Балқу қисықтары

Жұмыс түрі: Реферат
Тегін: Антиплагиат
Көлемі: 9 бет
Таңдаулыға:

ҚАЗАҚ ҰЛТТЫҚ АГРАРЛЫҚ ЗЕРТТЕУ УНИВЕРСИТЕТІ
ВЕТЕРИНАРИЯ ФАКУЛЬТЕТІ
Акушерлік, хирургия және өсіп-өну биотехнологиясы КАФЕДРАСЫ

СТУДЕНТТІҢ ӨЗІНДІК ЖҰМЫСЫ

Тақырыбы:Реал Тайм ПТР эдісінің артыкшылыгы.

Орындаған:Ерік Анель
Вм-402
Тексерген:Бименова Ж.Ж

Алматы2021
ЖОСПАРЫ:
I.КІРІСПЕ ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 3
II.НЕГІЗГІ БӨЛІМ ... ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ...4
2.1Нақты уақыттағы ПТР ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...4
2.2Материалдық база ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .4
2.3Күшейту өнімдерін анықтау ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 4
2.4 Балқу қисықтары ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... 9
III.ҚОРЫТЫНДЫ ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .11
IV.ПАЙДАЛАНЫЛҒАН ӘДЕБИЕТТЕР ... ... ... ... ... ... . ... ... .12

I.КІРІСПЕ.

Полимеразды тізбекті реакцияның (ПТР) практикалық денсаулық сақтау саласына кеңінен енгізілуі оны жүзеге асырудың қарапайымдылығымен, төмен құнымен және сенімділігімен түсіндіріледі. Сонымен қатар, бүгінде ПТР инфекция қоздырғыштарының нуклеин қышқылдарын (ДНҚ және РНҚ) сандық анықтау саласында одан әрі дамытылатыны анық.
Емдеу кезінде жұқпалы қоздырғыштардың ДНҚ-сын сандық анықтау терапияның дұрыстығы немесе тиімсіздігі туралы ақпарат алуға мүмкіндік береді, аурудың өршу кезеңдерін болжауға және науқастың денсаулығына зиян тигізбестен тезірек сауығу үшін барабар шараларды қабылдауға мүмкіндік береді. Терапия.
ПТР әдісімен үлгідегі нуклеин қышқылдарының концентрациясы туралы мәліметтерді алудың көптеген жолдары бар, бірақ олардың барлығы талданатын үлгіден бөлінген ДНҚ немесе ПТР кезінде алынған ампликондарды алдын ала титрлеумен байланысты қосымша еңбекті қажет ететін жұмыс кезеңдерін талап етеді, бұл талдауды орнатуға қажетті уақыттың ұлғаюы және алынған нәтижелерді интерпретациялаудың күрделілігі [2,5]. Сондай-ақ, жұмыстың қосымша кезеңдерінің болуы қате және сенімсіз нәтиже алу ықтималдығын арттырады.

II.НЕГІЗГІ БӨЛІМ
2.1Нақты уақыттағы ПТР.
Бүгінгі күні жоғарыда аталған кемшіліктерден айырылған әдіс бар - бұл нақты уақыт режиміндегі ПТР әдісі (Real-Time ПТР) [4]. Әдістің мәні кейіннен электрофорезсіз арнайы құрылғының көмегімен күшейту өнімдерінің жинақталуын зерттеу болып табылады. Күшейту өнімдерінің жинақталу кинетикасы шаблонның бастапқы мөлшерімен байланысты болғандықтан, бұл оның мөлшерін дәл бағалауға мүмкіндік береді [3].
Бұл әдістің классикалық ПТР-дан айырмашылығы - зерттелетін материалдағы жұқпалы қоздырғыштардың ДНҚРНҚ мөлшерін анықтау мүмкіндігі, электрофорез кезеңінің болмауы, ПТР зертханасын ұйымдастыруға аз қатаң талаптар және автоматты тіркеу. Және алынған нәтижелерді интерпретациялау.
Электрофорез кезеңінің болмауы ПТР өнімдерімен ластану қаупін барынша азайтуға және осылайша жалған оң нәтижелердің санын күрт азайтуға мүмкіндік береді. Нәтижелерді тіркеу ПТР процесінде тікелей жүзеге асырылатындықтан, бүкіл талдауды бір немесе екі зертханалық бөлмеде жүргізуге болады және реакция өнімдерін анықтау үшін жеке бөлме қажет емес.
Соңғы бес жылда бұл әдіс дамыған елдердің ірі диагностикалық және ғылыми орталықтарында сәтті қолданылды және жақын болашақта өндірістік кеңістікті үнемдеу, санның азаюы арқасында қазіргі форматында ПТР сияқты кең таралады. Персонал және сандық анықтауға сұраныс.ДНҚРНҚ.
Талдаудың математикалық әдістерін қолдану алынған нәтижелерді автоматты түрде түсіндіруге мүмкіндік береді және электрофореграммаларды субъективті бағалау мәселесін жояды.

