Жануарлар жасушасын культивирлеу
"Жануарлар жасушасын культивирлеу" пәніненемтихансұрақтары
Кредит саны: 6; Сұрақтың саны: 125;
1 деңгей
1.Жасуша культивирлеу процестерін түсіндіріңіз
Жасуша мәдениеті дегеніміз-жануардағы немесе өсімдіктегі жасушаларды алып тастау және олардың қолайлы жасанды ортада өсуі. Жасушаларды ұлпадан тікелей алып тастауға болады және өсірілгенге дейін ферментативті немесе механикалық құралдармен бөлшектеуге болады немесе олар жасуша сызығынан немесе қазірдің өзінде құрылған жасуша штаммынан алынуы мүмкін.
Жасуша өсіру-бұл процесс in vitro прокариоттар мен эукариоттардың жеке жасушалары (немесе жалғыз жасуша) бақыланатын жағдайда өсіріледі. Іс жүзінде "жасуша культурасы" термині негізінен көп клеткалы эукариоттардан, көбінесе жануарлардан алынған бір тіндерге жататын жасушалардың өсуін білдіреді. Жасуша дақылдарын өсіру технологиясы мен әдістерінің тарихи дамуы тіндік дақылдар мен бүкіл мүшелерді өсірумен тығыз байланысты.
Қазіргі уақытта жануарлардың жасушалары мен тіндерін өсіру жасушалық және молекулалық биологиядан бастап биотехнологияның тез дамып келе жатқан салаларына дейін әртүрлі зерттеу салаларында кең таралды. Жануарлардың ұлпалық мәдениеті жасушалардың өсу және саралау механизмдерін, интерстициальды және жасушааралық өзара әрекеттесуді, зат алмасуды және т.б. зерттеу үшін қолданылады. Вирустар оларды анықтау және вакциналар алу үшін өсіріледі. Жасушалық культуралар көбінесе дәрі-дәрмектер мен косметиканың, пестицидтердің, консерванттардың әсер ету механизмін сынау және зерттеу кезінде қолданылады.
2. Микроорганизмдердің жасушаларын культивирлеу процесін сипаттаңыз
Микроорганизмдердің культивирлеу туралы ұғым:: Коректік ортада микроорганизмдердің өсуі культивирлеу деп аталады. Культуралардың өсуі
кезінде физиологиялық процесс жүреді, нәтижесінде биомасса ұлғаяды. Биомассаосы микроорганизмнің клеткалық затының массасы.
Микроорганизмдердің культиверлеу тәсілдері.
Культиверлеу тәсілі культиверлеудің түпкі мақсатына
байланысты (мақсаты ретінде биомасса жинау немесе
белгілі бір тіршілік әрекеті өнімін - метаболитті өндіру
болып табылады).
3. Культивирлеу процестері жіктелуінің қандай кезеңдері бар
Микроорганизмдердің культиверлеу тәсілдерінің келесі түрлерін ажыратады:
Беттік культиверлеу
Түптік культиверлеу
Мерзімді культиверлеу.
Үздіксіз культиверлеу
Беттік культиверлеу деп аэробты микроарганизмдерді сұйық және сусымалы орталардың бетінде өсіруді айтамыз. Бұл ретте микроорганизмдер о
Беттік культиверлеу
Беттік
культиверлеу деп аэробты микроарганизмдерді сұйық және
сусымалы орталардың бетінде өсіруді айтамыз. Бұл ретте микроорганизмдер оттегіні тікелей ауадан алады. Беттік культиверлеулеу кезінде микроорганизмдер сұйық орталардың бетінде қабыршақ түрінде өседі.
Беттік культиверлеу арнайы ванналарда кюветаларда орындалады. Әдістің кемшілігі үлкен аймақты қажет ететіндігі.
Беттік культивирлеудің басты артықшылығы -
ақырғы өнім концентрациясының жоғары болуы.
Беттік культураларды кептіру процесі оңай әрі тез
жүреді. Оларды тауарлық күйге көшіру оңай және
тасымалдауға ыңғайлы.
Түптік
әдіспен
салыстырғанда энергия шығыны үлкен емес.
Түптік культиверлеу:
Түптік культиверлеу - микроорганизмдер қоректік
ортаның барлық көлемінде дами алатын сұйық
қоректік орталарда жүргізіледі. Қоректік орта мен ондағы өсетін микроорганизмдердің үйлесімі культуралды сұйықтық деп аталады. Түптік
культиверлеу арнайы аппараттарда - арнайы араластырғыштармен және
аэробты микроорганизмдердің өсуін қамтамасыз ету үшін,таза
ауажеткізужүйесіменжабдықталған,фер ментаторларда жүзеге асырылады.Аэрация деп
культуралды сұйықтық арқылы таза ауаны үрлеуді
айтамыз. Барлық процесс қатаң асептикалық
жағдайда жүргізілуі керек.
Түптік культиверлеу
Ферментаторлар
Арнайы араластырғышта
Мерзімді культиверлеу:
Мерзімді культиверлеу кезінде қоректікортының барлық көлемін таза культурамен егіптастайды, ол қолайлы жағдайларда, белгіліуақыт аралығында, мақсатты өнімнің керектімөлшерін жинағанша өсіріледі. Культиверлеужаңартылмайтын қоректік ортада (стационарлықортада) жүргізілетіндіктен, клеткалар үнеміөзгермелі жағдайда болатынын атап кеткен жөн.Сөйтіп периодтық жүйені тұйық жүйе ретіндеқарастыруға болады.
