Белок мөлшерін Брэдфорд әдісі арқылы анықтау
![](/assets/img/loading.gif)
![](/assets/img/loading.gif)
Тақырыбы: Белок мөлшерін Брэдфорд әдісі арқылы анықтау.
Сұрақтар:
1. Калибровты график алу үшін қанша өлшем нүктелері қажет
2. Брэдфорд әдістемесінің принципі
3. Белок мөлшерін анықтаудың тура және жанама әдістемелерінің айырмашылығын көрсетіңіз
4. Белок концентрациясын анықтау әдістемелеріне сипаттама беріңіз.
Жауаптары:
2.
Брэдфорд ақуыздық талдауы. Марион М. Брэдфорд 1976 жылы ақуыздық талдауды жасаған. Бұл ерітіндідегі ақуыздың концентрациясын өлшеу үшін қолданылатын жылдам және дәл спектроскопиялық аналитикалық процедура. Реакция өлшенген белоктардың аминқышқылдарының құрамына байланысты.
Принципі:
Брэдфорд ақуызының колориметриялық анализі Coomassie Brilliant Blue G-250 оптикалық тығыздығының өзгеруіне негізделген. Coomassie Brilliant Blue G-250 бояғышы үш түрінде шығарылады: анионды (көк), бейтарап (жасыл) және катионды (қызыл). Қышқыл жағдайда бояғыштың қызыл формасы зерттелетін ақуызбен байланысып көк түрге айналады. Егер байланыстыратын ақуыз болмаса, ерітінді қоңыр болып қалады.
Бояғыш ван-дер-Ваальс күші мен аминостоппен электростатикалық өзара әрекеттесудің арқасында белоктың карбоксил тобымен күшті ковалентті емес кешен түзеді. Бұл кешеннің пайда болу кезінде Кумасси бояғышының қызыл формасы алдымен ақысыз электронды иондалатын ақуыз топтарына береді, бұл ақуыздың табиғи күйінің бұзылуын тудырады және нәтижесінде гидрофобты қалталарын ашады.
Ақуыздың үшінші реттік құрылымындағы бұл қалталар бояғыштың полярлы емес аймағымен бояғыштың теріс зарядының қасында оң амин топтарын орналастыратын бірінші байланыс байланысы (ван-дер-Ваальс күштері) арқылы байланысады. Байланысты олардың арасындағы екінші байланыс әрекеттестігі, иондық өзара әрекеттесу одан әрі күшейтеді. Ақуыздармен байланысуы Кумасси бояғышының көк түрін тұрақтандырады; Осылайша, ерітіндіде болатын комплекс мөлшері ақуыз концентрациясының өлшемі болып табылады және оны оптикалық тығыздықты өлшеу арқылы анықтауға болады.
3.
Бредфордтың басқа протеиндік талдаулардан айырмашылығы, ақуыз сынамаларында болуы мүмкін натрий, калий немесе тіпті сахароза сияқты көмірсулар сияқты әртүрлі химиялық қосылыстар аз әсер етеді. Ерекшеліктер - жуғыш заттың жоғары концентрациясы.
Тағы бір кедергі протеин үлгісін дайындауда қолданылатын буферден болуы мүмкін. Буфердің жоғары концентрациясы буферден конъюгацияланған негіз арқылы ерітіндіден бос протондардың сарқылуына байланысты ақуыз концентрациясын асыра бағалауға әкеледі. Егер ақуыздың төмен концентрациясы қолданылса (кейіннен буфер), бұл кедергі болмайды.
Түссіз қосылыстың оптикалық тығыздығын өлшеу үшін Брэдфорд анализін жүргізу керек. Триптофан, тирозин және фенилаланин сияқты хош иісті сақиналардың болуына байланысты белоктар сияқты кейбір түссіз қосылыстарды 280 нм-де анықтауға болады, бірақ егер бұл аминқышқылдардың ешқайсысы болмаса, оптикалық тығыздықты 280 нм-де өлшеуге болмайды.
Брэдфорд әдісінің кемшіліктері.