2.2Материалдық база.
Нақты уақыттағы ПТР жүргізу үшін арнайы күшейткіш қажет, оның айрықша ерекшелігі әрбір күшейту циклінде ампликондардың жинақталуын көрсететін флуоресценцияны қоздыру және анықтау мүмкіндігі болып табылады.

2.3Күшейту өнімдерін анықтау.
Күшейту өнімдерін нақты уақыт режимінде анықтау үшін келесі кең таралған әдістер қолданылады:

5 'соңғы белгісінің бөлінуі (TaqMan талдауы).
Бұл әдіс полимеразаның 5'-экзонуклеаза белсенділігін қолдануға негізделген. Реакция қоспасына ДНҚ зондтары қосылады, олар 5'-позициясында флуоресцентті жапсырманы және 3'-позициясында флуоресцентті сөндіргішті, сондай-ақ 3'-позициядағы фосфат тобын қамтиды. Бұл зондтардың аймақтағы қону алаңдары күшейтілуі керек. Сөндіргіш флуоресценттік белгі шығаратын сәулені сіңіреді, ал 3'-позициядағы фосфат тобы полимеразаны блоктайды.(фото)

ПТР праймерді жасыту сатысында ДНҚ зонды комплементарлы ДНҚ тізбегіне бекітіледі және ПТР кезінде неғұрлым күшейту өнімдері түзілсе, соғұрлым зонд молекулалары сәйкес ампликондармен байланысады. Элонгация сатысында полимераза комплементарлы ДНҚ тізбегін синтездейді және зондқа жеткенде 5'-экзонуклеаза белсенділігінің болуына байланысты оны ыдыра бастайды. Осылайша, флуоресцентті жапсырма мен сөндіргіштің бөлінуі орын алады, бұл анықталатын жарқыраудың жоғарылауына әкеледі [3]. Белгілі бір уақытта ПТР кезінде неғұрлым көп ампликондар жасалса, флуоресценция соғұрлым қарқынды болады.
Қосымша терминалдық реттілігі бар зондтарды қолдану (молекулярлық маяктар).
Бұл әдістің жоғарыда сипатталғаннан айырмашылығы, зондтың терминал тізбегі өзара бірін-бірі толықтыратын аймақтар болып табылады, сондықтан праймерді жасыту температурасында олар құлап, шаш қыстырғыштарын құрайды [6]. Зондтардың ішкі аймағында күшейтілетін аймақты толықтыратын нуклеотидтер тізбегі бар. Праймерлер жасытылған кезде, ДНҚ үлгісіне қосылмаған зондтар құлаған күйде қалады, осылайша флуоресценция сөнеді.(ФОТО)

Матрицаға жасытылған бірдей зондтар ашылады және флуоресцентті жапсырма мен сөндіргіш әртүрлі бағытта бөлінеді. Осылайша, жарқыраудың қарқындылығы артады.

Резонанстық энергия тасымалдауы бар 2 зондты қолдану (LightCycler талдау).
Күшейту өнімдерінің жинақталуын анықтаудың бұл әдісі жоғарылау ерекшелігімен сипатталады, өйткені флуоресценцияның жоғарылауы екі ДНҚ зондтары бірден ампликондарға комплементарлы болған кезде болады [1]. Әдістің принципі бірінші зондтың 3 'ұшында ... жалғасы

Сіз бұл жұмысты біздің қосымшамыз арқылы толығымен тегін көре аласыз.