Беттік культиверлеу тек қана мерзімді(периодты)
бола алады, ал түптік культиверлеуді мерзімді де,
үздіксіз де әдістерімен жүзеге асыруға болады.
Үздіксіз культиверлеу:
Үздіксіз
культиверлеукезіндекультураарнайы аппаратта орналасады, ол жергеүздіксіз қоректік орта келіп түседі және солжерден сондай жылдамдықпен культуралдықсұйықтық сыртқа шығарылып отырады.Микроорганизм
үшінөзгермейтінортажағдайлары жасалады, сондықтан үздіксіз
жүйені ашық жүйе ретінде қарастыруға
болады.
4. Қатты қоректік орталарда өсіру әдістерін сипаттаңыз
Тығыз және жартылай сұйық орталар сұйық заттардан гельді агенттің (агар-агар, сирек желатин) болуымен ерекшеленеді. Сонымен қатар, тығыз орта ретінде коагуляцияланған жұмыртқа немесе сарысуы бар ақуыздар, картоп, кремний гелі бар орталар қолданылады. Кейбір микроорганизмдер желатинді қоректік зат ретінде пайдаланады -- олардың өсуімен орта сұйылтылады.
Құрамы бойынша:
қарапайым: ет-пептонды сорпа (МПБ), ет-пептонды агар( МПА), қоректік желатин,
күрделі-құрамында аминқышқылдары, дәрумендер, микроэлементтер және басқа заттар болуы мүмкін көп компонентті орта.
Мақсаты бойынша:
негізгі-көптеген микроорганизмдерді өсіру үшін қолданылады, мысалы, MPB, Mpa, сорпа, шоколад агары, пептон суы.
арнайы-қарапайым ортада өспейтін микроорганизмдерді оқшаулау және өсіру үшін қолданылады.
элективті (селективті) -- микробтардың белгілі бір түрін оқшаулау үшін қызмет етеді, олардың өсуіне ілеспе микроорганизмдердің өсуін кешіктіру немесе басу арқылы ықпал етеді. Орталар оларға белгілі бір антибиотиктер, тұздар, РН өзгерген кезде элективті болады. Сұйық элективті орталар жинақтау ортасы деп аталады.
дифференциалды диагностикалық-микробтардың бір түрін екіншісінен ферментативті белсенділігі бойынша ажыратуға мүмкіндік береді.
көлік-зерттелетін материалды алғашқы себуге және тасымалдауға арналған.
Суспензия -- қатты дисперстік фазаның сұйық дисперстік ортада таралған микрогетерогенді система. Ондағы қатты бөлшектердің өлшемі 0,1 мкмг10 мкм. Егер бөлшектердің дисперстік дәрежесі төмен болса, онда оның радиусы үлкейіп, тұрақтылығы төмендейді де тез тұнбаға шөгеді. Суспензиялардың дисперстілігін микроскоп, электронды микроскоп сияқты оптикалық немесе седиментациялық анализ көмегімен анықтауға болады.
5. Суспензия және түптік культивирлеу туралы түсінік беру
Түптік культиверлеу:
Түптік культиверлеу - микроорганизмдер қоректік ортаның барлық көлемінде дами алатын сұйық қоректік орталарда жүргізіледі. Қоректік орта мен ондағы өсетін микроорганизмдердің үйлесімі культуралды сұйықтық деп аталады. Түптік культиверлеу арнайы аппараттарда - арнайы араластырғыштармен және аэробты микроорганизмдердің өсуін қамтамасыз ету үшін, таза ауа жеткізу жүйесімен жабдықталған, ферментаторларда жүзеге асырылады.Аэрация деп культуралды сұйықтық арқылы таза ауаны үрлеуді айтамыз. Барлық процесс қатаң асептикалық жағдайда жүргізілуі керек.
6. Кезеңдік культивирлеу процесін сипаттаңыз
Кезеңдік культивирлеу микробты биосинтез танысқанда алдымен кезеңді культуранаң өсу динамикасын зерттеуден басталады. Периодты культураның дамуы үшін қоректік ортаға егуден басталады. Егу процесі мынадай мөлшерде іске асырылады, минималдды ұстаумен немесе лаг фазасыз микроорганизмнің алдымен өсуімен қамтамасыз етіледі. Биосинтез барысында лаг фазаға түсінікті аз береді немесе өсу үшін қолайсыз жағдаймен түсіндіріледі. Көптеген микробиологиялық процесс үшін ортанаң көлемінің 2% -дей мөлшері жаңадан жасалған егіс материалына қатысады.
I-фаза лаг-фаза немесе бейімделу фазасы деп аталады.
II-фаза өсу жылдамдығының фазасы немесе ауыспалы деп аталады.
III-фаза - жасуша санының анағұрлым активті өсу фазасы.
IV - фаза баяу өсу фазасы немесе өсу жылдамдығының төмендеуі
V - фаза - стационарлы фаза деп аталады
VI - фаза - қырылу фазасы немесе жойылу фазасы.