1. Брэдфорд анализі қысқа диапазонда сызықтық сипатқа ие, әдетте 0 мкг мл-ден 2000 мкг мл-ге дейін, бұл көбінесе талдау алдында үлгіні сұйылтуды қажет етеді. Осы сұйылтуды жасаған кезде бір сұйылтудың қателігі келесі сұйылтуларға қосылады, нәтижесінде әрқашан дәл бола алмайтын сызықтық қатынас пайда болады.
2. Бұл әдістегі реактивтер пробиркаларды бояуға бейім. Пробиркаларды қайталап қолданбаңыз, себебі дақ оптикалық тығыздығының көрсеткішіне әсер етуі мүмкін. Бұл әдіс уақытты да ескереді. Бірнеше шешім сынақтан өткізілгенде, дәл салыстыру үшін әр үлгінің бір уақытта инкубациялануын қамтамасыз ету қажет.
3. Сызықтықтың көп бөлігі ақуыздың қосылуымен бұзылатын бояудың екі түрлі формасының тепе-теңдігіне байланысты. Брэдфорд талдамасы 595нм сіңіру қабілетін 450 нм-де өлшеу арқылы сызықтық жүреді. Бұл өзгертілген Брэдфорд анализі дәстүрлі әдіске қарағанда шамамен 10 есе сезімтал.
4. Бастапқы Брэдфорд әдісімен ақуыздармен байланысуға қолданылатын Coomassie Blue G250 бояуы аргинин және лизин ... жалғасы
Сұрақтар:
1. Калибровты график алу үшін қанша өлшем нүктелері қажет
2. Брэдфорд әдістемесінің принципі
3. Белок мөлшерін анықтаудың тура және жанама әдістемелерінің айырмашылығын көрсетіңіз
4. Белок концентрациясын анықтау әдістемелеріне сипаттама беріңіз.
Жауаптары:
2.
Брэдфорд ақуыздық талдауы. Марион М. Брэдфорд 1976 жылы ақуыздық талдауды жасаған. Бұл ерітіндідегі ақуыздың концентрациясын өлшеу үшін қолданылатын жылдам және дәл спектроскопиялық аналитикалық процедура. Реакция өлшенген белоктардың аминқышқылдарының құрамына байланысты.
Принципі:
Брэдфорд ақуызының колориметриялық анализі Coomassie Brilliant Blue G-250 оптикалық тығыздығының өзгеруіне негізделген. Coomassie Brilliant Blue G-250 бояғышы үш түрінде шығарылады: анионды (көк), бейтарап (жасыл) және катионды (қызыл). Қышқыл жағдайда бояғыштың қызыл формасы зерттелетін ақуызбен байланысып көк түрге айналады. Егер байланыстыратын ақуыз болмаса, ерітінді қоңыр болып қалады.
Бояғыш ван-дер-Ваальс күші мен аминостоппен электростатикалық өзара әрекеттесудің арқасында белоктың карбоксил тобымен күшті ковалентті емес кешен түзеді. Бұл кешеннің пайда болу кезінде Кумасси бояғышының қызыл формасы алдымен ақысыз электронды иондалатын ақуыз топтарына береді, бұл ақуыздың табиғи күйінің бұзылуын тудырады және нәтижесінде гидрофобты қалталарын ашады.
Ақуыздың үшінші реттік құрылымындағы бұл қалталар бояғыштың полярлы емес аймағымен бояғыштың теріс зарядының қасында оң амин топтарын орналастыратын бірінші байланыс байланысы (ван-дер-Ваальс күштері) арқылы байланысады. Байланысты олардың арасындағы екінші байланыс әрекеттестігі, иондық өзара әрекеттесу одан әрі күшейтеді. Ақуыздармен байланысуы Кумасси бояғышының көк түрін тұрақтандырады; Осылайша, ерітіндіде болатын комплекс мөлшері ақуыз концентрациясының өлшемі болып табылады және оны оптикалық тығыздықты өлшеу арқылы анықтауға болады.
3.
Бредфордтың басқа протеиндік талдаулардан айырмашылығы, ақуыз сынамаларында болуы мүмкін натрий, калий немесе тіпті сахароза сияқты көмірсулар сияқты әртүрлі химиялық қосылыстар аз әсер етеді. Ерекшеліктер - жуғыш заттың жоғары концентрациясы.
