген. Алайда, көбеюдің максималды коэффициентін алу үшін цитокининдердің жоғары концентрациясын қолдану өсімдік морфологиясының өзгеруі, аксиларлы меристемалардың көбеюін басу және қашудың тамырлану қабілетін төмендету сияқты микро-көбеюге жағымсыз әсерлерді тудырады.
Микро-көбеюдің жеткілікті жылдамдығын қамтамасыз ететін цитокининдердің минималды концентрациясы бар қоректік ортаны пайдалану, сондай-ақ фитохормондардың төмен деңгейі бар ортада өсіру циклдерінің ауысуы цитокининдердің қоректік ортада үнемі болуына байланысты уытты әсерін болдырмауға көмектеседі.
1.3 Клондық микропроцессордың әртүрлі кезеңдеріндегі өсімдік тіндерін өсіру кезеңдері мен әдістері
Микро көбейту процесі бірқатар дәйекті операциялардан тұрады, олардың әрқайсысының өзіндік ерекшелігі бар. Клондық микропропагация кезеңдері:
oo тиісті экспланттарды іріктеу, оларды стерилизациялау және қоректік ортаға көшіру ;
oo микропроцессордың өзі;
oo өскіндердің тамырлануы, содан кейін оларды топырақ жағдайларына бейімдеу;
- жылыжай жағдайында өсімдіктерді өсіру және оларды далаға отырғызуға дайындау.
I кезең. Түсіндіруді таңдағанда, қолданылатын өсімдік түрін де, микро көбейту әдісін де ескеру қажет. Микроклондарды алу процесіне жыл мезгілі және ата-аналық өсімдіктің даму кезеңі әсер етеді, эксплант реакциясы көбінесе өсімдіктің қай мүшесінен алынғанына байланысты. Көптеген өсімдіктер белсенді өсу кезеңінде мәдениетке жақсы енсе де, кейбір өсімдіктердің экспланттары тек ұйқысыз фазада қашу түзеді. Лалагүл шамдарының таразыларының экспланттарынан жазда немесе қыста емес, көктемде немесе күзде қабылданса, балалардың қалпына келуін алу оңай. Наурыз айында оқшауланған апикальды карнавация меристемасы өміршең өсімдіктердің ең көп пайызын береді. Өсімдіктердің абсолютті жасы неғұрлым аз болса, қашу соғұрлым қарқынды өседі. Бұл тәуелділік әсіресе ағаш өсімдіктерінде айқын көрінеді.
Эксплантты оқшаулау және оны зарарсыздандыру туралы айтатын болсақ, стерилизацияның сәттілігіне әсер ететін экспланттың ата - аналық донор өсімдіктерін арнайы даярлау мәселесін елемеуге болмайды.
Рудбекия розеткалық өсімдігінің стерильді мәдениетін алу үшін оны сабақты созу үшін қысқа күннен бірнеше күнге ұзақ күннің жағдайына ауыстырған жөн. Бұл жердегі жапырақтардың розеткасының пайда болуына әкеледі өсімдіктердің сабақтарының бөліктері. Бұл жағдайда әдеттегі стерилизациялық ерітінділерді қолдану жақсы нәтиже береді.
Гербера-Розетка өсімдігі, оның қысқартылған сабағы апекспен бірге жерге батырылады. Сонымен қатар, қашудың жоғарғы жағы көптеген түктермен жабылған, олардың арасында жердің ұсақ бөлшектері жиналады. Мұның бәрі жалпы қабылданған шаралармен зарарсыздандыруды қиындатады. Тек аналық өсімдіктерді отырғызу әдісін өзгерту арқылы қанағаттанарлық нәтижелерге қол жеткізілді. Аналық өсімдіктерді сабақтың өсу нүктесі жерден жоғары болатындай етіп отырғызу керек.
Деберг пен Мейн микро көбеюде арнайы нөлдік кезеңді бөлуді ұсынады, оның мақсаты өсімдіктерді экспланттарды оқшаулауға дайындау болуы керек.