7. Кезеңдік культивирлеу процесінің өсу фазаларын атаңыз (4 фаза)
Мерзімді жағдайда сұйық қоректік ортадағы микроорганизмдердің өсу және көбею динамикасы бактерияларға, актиномицеттерге, микроскопиялық саңырауқұлақтарға, микоплазмаларға және басқа про - және эукариоттарға тән бірқатар ерекшеліктерге ие. Жеке даму кезінде олар көбеюдің жоғары жылдамдығымен сипатталады. Даму дәйекті фазалар түрінде жүреді, олардың сипаты мен ұзақтығы жасушалардың физиологиялық жағдайына байланысты, бұл өз кезегінде белгілі бір организмнің популяциясы дамитын қоршаған орта факторларының жағдайымен анықталады.Басқаша айтқанда, микроорганизмнің өсу кезеңдері олардың биомассасы мен қоршаған ортасындағы сандық және сапалық өзгерістерді көрсетеді.Қарапайым біртекті периодтық культурада микроорганизмдер 4-тен 8-ге дейін, тіпті 16 фазаға дейін бөлінеді.
1. Бастапқы фаза (лаг фазасы немесе индукциялық кезең)-бұл микробтық жасушалардың көбеюі болмайтын өсудің тежелу кезеңі. Бұл фаза жасуша өсуінің болмауымен сипатталады. Осы кезеңде егістік дақыл өзгерген сыртқы жағдайларға бейімделеді және белгілі бір қоректік ортада өсу үшін қажетті ферменттер шығарады. Лаг-фазада культуралық жасушаларда айтарлықтай сапалы өзгерістер болады: нуклеин қышқылдарының саны артады, ең алдымен РНҚ, кейбір ферменттер белсендіріледі және басқалары синтезделеді.
Кеш фазасының ұзақтығы келесі факторларға байланысты:
- қоректік ортаның құрамынан - егер қоректік орта құрамы жағынан егістік дақыл өскен ортадан аз ерекшеленсе, кешеуілдеу кезеңі іс жүзінде болмауы мүмкін;
- тұқым сапасынан ~ ондағы өміршең жасушалардың саны, олардың жасы, сақтау әдісі;
- егу дозасынан.
2. Өсудің оң үдеу кезеңі. Көптеген микроорганизмдер үшін бұл кезеңнің ұзақтығы 2 сағатты құрайды және ол температураға, қоректік ортаның құрамына, тұқымның сапасына байланысты. Көптеген авторлар бұл екі кезеңді бірге қарастырады. Осы кезеңде жасуша бөлінуінің болмауына байланысты жасушалар саны тұрақты болып қалады. Микробтық жасушалардың жалпы жағдайы қоректік ортаға бейімделу жағдайы ретінде сипатталады. Осы кезеңде заттардың, жасушалардың синтезі күшейеді, олардың мөлшері артады, оларда көптеген индукциялық ферменттер пайда болады.
3. Логарифмдік (лог-фаза) немесе экспоненциалды (экспоненциалды) өсу фазасы. Ол жасушалардың тұрақты және максималды өсу қарқынымен сипатталады. Бұл фазада микробтардың өсуі экспоненциалды түрде жүреді.
Бұл кезеңнің ұзақтығы байланысты:
- қоршаған ортадағы қоректік заттар қорынан;
- аэрация шарттарынан;
- араластырудан және басқа факторлардан.
Микроорганизмдердің өсу процестерін сипаттау үшін биомассаның жалпы және нақты өсу қарқыны (немесе жасушалар саны) сияқты сипаттамалар қолданылады. Мәдениеттің өсуінің тағы бір маңызды сипаттамасы-бұл мәдениеттің биомассасы екі есе өсетін уақыт. Уақытта генерациялау түрлі микроорганизмдер дақылдары қатты ерекшеленеді. Ең жылдам өсетін бактериялар қолайлы генерация жағдайында генерация кезеңіне ие-20-25 минут.Әр түрлі микроорганизмдердегі лог фазасындағы генерация ұзақтығы бірдей емес. Сонымен, сальмонеллалар үшін ол 20-30 минутқа, стрептококктар мен стафилококктар үшін - 25-35 минутқа, эшерихия үшін - 15-17 минутқа тең.Генерацияның ұзақтығына температура, ортаның рН, ортаның құрамы және т.б. әсер етеді. Ол үшін жасушалар тығыз қоректік ортаға себіліп, содан кейін өміршең жасушалар түзетін колониялардың саны есептеледі.
8. Түптік кезеңдік культивирлеу процесі туралы түсінік беріңіз
Түптік культивирлеу
- микроорганизмдер қоректік
ортаның барлық көлемінде дами алатын сұйық
қоректік орталарда жүргізіледі. Қоректік орта мен
ондағы өсетін микроорганизмдердің үйлесімі
культуралды сұйықтық деп аталады. Түптік
культиверлеу арнайы
аппараттарда
-арнайы
араластырғыштармен
және
аэробты
микроорганизмдердің өсуін қамтамасыз ету үшін,
таза ауа жеткізу жүйесімен жабдықталған,
ферментаторларда жүзеге асырылады.Аэрация деп
культуралды сұйықтық арқылы таза ауаны үрлеуді
айтамыз. Барлық процесс қатаң асептикалық
жағдайда жүргізілуі керек
9. Ұзартылған кезеңдік культивирлеу процесін сипаттаңыз
Ұзартылған топырақ өсіру процесі, периодтық сияқты, ферментті бір реттік тиеу мен түсіруді қарастырады. Алайда, ұзақ мерзімді процестегі микроорганизмдердің даму циклі не қоректену есебінен (периодты немесе үздіксіз), не жүйеде жасушалардың ұзақ сақталуына байланысты (диализ мәдениеті) ұзарады.