Тағы бір кедергі протеин үлгісін дайындауда қолданылатын буферден болуы мүмкін. Буфердің жоғары концентрациясы буферден конъюгацияланған негіз арқылы ерітіндіден бос протондардың сарқылуына байланысты ақуыз концентрациясын асыра бағалауға әкеледі. Егер ақуыздың төмен концентрациясы қолданылса (кейіннен буфер), бұл кедергі болмайды.
Түссіз қосылыстың оптикалық тығыздығын өлшеу үшін Брэдфорд анализін жүргізу керек. Триптофан, тирозин және фенилаланин сияқты хош иісті сақиналардың болуына байланысты белоктар сияқты кейбір түссіз қосылыстарды 280 нм-де анықтауға болады, бірақ егер бұл аминқышқылдардың ешқайсысы болмаса, оптикалық тығыздықты 280 нм-де өлшеуге болмайды.
Брэдфорд әдісінің кемшіліктері.
1. Брэдфорд анализі қысқа диапазонда сызықтық сипатқа ие, әдетте 0 мкг мл-ден 2000 мкг мл-ге дейін, бұл көбінесе талдау алдында үлгіні сұйылтуды қажет етеді. Осы сұйылтуды жасаған кезде бір сұйылтудың қателігі келесі сұйылтуларға қосылады, нәтижесінде әрқашан дәл бола алмайтын сызықтық қатынас пайда болады.
2. Бұл әдістегі реактивтер пробиркаларды бояуға бейім. Пробиркаларды қайталап қолданбаңыз, себебі дақ оптикалық тығыздығының көрсеткішіне әсер етуі мүмкін. Бұл әдіс уақытты да ескереді. Бірнеше шешім сынақтан өткізілгенде, дәл салыстыру үшін әр үлгінің бір уақытта инкубациялануын қамтамасыз ету қажет.
3. Сызықтықтың көп бөлігі ақуыздың қосылуымен бұзылатын бояудың екі түрлі формасының тепе-теңдігіне байланысты. Брэдфорд талдамасы 595нм сіңіру қабілетін 450 нм-де өлшеу арқылы сызықтық жүреді. Бұл өзгертілген Брэдфорд анализі дәстүрлі әдіске қарағанда шамамен 10 есе сезімтал.
4. Бастапқы Брэдфорд әдісімен ақуыздармен байланысуға қолданылатын Coomassie Blue G250 бояуы аргинин және лизин ... жалғасы
Ұқсас жұмыстар
Пәндер
- Іс жүргізу
- Автоматтандыру, Техника
- Алғашқы әскери дайындық
- Астрономия
- Ауыл шаруашылығы
- Банк ісі
- Бизнесті бағалау
- Биология
- Бухгалтерлік іс
- Валеология
- Ветеринария
- География
- Геология, Геофизика, Геодезия
- Дін
- Ет, сүт, шарап өнімдері
- Жалпы тарих
- Жер кадастрі, Жылжымайтын мүлік
- Журналистика
- Информатика
- Кеден ісі
- Маркетинг
- Математика, Геометрия
- Медицина
- Мемлекеттік басқару
- Менеджмент
- Мұнай, Газ
- Мұрағат ісі
- Мәдениеттану
- ОБЖ (Основы безопасности жизнедеятельности)
- Педагогика
- Полиграфия
- Психология
- Салық
- Саясаттану
- Сақтандыру
- Сертификаттау, стандарттау
- Социология, Демография
- Спорт
- Статистика
- Тілтану, Филология
- Тарихи тұлғалар
- Тау-кен ісі
- Транспорт
- Туризм
- Физика
- Философия
- Халықаралық қатынастар
- Химия
- Экология, Қоршаған ортаны қорғау
- Экономика
- Экономикалық география
- Электротехника
- Қазақстан тарихы
- Қаржы
- Құрылыс
- Құқық, Криминалистика
- Әдебиет
- Өнер, музыка
- Өнеркәсіп, Өндіріс
Қазақ тілінде жазылған рефераттар, курстық жұмыстар, дипломдық жұмыстар бойынша біздің қор #1 болып табылады.
![google play](assets/img/google-play-badge.png)
Ақпарат
Қосымша
Email: info@stud.kz