Нөлдік кезеңде өсімдіктерді төмен ылғалдылықпен және шектеулі суарумен жылыжайларда өсіру керек. Су топыраққа тікелей тамырға түсіп, арнайы капиллярлар арқылы енуі керек. Жоғарыдан суарудан аулақ болу керек. Бұл жағдайлар Өсімдіктердің өсуіне қолайлы емес, бірақ жұқтырған өсімдіктердің саны күрт төмендейді. Эксплантты оқшаулаудан бірнеше апта бұрын өсімдіктер пестицидтермен өңделеді, ал оның эксплант ретінде қызмет ететін бөлігі қоздырғыштардың жәндіктермен берілуіне жол бермеу үшін дәке сөмкесімен жабылады.
Қоректік ортаның химиялық құрамы, оның физикалық қасиеттері микропроцессордың әр кезеңінде қоршаған орта орындайтын міндеттерге сәйкес келуі керек. Бірінші кезеңде антиоксиданттар (цистеин, глутатион, аскорбин қышқылы) көбінесе қоректік ортаға енгізіледі, бұл гидролитикалық ферменттердің әсерін және отырғызылған экспланттардың өлімін болдырмайды. Мейер эксплантты оқшаулаудың барлық операцияларын аскорбин қышқылына малынған сүзгі қағазында жүргізуді ұсынады, ал экспланттарды дайындау кезінде және оларды трансплантациялау кезінде тіндерді құрамында антиоксиданттар бар ерітіндіге батырады.
Белсендірілген көмірді қосу қашудың өсуіне пайдалы әсер етеді. Белсендірілген көмір эксплант шығаратын улы заттарды адсорбциялайды. Сонымен қатар, көмір ортадан және биологиялық белсенді заттардан адсорбцияланады, бұл олардың бастапқы концентрациясын айтарлықтай төмендетеді.
Сондықтан белсендірілген көмірі бар ортада фитохормондардың жоғары концентрациясын енгізу қажет.
Микро көбеюдің бірінші кезеңінің маңыздылығы барлық кейінгі көбею процесі тіндердің немесе мүшелердің бастапқы мәдениетін алуға байланысты болатындығына байланысты.
Бірінші кезеңде қоректік ортада минералды тұздардың, көмірсулардың, дәрумендердің, цитокининдердің және ауксиндердің, кейде гиббереллиндердің жоғары концентрациясы болады.
II кезең-көбеюдің өзі. Кейбір жағдайларда екінші кезеңдегі қоректік ортаның құрамы (көбеюдің өзі) өзгеріссіз қалады. Басқа жағдайларда ол in vitro морфогенетикалық реакцияларды тудыратын гормондармен байытылады.
1 2 3
4 5 6
7 8
Сурет 8. Раушанның микроклональды көбеюі.
1-раушан өсімдіктері; 2-3 - кесу; 4 - экспланттарды зарарсыздандыру; 5 - қашудың пайда болуы; 6 - микро - өсімдіктердің ризогенезі; 7-құмыраларға микро-өсімдіктерді отырғызу; 8-жылыжайда микро-өсімдіктердің тамырлануы мен өмір сүруі үшін жоғары ылғалдылықты сақтау.
Көп жағдайда зерттеушілер Мурасиг пен Скуга ортасын қалайды. Экзогендік фитогормондардың көмегімен морфогенезді реттеу өсімдіктердің клональды микро көбеюінің негізі болып табылады. Ең көп қолданылатын цитокининдердің қатарына 0,5 мгл дейінгі концентрациядағы кинетин, БАП, зеатин, ауксиндер - ИУК және НУК жатады.