Ұзартылған периодтық процесте микроорганизмдердің концентрациясының және нақты өсу жылдамдығының уақытқа тәуелділігі периодтық процеске қарағанда уақыт бойынша кеңейетіні белгілі. Бұл экспоненциалды фазаны да, атап айтқанда, сызықтық өсу фазасын да ұзартады.
Қоректік заттар қосылған мәдениет-субстратпен шектелген өсуді алудың бір әдісі. Сонымен қатар, қоректендіру кезіндегі мәдениеттің экономикалық коэффициенті қарапайым периодтық мәдениетке қарағанда жоғары. Макияж партиялық процесті кеңейтілген партиялық процесске айналдырады және негізінен процестің өнімділігін едәуір арттыратын биосинтез өнімдерін алу үшін қолданылады.
Мерзімді мәдениетте, сіз білетіндей, метаболикалық өнімдер біртіндеп жиналады, олар өсуді тоқтатады. Өнімдердің шығымын жоғарылату немесе биомассаның концентрациясын арттыру үшін диализ процесі қолданылады.Бұл әдістің мәні - мәдениеттің жартылай өткізгіш мембранамен шектелген кеңістікте дамуы, ал өнімдер сыртқы ерітіндіге таралуы. Диализдің қарапайым әдісі - қоректік ортаға батырылған целлофан пакеттерде өсіру. Бұл әдісті бірқатар авторлар экзотоксиндерді алу үшін жасады және жоғары белсенді дәрілік заттарды алуға мүмкіндік берді, бірақ оны өндірістік ауқымда енгізудің күрделілігіне және токсинді көп мөлшерде алудың мүмкін еместігіне байланысты кең практикалық қолдануды таппады.
10. Жартылай үздіксіз культивирлеу процесін түсіндіріңіз
Үздіксіз культивирлеу
Үздіксіз культивирлеу деп- суспензиядағы клеткаларды өсіру процесі үздіксіз
Үздіксіз культивирлеу жартылай ағынды және ағынды жүйеге ажыратылады.
Жартылай ағынды жүйеде өсіру,бірнеше уақыт интервалында суспензияның бір
Жартылай үзіліссіз жүйелерде ашытқышты толық тиеу және түсіру бір рет жүзеге асады, алайда культураның өсуі кезінде оның бір бөлігі бірігіп кетеді, ал босатылған көлем жаңа қоректік ортамен толтырылады. Осылайша, ағызу және толтыру жүйесі жұмыс істейді. Демек, жартылай үздіксіз культивация құрғатылған өсірілетін өсімдіктің жиілігі мен көлемімен және ферменттеуіштің жұмыс қабілеттілігіне жаңа қоректік ортаны қосумен сипатталады.
Жартылай үзіліссіз өсірудің белгіленген режимдері микроорганизмдердің концентрациясының бірдей тұрақты мәнге сәйкес ауытқуымен және популяцияның орташа өсу жылдамдығының тұрақтылығымен сипатталады.
Микроорганизмдерді жартылай үздіксіз өсіру ашық динамикалық біртекті бір сатылы жүйеде араластыру және аэрация жүйесімен жабдықталған кез келген сериялы ферментерде жүргізіледі.
Ашытқы, балдырлар, антибиотиктер, лимон қышқылы және басқаларды өндіруде жартылай үздіксіз жүйелердің әр түрлі нұсқалары қолданылады.
11. Өсімдік жасушаларын культивирлеу туралы түсінік беріңіз
Өсімдік клеткаларының, тіндерінің, органдарын культивирлеу жетістігі тек ортаның құрамы ғана емес, культивирлеу жетісітігі тек ортаның құрамы ғана емес, культивирлеу шартымен де анықталады, өкінішке орай , олардың in vitro клеткаасының өсуіне және дамуына әсерінашар зерттелген және арнайы зерттеуді қажет етеді. Айтылған тұқымдарға сәйкес клетканың сәтті культивирленуі үшін 25+-2 градус тұрақты жылу қажет. Бірақ бұл қалыптасқан, жағдай мәліметтердің шектеулігін қамтиды. Темекінің каллустың өнімінің оптимальды өсуі 32гр - та, ипомеяның суспензиялық өнімі -30-32гр да қадағаланады.
Өсімдіктің бірінші және екінщі метабализм үрдісіне жыылу әсер етеді. Жылулық оптоминимумды таңдап алу әр культураға эксперимент мақсатына байланысты эмприкалық тәсілмен жүзеге асуы қажет. Дегенмен, мұндай тәжірибені қою-еңбекпен , ұзақ жұмыспен келеді, сонд. Зерт-р клетканы әдеттегідей 25гр мөлшерде өсіреді.
Клетка культивирлеуге әсер ететін сыртқы факторға жылудан басқа жарық та жатады. Осы уақытқа дейін фотоавтотровты өсімдіктер, өсімдіктің 16 түрі үшін сипатталған. Қалған басқа өнімдер фотоавтотровты өсімге қабілетсіз, сонд. Қараңғыда өсуге қабілетсіз.
12. Жануарлар жасушаларын культивирлеу туралы түсінік беріңіз
20 ғ. Бірінші 10 ж-да жануардың клетка тіндерін организмнен бөліп алуды және олардың өсуіне жағдай және in vitro өндіруді мойындады. Мұндай процесстерге қол жеткізуге болатындығы белгілі болғандықтан, жұмыстың екінші этапы басталып, негізгі болып өсіру мүмкіндіктерінің демонстрациясы және мұндай клеткадағы инфекция агент-вирустарының ренпродукциясы б.т.
Каррель өзінің әріптестеріне клеткаларды in vitro культивирлеуге үлкен үлесін тигізді. Каррель өзінің әріптестеріне клеткаларды қайтадан өткізу процесі кезінде жасалатын бақылаулар туралы демонстрация жасады. Істелінген жұмыс барысында культивирлеу ортасы рецептурасына бірқатар өзгертулер Ренгердiң ерітіндісін модифицирледі және тауық сарысуымен эмбриональды қолдана коагулятын бастады . Бөлiнiп жатқан экстракты толтыруда фибрин жануарлар клеткаларын бақылау үшін 1928ж Канти кинофотомикрография тәсілін кезеңде клеткалык жұмыс техникамына қосымша шығарды . Осы және түбiрлi өзгерістер болды . Ең бірінші жалғыз клетка культуралар клонын 1948 Эрли мен онын әріптестері алды .
Жануарлар клеткасы культурасын жүргізу үшін стандарттық орта . орталары МЕМ ( minimal essetial medium ) және ВМЕ ( basal medium , Eagle ) . MEM жиі қолданылады . Олар көмірсулар субстратының міндетін атқаратын минералды заттар , Аминқышқылдары ( 13 ауыстырылмайтын ) , 6 суда ерітілген ерітінділер , витаминдер , холин мен инозитті құрайды . МЕМ тек сарысумен ғана өйткенi онда тек кана биотин , B12 витамині , Temip микроэлементтер . Эрл ерітіндісінің негізі . дульбекко ДМЕ және ДМЕМ ортасы ( Игл ерітіндісінің қосарланған модификациясы ) . Клетка культивирленгенде әртүрлі типтер қолданылады , оның iшiнде трансформирленген клеткалар мен гибридтер бар ) . Марысусыз ортада негiз болып табылады . Амин қышқылының қосарланған концентрациясын , глицин , серин , пируват , Tемiр құрайды . Бұл ортаны қолданғанда 10 % -Tik CO2 концентрациясымен инкубатор қажет.
13. Жануарлар жасушаларының культуралық жүйесін сипаттаңыз
Өсіру клеткаларын сау жануарлардан эмбрионалды және қатерлі тіндерден өсіру арқылы жүзеге асыруға болады. Кейбір жағдайларда жеке жасушалардан суспензия дайындау үшін жасушаларды бұзу үшін физикалық немесе ферментативті әдстер қолданады.
Культурасын өсіру үшін тірі жасушаларды бірнеше жолмен алуға болады. Жасушаларды қаннан оқшаулауға болады, бірақ лейкоциттер ғана мәдениетте өсе алады. Монокулеарлы жасушаларды жасушадан тыс матрицаны бұзатын коллагеназа,трипсин, проназа сияқты ферменттердің көмегімен жұмсақ тіндерден оқшаулауға болады. Сонымен қатар, мата мен материалдардың бөліктері қоректік ортаға орналастыруға болады.
14. Біріншілік культураларға анықтама беріңіз
Клеткалар популяциясы үнемі гомогенді болмайды және фиксирленген фенотипі бар. Культураға енгізуге қандай ті алуғаЖаңа бөлінген культуралар пассирлеу мен субкуьтурлеубасталғанға дейін біріншілік культура деген атқа ие болады.
Біріншілік культуралар клеткалары әдетте гетерогенді және төменгі пролиферациямен сипатталады. пассерлеу культураның өмір сүруін ұзартып, клонирлеу мүмкіндігін зерттеу және клетканың сақтау қасиетін қамтамасыз етеді. Бұдан неғұрлым біртекті популяция пада болады, сонымен қатар специфирленген клеткалар жоғалады. Бірнеше егуден кейін клеткалар линиялары өледі неме транформацияланады және тұрақты клеткалар линияларына айналады. Өлмейтін қасиетке ісіктен алынған клеткалар ие. Тұрақты клеткалар линиялар морфологиялық өзгерістерімен, сарысуға тәуелділігінің төмендеуімен, эффектісінің жоғарлауымен субстратқа тәуелділігінің төмендеуімен гетероплоидтылықтың жоғарлауымен анеуплоидтықпен және ісіктектіліктің көбеюімен констатирленеді. болады, ересек немесе эмбринальды, калыпты немесе ісіктік? Эмбриональды тіннен алынған культуралардың тіршілікке қабілеттілігімен және ересек тіндерге қарағанда белсенді өсу қабілетімен сипатталады. Мұның себебі болып, мамандандырудың төменгі деңгейі қызмет етеді. Ересек тіндерді пролиферативті қабілеті болып, олардың бөлінбейтін маманданған клеткалардың көп болуы. Үлкен тіндердің біріншілік клетка культураларын алу және олардың көбеюі қиын болғандықтан, мұндай клеткалардың өмірі ұзақ емес. Ісіктен алынған культуралар үздіксіз ұзақ уақыт пролиферленгенде қалыпты тіндер культуралар өміріне белгілі бір уақыт береді. Ісік клеткалары культурасында пролиферацияға қабілеттілікті сақтауда аздаған бөлікте дифференцировка болуы мүмкін.Жаңа бөлінген культуралар пассирлеу мен субкуьтурлеубасталғанға дейін біріншілік культура деген атқа ие болады.