III-IV кезеңдер-микро-жүгірістердің тамырлануы, олардың топырақ жағдайларына бейімделуі және далаға отырғызылуы. Бұл ең көп уақытты қажет ететін кезеңдер, бұл клондық микропроцессордың сәттілігіне байланысты. Жерге тамырлау және отырғызу кезеңінде қоршаған ортаның негізгі құрамы әдетте өзгереді. Азайтады тұздарды және көмірсуларды, жоққа цитокинины қосады ауксины. Қашудың қалыпты тамырлануы үшін қажет ауксиндердің концентрациясын таңдау бірқатар себептерге байланысты. Олардың ішінде біз ата-аналық өсімдіктердің түрлері мен сорттық сипаттамаларына, қолданылатын ауксиннің түріне, сондай-ақ қашу өсіру сатысында фитохормондардың концентрациясы мен қатынасына байланысты қашудың тамырлануына тұқым қуалайтын бейімділігін атаймыз. Өскіндердің тамырлануы кезіндегі ауксиндердің тиімділігі микро көбеюдің бірінші және екінші кезеңдерінде қоректік ортаға енгізілген цитокининдердің жоғары дозаларының әсерінен айтарлықтай төмендейді. Алғашқы кезеңдерде өсіру кезінде алдымен цитокининдердің жоғары, содан кейін төмен концентрациясы бар ортаны қолданған жөн.
Кейбір жағдайларда тамырдың пайда болуы хлороген немесе ферул қышқылдарының қосылуымен ынталандырылады. Сондай - ақ, пробиркалардан алынған қашудың базальды бөлігін ауксин түріндегі стимуляторлардың ерітінділерімен 3-6 сағат жоғары концентрацияда емдеуді, содан кейін оларды гормоналды емес агаризацияланған ортада немесе қолайлы субстратта ex vitro-да тамырлауды ұсынуға болады. Бұл әдіс кейбір жағдайларда ауксиндердің ортада тұрақты болуына қарағанда қолайлы.
Микроклондарды жерге отырғызудың ең жақсы уақыты-бұл тамырлар өсе бастайтын кезең, ал жас жапырақтары жеткілікті дамыған және фотосинтезге қабілетті болады, бұл өсімдіктің толық дербестігін қамтамасыз етеді. Алдында высадкой топыраққа жарықтандыру, әдетте, арттырады дейін 10000 лк. Жарықтандырудың жоғары қарқындылығы өсімдіктердің өсуін кешіктіріп, кішкентай хлороздарды тудыруы мүмкін, алайда топырақтағы бұл өсімдіктер жарықтың жоғары қарқындылығына дейін алдын-ала қатайтылмаған өсімдіктерге қарағанда әлдеқайда жақсы және күшті өседі.
Түтікшелі өсімдіктерді жерге трансплантациялаудың ең қолайлы уақыты-көктем немесе жаздың басы. Екі-үш жапырақтары мен дамыған тамыр жүйесі бар өсімдіктер колбалардан немесе пробиркалардан пинцеттермен Мұқият алынып тасталады. Тамыры агар қалдықтарынан жуылады және топырақ субстратына отырғызылады, бұрын 85-90 0С-да 1-2 сағат бойы стерильденеді.көптеген өсімдіктер үшін қоспалар субстрат ретінде келесі қатынастарда қолданылады: шымтезек : құм (3:1); шымтезек : шымтезек : перлит (1:1:1); шымтезек : құм : перлит (1:1:1). Регенерант өсімдіктері өсірілетін сүңгуірлер немесе шымтезек құмыралары алдын-ала дайындалған топырақ субстратымен толтырылады.
Кемедегі қашу өсіру кезінде ауаның салыстырмалы ылғалдылығы 100% жететіні белгілі. Сондықтан қалпына келтірілген өсімдіктердің ex vitro акклиматизациясының негізгі міндеті трансплантациядан кейінгі алғашқы күндерде салыстырмалы түрде жоғары ылғалдылықты қалыптастыру болып табылады, өйткені судың едәуір жоғалуы микроклондардың өліміне әкелуі мүмкін. Өсімдіктердің жақсы өсуі үшін жасанды тұман жағдайлары жасалады. Мұндай жағдайларды жасау мүмкін болмаған жағдайда, өсімдіктер бар кәстрөлдер шыны банкалармен немесе пластикалық пакеттермен жабылған. Жоғары ылғалдылықпен жағдай жасамай, өте тез құлдырау байқалады регенеранттардың жапырақтары және өсімдіктердің кейінгі өлімі. Өсімдіктердің өліміне әкелетін себептердің бірі-жапырақтардың жоғары транспирациялық белсенділігі мен тамырлардың төмен сіңіру қабілеті нәтижесінде пайда болатын су тапшылығы болуы мүмкін. Сонымен қатар, судың шамадан тыс жоғалуы in vitro өсіретін өсінділерде кутикулярлық балауыздың болмауымен байланысты болуы мүмкін. Жерге отырғызылған Өсімдіктердің өмір сүруін арттыру үшін олар қатаяды: 1-1,5 апта ішінде олардың ашық ауада болу ұзақтығы артады.