Біріншілік культуралар клеткалары әдетте гетерогенді және төменгі пролиферациямен сипатталады. пассерлеу культураның өмір сүруін ұзартып, клонирлеу мүмкіндігін зерттеу және клетканың сақтау қасиетін қамтамасыз етеді. Бұдан неғұрлым біртекті популяция пада болады, сонымен қатар специфирленген клеткалар жоғалады. Бірнеше егуден кейін клеткалар линиялары өледі неме транформацияланады және тұрақты клеткалар линияларына айналады. Өлмейтін қасиетке ісіктен алынған клеткалар ие. Тұрақты клеткалар линиялар морфологиялық өзгерістерімен, сарысуға тәуелділігінің төмендеуімен, эффектісінің жоғарлауымен субстратқа тәуелділігінің төмендеуімен гетероплоидтылықтың жоғарлауымен анеуплоидтықпен және ісіктектіліктің көбеюімен констатирленеді.
15. Тұрақты культураларға анықтама беріңіз
Тұрақты культуралар алынған жасуша сызықтарында 2 жол бар: бірнеше қайта егуден кейін 1 жасуша сызығы. немесе өледі (жасушалардың шектеулі сызығы), 2. немесе ол өзгеріп, тұрақты жасуша сызығына айналады. Қазіргі уақытта жануарлардың 40 - тан астам түрінен алынған 500-ге жуық тұрақты жасуша сызықтары бар. тұрақты жасуша сызығының пайда болуы морфологиялық өзгерістермен (жасуша мөлшерінің азаюы, олардың адгезиясының төмендеуі, дөңгелектеу, ядролық - цитоплазмалық арақатынастың жоғарылауы), өсу қарқынының жоғарылауымен (жасушаның екі есе өсу уақыты 36-48 орнына 1,5-4 есе-12 сағ төмендейді), Сарысуға тәуелділіктің төмендеуі және қарапайым ортада ұстап тұру мүмкіндігі, субстратқа тәуелділіктің төмендеуі, демек, олардың суспензиядағы өсу қабілеті; гетероплоидты және анеуплоидты, сондай-ақ ісік туғандығының ұлғаюы бойынша. Алайда, өздігінен тұрақты сызыққа айналатын қалыпты жасушалар қатерлі болмайды (ұқсастықтың кейбір ерекшеліктеріне қарамастан).
Осылайша, тұрақты жасуша сызықтарының белгілі бір артықшылықтары бар: жоғары өсу қарқыны, жоғары тығыздыққа қол жеткізу мүмкіндігі, сондықтан биомассаның жоғары өнімділігі; арзан ортаны пайдалану мүмкіндігі; суспензияның өсу мүмкіндігі. Бірақ кемшіліктер-хромосомалық тұрақсыздықтың жоғарылауы, донордың фенотипінен ауытқу, нақты маркерлердің жоғалуы.
16. Культуралық жүйелердің түрлерін атаңыз
Жануарлардың жасушалық дақылдарының 3 негізгі түрі бар:
- кез-келген органнан алынған және алғашқы қайта егуге дейін бар бастапқы дақылдар;
- диплоидты культуралар, көбінесе эмбриональды тіндерден алынады және 50-ге дейін хромосомалардың диплоидты жиынтығын сақтайды, содан кейін олар өзгереді..- организмнен тыс ондаған жылдар бойы қалыптасқан тұрақты (ауыстырылатын) гетероплоидты дақылдар.
Сонымен қатар, мата дақылдарын бөлуге болады:
- олар пайда болатын жануардың түрі бойынша;
-бастапқы Матаның түрі бойынша;
- алу сәтіндегі тіннің жағдайы бойынша (қалыпты, ісік),
- өсіру әдісі бойынша (монолярлы, суспензиялық, микротасымалдағыштарда және т.б.).
Әрі қарай зерттеу үшін ұлпаны немесе жасуша сызығын таңдаудағы негізгі фактор-бұл жасушаларда зерттелетін процестің табиғаты.Әдетте, эмбриональды тіндерден алынған культуралар тиісті ересек тіндердің дақылдарымен салыстырғанда жақсы өмір сүруімен және белсенді өсуімен сипатталады, бірақ бірқатар практикалық артықшылықтарға қарамастан, бұл жасушалар кейбір жағынан ересек жасушалардан ерекшеленетінін есте ұстаған жөн.Қалыпты тіндер, әдетте, өмір сүру уақыты шектеулі дақылдарды тудырады, ал ісіктерден алынған жасуша культуралары шексіз ұзақ уақыт бойы көбейе алады.
17. Бір қабатты культураларға анықтама беріңіз
Бір қабатты культура - бұл қоректік ортасы бар колбада немесе петри табақшасында жасушалар бір қабатта өсірілетін мәдениет түрі. Бір қабатты мәдениет сонымен қатар жабысатын мәдениет немесе якорьге тәуелді мәдениет деп аталады. Жабысқақ немесе якорьге тәуелді мәдениетке сілтеме жасаудың себебі-бұл жасушаларға өсу кезінде бекіту үшін субстрат қажет. Олар субстраты бар жасуша мәдениетін ұстанады.Қоректік ортада қолданылатын субстраттар қолданар алдында зарядталуы керек. Бұл зарядталған субстраттар жасушаның жасушалық өзара әрекеттесуіне ықпал етеді. Электр ионды разрядтаушы, екі валентті катионды жабындар мен гамма -сәулелендіру - бұл субстраттарды зарядтау үшін қолданылатын көздер. Бір қабатты қоректік ортада, жасушалар егілгеннен кейін, контактілі ингибирлеу деп аталатын процестің көмегімен өсу реттеледі. Байланысты тежеу кезінде жасушаның беткі қабатына бекітілген бір қабатты қалыптастырғаннан кейін олардың қалыпты көбеюін тоқтату үшін жасушаның өсуі тоқтатылады.
18. Суспензия культураларының не екенін түсіндіріңіз.
Сұйық қоректік ортада культивирленген өсімдік жасушларының культураларын әдетте суспензиялы культуралар деп атайды. Бұл термин нақты және қатаң ғылыми емес, себебі мұндай әдіспен өсірілген жасушалар қасиетінің негізгі ерекшеліктерін түсіндіре алмайды.
Параметрлері бойынша толығымен суспензиялы (түптік) культивирлеу талаптарын толығымен қанағаттандыратын жоғары сатыдағы өсімдік жасушаларының салыстырмалы түрде әлі аз культуралары алынды. Бұл негізінен жеке жасушалардан немесе ұсақ агрегаттардан тұратын жасуша культураларын алу қиындықтарымен байланысты.Сондықтан алдымен жасушалық суспензияны алу әдістерін қарастыру, сондай-ақ өсу жасушаларына қолданылатын суспензиялы (түптік) культура деген тұжырымдаманы талқылау орынды болып көрінеді.Әрине, сұйық қоректік ортада жасушалық суспензия өсірудің каллустық жасушаларды беттік әдіспен өсіруге қарағанда бірқатар артықшылықтары бар.Бұл жерде экзогендік факторлармен жасуша популяциясының метаболизмі мен өсуіне әсер ету оңай жаңғыртылмалы болып табылады. Суспензиялық культуралармен биохимиялық және молекулярлы-биологиялық тәжірибелер жүргізу - ферменттердің индукциясын мен олардың жасушалық циклдармен байланысын, белгілі бір гендердің экспрессиясы мен репрессиясын, мутагендерді оқшаулау мен сипаттамаларын зерттеу жүргізуге ыңғайлырақ.
Суспензиялы культураны өсімдік мүшелерінің бөліктерінен алуға болады (картоп түйнектерінің, ақжелкеннің, сәбіздің етті тамырларының қоршаған паренхимасынан алынған диск), бірақ бұл әдіс көп еңбекті және көп уақытты қажет етеді. Бұл жағдайда эксплант жасушалары бастапқы каллус түзуі керек, содан кейін ғана сұйық ортаға отырғызылған және көбейген беттік каллусты жасушалар суспензияда өсетін өсімдіктер линиясына бастау болады. Әдетте жасушалар культурасын алу үшін каллусты ұлпалар культурасы қолданылады. Каллусты ұлпалардың бос сулы культуралары құрылымды қатты каллустарға қарағанда суспензияға ауыстыруға көбірек жарамды. Суспензия алуға ең дұрыс әдіс каллустарды құрамында 2,4-Д бар ортада өсіру, орда кальций иондарының болмауы, трансплантантты суспензиялы культурада өсіруге арналған пектиназамен өңдеу. Жасуша культурасын алу үшін каллус ұлпасының ең өміршең (пролиферацияланатын) бөлігі алынады және оның мөлшері агарда сериялық өсіруге қарағанда қоректік орта көлемінен 15-20 есе көп болуы керек. Бұл жағдайда беттік культивирлеуде қолданылатын құрамды қоректік орта қолданыла алады, бірақ кейбір жағдайларда ауксиндердің мөлшерін арттырады және (немесе) цитокининдердің мөлшерін азайтады. Жасушалар культурасын инициациялауда араластыру және аэрациялау режимі әрі қарай роллерлер мен шайқағыштарда (айналдырып шайқағыш 10-20 айн.мин) жасушалар культурасын сериялы субкультивирлеудегідей.
19. Қоректік орталар дегеніміз не екенін түсіндіріңіз.
Қоректік орта дегеніміз - күрделі және жай құрамдардың әртүрлі қосылыстары болып келетін орталар. Оны лабораториялық жағдайда бактериялар мен басқа микроорганизмдерді көбейтіп өсіру үшін қолданылады.
Қоректік ортаны жануардан немесе өсімдіктен туындаған өнімдерден дайындайды. Қоректік ортада өсу факторының болуы үлкен маңызға ие. Оларды дайындау үшін экономикалық рентабельді тағамдық емес шикізат қолданылады: жарамсыз қалған қан алмастырушылар, жануар қанының гидролизаты, аминопетиферментативті, қан гидролизаты, биотехнология өнімдері - жем ашытқылары, жемдік лизин, жүзім ұнтағы, ақуыз лизин. Синтетикалық орталардың құрамына химиялық таза заттар - аминқышқылдары, минералды тұздар, көмірсулар, витаминдер және өсіру факторлары кіреді. Консистенциясы бойынша қоректік орталар сұйық, жартылай сұйық, тығыз болып келеді.