Үнді ғалымдары in vitro өсіретін өсімдіктердің жапырақтарын дала жағдайларына трансплантациялау кезінде тез сусызданудың алдын алудың қарапайым әдісін ұсынды: акклиматизация кезеңінде жапырақтарды глицериннің 50% Сулы ерітіндісімен немесе парафин (май) және диэтил эфирінің қоспасымен шашырату керек (1:1). Бұл әдісті қолдану пробирка өсімдіктерін қатайтудың ұзақ және қиын процестерінен аулақ болуға көмектеседі және 100% өмір сүруді қамтамасыз етеді.
Отырғызудан 20-30 күн өткен соң, жақсы тамырланған өсімдіктер Кнудсон, Мурасиг және Скуга, Чесноков, Кнопа (өсімдік түріне байланысты) тұздарымен немесе күрделі минералды тыңайтқышпен қоректенеді. Микроклондар өскен сайын олар жаңа субстраты бар үлкен контейнерлерге отырғызылады. Жерсіндірілген өсімдіктерді одан әрі өсіру өсімдіктің осы түрін өсірудің қабылданған ауылшаруашылық технологиясына сәйкес келеді.
2 In vitro жолымен раушанның көбеюіне шолу
In vitro раушанының көбеюі қажетті сипаттамалары бар сорттардың тез таралуында және сау және аурусыз өсімдіктер алуда өте маңызды рөл атқарды. Соңғы бірнеше жыл ішінде in vitro раушандарын өсірудің әртүрлі тәсілдері жасалды. Апикальды бүршіктерді немесе түйіндік сегменттерді қолдану арқылы микропроцессор және әртүрлі кезеңдердегі нақты талаптарды түсіну әдебиетте жан-жақты қамтылған. Өскіндердің көбеюінің жоғары жылдамдығы және экономикалық әдістерді дамыту үшін хаттамаларды жетілдірудің жаңа мәселелері жақында маңызды болды. Өскіндердің өсуі мен раушан тамырларының индукциясы үшін сұйық статикалық мәдениеттің маңыздылығы осы шолуда талқыланады. Әрі қарай, өсімдіктерді жақсарту бағдарламалары үшін қолданылатын әртүрлі биотехнологиялық әдістерді сәтті енгізудің маңызды қадамы болып саналатын in vitro өсімдіктерді қалпына келтіру хаттамасын жасау әдебиетте тиісті назар аударды. Органогенез немесе соматикалық эмбриогенез нәтижесінде раушанның тез қалпына келуі және көбеюі туралы бірнеше мәліметтер бар. Жалпы, нақты шолу-бұл in vitro раушанының көбеюі туралы жиынтық есеп.
Раушан - ең маңызды тауарлық дақылдардың бірі. Ол әдетте кесу, төсеу, бүршіктеу және егу сияқты вегетативті әдістермен таралады. Тұқымдар түрлерді, жаңа сорттарды көбейту және тамыр өсіру үшін қолданылады ( Хорн, 1992 ). Раушандарды вегетативті жолмен көбейту басым әдіс болғанымен, ол сау және аурусыз өсімдіктерді қамтамасыз етпейді. Сонымен қатар, жыл мезгіліне тәуелділік және көбеюдің баяу қарқыны әдеттегі көбеюдегі басқа да негізгі шектеуші факторлардың бірі болып табылады.
Соңғы бірнеше жылда in vitro өсіру коммерциялық питомникте төңкеріс жасады (Пьер, 1991 ). In vitro көбею процедурасының маңызды белгілері-бұл салыстырмалы түрде қысқа уақыт ішінде оның үлкен мультипликативті қабілеті; сау және аурусыз өсімдіктерді өсіру; және оның жыл бойына насихаттауды қалыптастыру мүмкіндігі ( Дхаван және Бхожвани, 1986 ). Мартин (1985) осы технологияның көмегімен жыл сайын бір раушаннан 400 000-ға дейін өсімдіктерді клондауға болатындығын көрсетті. Бұл әдіс раушан өсіруші үшін өте маңызды, өйткені ол жаңа сорттарды тез көбейтуге мүмкіндік береді. Микро көбейту өсімдіктері кесілген гүлдерді өсіру үшін жақсы жұмыс істейді, өйткені олар ықшам ( Onesto et al., 1985), жақсырақ тармақталған және кейде көбірек гүлдер шығарады ( Reist, 1985). Сонымен қатар, қопсытылған өсімдіктерді өсіру үшін қолданылатын тіндік дақылдардан алынған ергежейлі раушандар өсу қарқыны жоғары, ерте гүлдейді және дәстүрлі түрде өсетін өсімдіктерге қарағанда қысқа қашу мен көбірек жақтарын көрсетеді ( Дубоис соавт.,1988 ).
Раушан тіндерін өсіру тарихы 1945 жылдан басталады, сол кезде Нобекур мен Кофлер ашылған бүршіктерге каллус пен тамыр ала алды. 1946 жылы Ламмент алғаш рет раушан өсіруде эмбрион мәдениетін қолдану туралы хабарлады. Зерттеулер Никелл мен Тулекке (1959) және Вайнштейн және т.б. басталды. (1962) дифференциация мен регенерацияны түсіну үшін жасуша, жасуша суспензиясы және каллус өсіру үшін. Хилл (1967) "Доктор"гибридті шай раушанында сүйек тіндерінен қашудың алғашқы органогенезі туралы хабарлады. Раушанның микро-көбеюіне ең алғашқы сілтемелерді Jacob et al жасады., 1969 , Jacob et al., 1970a , Jacob et al., 1970b ielliotta (1970) R. hybrida cv-де. Superstar және R. multiflora сәйкесінше.
Осы жаңашыл күш - жігерден бастап көптеген мәліметтер жиналды және микро-көбейтуге ерекше назар аудара отырып, in vitro раушандарын зерттеудің әртүрлі аспектілері бойынша бірқатар мақалалар жарияланды. Бұл шолуда раушан тіндерінің дақылдарын зерттеу туралы жиынтық есеп берілген.
Микро-көбеюдің ең маңызды әдісі-меристеманың өсуі, онда апикальды бүршіктер немесе аксиларлы бүршігі бар түйіндік сегменттер каллустың аралық фазасынсыз бірнеше қашуды қалпына келтіру үшін өсіріледі. Раушанның микро көбеюі бойынша жұмыс 1-кестеде келтірілген .
Кесте 1 . Әр түрлі эксплантаттарды қолдана отырып, in vitro раушандарын көбейту
Түрлері сортары
Эксплант
Жауаптары
Сілтеме
Роза мультифлора
apm
Умножение побегов
Эллиотт, 1970 г.
Роза мультифлора , Роза индика
ул
Умножение побегов
Грайфенберг и др., 1975 г.
Rosa hybrida cv. Навсегда твой
ул
Размножение побегов, укоренение
Скирвин и Чу, 1979 г.
Роза гибридная cvs. Королевский выкуп, Обильный парад, Благоухающее облако, Лили Марлен, Желтый гранат, Лимонный столб Пола
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Дэвис, 1980
Rosa hybrida cv. Улучшенное пламя и золотое свечение
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Хасэгава, 1980 г.
Rosa hybrida cv. Улучшенное пламя
ул
Умножение побегов
Брессан и др., 1982 г.
ул
Укоренение
Hyndman et al., 1982a
Роза гибридная cvs. Tropicana, Bridal Pink, Rosa damascena , Rosa canina
ул, ам
Размножение побегов, укоренение
Хош-Хуй и Раковина, 1982а
Роза гибридная cvs. Tropicana, свадебный розовый
ул
Размножение побегов, укоренение
Хош-Хуй и Раковина, 1982b
Роза гибридная cvs. Багровая слава, Гленфидитч
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Барве и др., 1984
Роза гибридная
фунт
Размножение побегов, укоренение
Зауэр и др., 1985
Rosa hybrida cv. Королева Елизавета
apm
Размножение побегов, укоренение
Дуглас и др., 1989 г.
Роза гибридная cvs. Ландора, Дева, Морская Жемчужина, Суперзвезда, Счастье, Королева Елизавета
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Рут и др., 1990
Миниатюрная роза 'Rosamini'
apm, am
Размножение побегов, укоренение
Кампос и Пайс, 1990 г.
Rosa chinensis cv. Минимумы
ул
Размножение побегов, укоренение
Чу и др., 1993
Чайно-гибридный сорт. Доктор Верхаге
apm, am
Размножение побегов, укоренение
Вовяци и др., 1995 г.
Роза гибридная cvs. Сладкое обещание, Мотреа
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Марселис ван Аккер и Шолтен, 1995 год.
Rosa bankiae , Rosa laevigata , Rosa odorata , Rosa rugosa , Rosa roxburghii , Rosa setigera , Rosa wichuraina
ул, фунт
Размножение побегов, укоренение
Ян и др., 1996
Чайно-гибридная роза сорт. Мир
ул, ам
Размножение побегов, укоренение
Ара и др., 1997
Миниатюрная роза 'The Fairy'
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Саху и Дебата, 1997 г.
Роза сентифолия
являюсь
Умножение побегов
Ганга и др., 1998 г.
Роза x hybrida cv. Соня
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Сингх и Шьямал, 1999 г.
Rosa damascena var. Джвала
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Кумар и др., 2001
Rosa hybrida cv. Baronesse
являюсь
Умножение побегов
Карелли и Эчеверригарай, 2002 г.
Роза дамасская и Роза бурбоньяна
являюсь
Размножение побегов, укоренение
Pati et al., В печати
ам-аксиларлы меристемалар; апм-апикальды меристемалар; lb - бүйірлік бүйрек; st - ату ұшы.
2.1 . Микропропагация кезеңдері
Сәтті микро-көбейту протоколы бірнеше кезеңдерден өтеді, олардың әрқайсысында белгілі бір талаптар жиынтығы бар. Бұл (i) асептикалық дақылдардың басталуы, (ii) қашудың көбеюі, (iii) микробтардың тамырлануы және (iv) өсімдік тіндерінің өсірілген дақылдарының өрісіне қатаюы және берілуі.
2.1.1 . Асептикалық мәдениеттерді бастамашылық ету
2.1.1.1 . Эксплантатты таңдау
Өсіруді бастау үшін эксплантатты таңдау көбінесе in vitro көбейту үшін қолданылатын әдіске байланысты. Вегетативті меристемалары бар эксплантаттар көбінесе күшейтілген аксиларлы бұтақтарға жарайды (1-кесте ). Ең жиі қолданылатын экспланттар-бұл бірнеше өсінділерді қалыптастыру үшін аксиларлы бүршіктер кеңейтілген түйін сегменті ( сурет 1 ). Түйін сегменттерінің сипаттамалары қашу ұштарына қарағанда әлдеқайда жақсы (Хорн, 1992 ).
Сурет 1 . (A-G) Rosa damascena микро көбеюі . (а) аксиларлы бүйректің өсуі. (B)сұйық ортада және агармен ортада, гельмен ортада қашу некрозы. (c) сұйық ортада тамырлау. (d) Кәстрөлдердегі қатайтылған өсімдіктер.
Микропроцессордың бастапқы кезеңіне әртүрлі параметрлер әсер етеді. Медерос пен Энрикес (1987) қылқан жапырақты сабақтардан алынған бүршіктер жапырақтарға қарағанда анағұрлым сезімтал екенін анықтады. Rout et al. (1989a) және Bressan et al. (1982) R. hybrida әр түрлі сорттарындағы сабақтағы түйіннің орналасуына байланысты қашудың көбею жылдамдығында айтарлықтай айырмашылықтар байқалды . Жоғарғы және сабақтың түбіне жақын орналасқан бүршіктер дамудың ең баяу жылдамдығын көрсетті, бірақ сабақтың ортаңғы бөлігіндегі бүршіктер өте тез өсті. Негізгі осьтегі позициямен байланысты аксиларлы бүршіктердің өсу потенциалы бірнеше гормондар арасындағы тепе-теңдікпен анықталады ( Sato and Mori, 2001). Сонымен қатар, өсімдіктердің ортаңғы бөлігіндегі аксиларлы бүршіктер өсу әлеуетіне ие; алайда олар шыңның үстемдігіне байланысты бұзылмаған өсімдіктерде өсе алмайды. Апикальды үстемдікті жою бұл тепе-теңдікті өзгерте алады. Ашу Rout et al. (1989a) және Bressan et al. (1982) осы контексте түсінуге болатын сабақтың түйінінің орналасуына байланысты қашу өсіру жылдамдығындағы айырмашылықтар туралы.
Mederos және Enriquez (1987) түйіндік эксплантаттарда жапырақшалардың болуы қашу өсуіне ингибиторлық әсер ететіндігін хабарлады. Бұл есеп R. hybrida бойынша Marcelis van Acker and Scholten (1995) жұмысымен қосымша расталды . Салехи мен Хош-Хуй ( 1997) эксплантаттың ұзындығы мен диаметрі миниатюралық раушан қашуының көбеюі мен өсуінде маңызды рөл атқаратынын анықтады (R. chinensis cv. Минима)," кішкентай Буккаро", " Baby Masquerado "және"Sourati". Сондай - ақ, олар қашудың ең жақсы өсу және өсу қарқыны ұзындығы шамамен 9,0 - 10,0 мм және диаметрі шамамен 3,0-3,5 мм болатын эксплантаттардан алынғанын хабарлады. бурбониана (Пати, 2002 ). Алехно мен Высоцкий (1986) гибридті шаймен , флорибунда және раушанның миниатюралық сорттарымен жұмыс істей отырып, өсіп келе жатқан өсінділер тік өсінділермен салыстырғанда көлденеңінен өсіп келе жатқанын хабарлады. Эксплантатты көлденең орналастыру кезінде аксиларлы пролиферацияның жоғарылауы қоршаған ортамен байланыстың жоғарылауына байланысты қоршаған орта компоненттерінің көп сіңуіне байланысты болуы мүмкін (Маккай және Китто, 1988 ). Ұқсас нәтижелер алмұрт ( Lane, 1979 ) және лалагүл ( Hildebrandt and Harney, 1983) үшін де алынды.
2.1.1.2 . Стерилизация
Асептикалық дақылдарды бастау үшін Өсімдіктердің физиологиялық мәртебесі мен әртүрлі патологиялық ластаушы заттарға сезімталдығын мұқият білу қажет. Көптеген экспланттарда әдетте қолданылатын процедура бастапқы экспланттардың 70% беттік стерилизациясын қамтиды (об. Об.) Этанол 20-30 с, содан кейін 0,1% HgCl 2 5-7 минут ішінде және стерильді дистилденген сумен шаю (Rout et al. al., 1989a , Rout et al., 1989b , Rout et al., 1990 , Skirvin et al., 1990 ). Алайда, Хош-хуи және раковина, 1982а, Хош-хуи және раковина, 1982b , Скирвин және Чу (1979) және Хасегава (1979)қашудың ұштарын натрий гипохлоритімен (5,25%) және "егіз 20" немесе Triton X (0,1%) 5-10 минут ішінде зарарсыздандырып, содан кейін стерильді тазартылған суда жуады. Салехи мен Хош-Хуй (1997) әр түрлі антибиотиктердің стерильді ерітіндісін (гентамицин, ампициллин, тетрациклин немесе амоксициллин) әр түрлі концентрацияда және ұзақтықта ішкі ластанудан зарарсыздандыру үшін қолданды. Олар бетті зарарсыздандырмас бұрын антибиотик ерітіндісін қолдану сәтсіз болғанын байқады. Алайда, беткі стерилизациядан кейін 100 мг л концентрациясы бар гентамицин немесе ампициллин ерітіндісіне батыру дезинфекцияланған эксплантаттардың ең көп пайызына әкелді. Бұл айырмашылықты түсінуге болады, өйткені беткі зарарсыздандыру кезінде эксплантаттың ашық ұштары алынып, жаңа өткізгіш ұлпаны қалдырады, бұл антибиотик ерітінділерінің ұлпаның ішіне терең енуіне мүмкіндік береді, нәтижесінде дезинфекция жылдамдығы жоғарылайды.
2.1.1.3 . Ортаны қуыру
Ортаның қызаруы-бұл PvP (поливинилпирролидон), лимон қышқылы немесе аскорбин қышқылы немесе жиі субкультивация ( Rout et al., 1999 ) немесе егуден кейін толық қараңғылықта бір-екі күн бойы дақылдарды инкубациялау, өйткені полифенол оксидазасының белсенділігі жарықпен индукцияланғаны анықталды ( Питтет және Монкоусин, 1981 ). Curir et al. (1986) көмір бар ортада өсірудің 3 күні, содан кейін жаңа ортаға көшу бастапқы экспланттардың өсуін күшейту үшін жоғары тиімді болды деп мәлімдеді.
2.1.2 . Қашуды көбейту
Бұл микропроцессордың ең маңызды кезеңі. Микро көбейту хаттамасының сәттілігі көбінесе қашудың жылдамдығы мен әдісіне байланысты. Төменде in vitro раушанында қашудың көбеюіне әсер ететін әртүрлі факторлар келтірілген.
2.1.2.1 . Түрлері генотиптері сорттары
Хорн (1992) генотиптердің Флорибунда мен шай-гибридті раушанның әртүрлі сорттарында in vitro көбеюіне айқын әсерін атап өтті. Ол кардинал мен Лилли Марлен сорттарын өсіру оңай екенін, ал антена, Мерседес, Пасадена және Алтын Таймс өсіру өте қиын екенін байқады. Хош-хуи және раковина, ... жалғасы
Сіз бұл жұмысты біздің қосымшамыз арқылы толығымен тегін көре аласыз.
Ұқсас жұмыстар
Пәндер
- Іс жүргізу
- Автоматтандыру, Техника
- Алғашқы әскери дайындық
- Астрономия
- Ауыл шаруашылығы
- Банк ісі
- Бизнесті бағалау
- Биология
- Бухгалтерлік іс
- Валеология
- Ветеринария
- География
- Геология, Геофизика, Геодезия
- Дін
- Ет, сүт, шарап өнімдері
- Жалпы тарих
- Жер кадастрі, Жылжымайтын мүлік
- Журналистика
- Информатика
- Кеден ісі
- Маркетинг
- Математика, Геометрия
- Медицина
- Мемлекеттік басқару
- Менеджмент
- Мұнай, Газ
- Мұрағат ісі
- Мәдениеттану
- ОБЖ (Основы безопасности жизнедеятельности)
- Педагогика
- Полиграфия
- Психология
- Салық
- Саясаттану
- Сақтандыру
- Сертификаттау, стандарттау
- Социология, Демография
- Спорт
- Статистика
- Тілтану, Филология
- Тарихи тұлғалар
- Тау-кен ісі
- Транспорт
- Туризм
- Физика
- Философия
- Халықаралық қатынастар
- Химия
- Экология, Қоршаған ортаны қорғау
- Экономика
- Экономикалық география
- Электротехника
- Қазақстан тарихы
- Қаржы
- Құрылыс
- Құқық, Криминалистика
- Әдебиет
- Өнер, музыка
- Өнеркәсіп, Өндіріс
Қазақ тілінде жазылған рефераттар, курстық жұмыстар, дипломдық жұмыстар бойынша біздің қор #1 болып табылады.
Ақпарат
Қосымша
Email: info@stud.kz