Құрамы бойынша - табиғи, синтетикалық және жартылай синтетикалық. Тағайындалуы бойынша негізгі, элективті және дифференциалды - диагностикалы болып бөлінеді.
20. Биологиялық нысандарды культивирлеуге арналған субстраттарды сипаттаңыз
Ертеден белгілі микробиологиялық синтездеу үшін қолданылатын көміртегін құрайтын шикізат көмірсулар, демек субстраттар жасушаның құрылысын синтездеуге арналған микроорганизмдерді пайдаланады.
Биотехнологияда қолданылатын субстраттар мен қоректік орталардың құрамы әр түрлі және олардың ортасы үнемі кеңейіп отырады. Өндірістік процестердің дамуымен шығындардың жаңа түрлері залалсызданады және қажет затқа биотехнологиялық әдіспен жинақталады. Бір жағынан биотехнологиялық өндірістік ағымның өте тез дамуы дәстүрлі шикізат түрлерін тұтыну жағдайларымен байланысты, сондықтан ол шикізат базасын кеңейтуді қажет етеді, басқа жағынан жинақталған қалдық көлемінің ұлғаюы дәстүрлі емес өндіріске қайта айналдырылады, сонымен қатар биотехнологиялық тәсілдермен өнделеді.
21. Жасуша культураларымен жұмыс істегенде қолданылатын құрал-жабдықтарды атаңыз
Жасуша дақылдарымен жұмыс кезінде қолданылатын құрал -жабдықтар.
Суды тазартуға арналған қондырғы
Қоректік заттарды дайындау немесе мәдени ыдыстарды жуу үшін қолданылатын судың сапасы маңызды. Соңғы уақытқа дейін мұндай суды ауыз суды қарапайым және екі есе айдау арқылы дайындайтын. Қазіргі кезде дәстүрлі әдістермен қатар кері осмос, ион алмасу және мембраналық фильтрлеудің физико -химиялық процестерін қолдану арқылы суды тазарту әдістері кеңінен қолданылады. Бұл қондырғыларда бастапқы су ретінде пайдаланылатын және кері осмос арқылы өтетін ағынды сулар активтендірілген көмір сүзгілеріне түседі, олардан - ион алмастыратын шайырлары бар тіректерге, содан кейін диаметрі 0,22 мкм болатын мембраналық сүзгілерге. Қажет болса, су қосымша ультракүлгін сәулеленудің күшті ағынына ұшырайды.
Суды тазарту үшін ОВ-1 типті қондырғылар жиі қолданылады, олар тәуелсіз пайдалануға мүмкіндік беретін екі құрылымдық тәуелсіз бөліктен тұрады-ОВ-2 және ОВ-3. ОВ-2 қондырғысы тазартылған судың тазарту сапасынан асатын жалпы зертханалық суды дайындайды.
Ыдыс -аяқтарды зарарсыздандыруға арналған құрылғылар мен құрылғылар
Ыдыс жууға және зарарсыздандыруға арналған қондырғылар мен аппараттар технологиялық процестің барлық кезеңдерін қамтамасыз етеді: эксперименттен келетін бу стерилизаторларындағы қаныққан су буымен ыдыстарды алдын ала зарарсыздандыру (автоклавтар); химиялық реагенттердің сулы ерітінділеріне алдын ала сіңдіру (5% натрий гипохлоритінің ерітіндісі, 3% сутегі асқын тотығы ерітіндісі және т.б.); суық немесе сәл қыздырылған суға малынғаннан кейін шаю; аз көбіктенетін ыстық жуғыш зат ерітіндісімен жуу; ыстық сумен қайталама шаю; тазартылған немесе жалпы зертханалық сумен соңғы шаю; ыстық ауаны үрлеп кептіру шкафтарында кептіру; буып -түю; бу немесе ауа стерилизаторларында соңғы зарарсыздандыру.
Ыдыс жууға арналған ең жақсы нұсқа-автоматты кір жуғыш машиналарды пайдалану (Forma Scientific, Miele, Hotpack-Heinicke немесе P3-AMM сияқты отандық машиналар).
Дозалауға, сұйылтуға және сынама алуға арналған құрылғылар. Жасуша дақылдарымен жұмыс тәжірибесінде биологиялық белсенді сұйықтықтарды жаппай мөлшерлеу, сынама алу немесе сұйылту қажеттілігі үнемі туындайды. Ол үшін әр түрлі көздерде шақырылатын автоматты немесе жартылай автоматты құрылғылар, мөлшерлегіштер, автоматты пипеткалар және т.б.
Мұндай құрылғыларға қойылатын негізгі талаптардың бірі - дозаланған ерітінді мен диспенсер құрылымының бөліктері арасында байланыстың болмауы. Бұл талаптар екі арна арқылы бір мезгілде сұйылту немесе мөлшерлеуді шығаратын жартылай автоматты және автоматты шприц-диспенсерлермен орындалады және олар автоматты және жартылай автоматты режимде жұмыс істей алады.
Дозатрон-4 типті ең көп қолданылатын автоматты шприц-диспенсер сұйықтықтарды иммунологиялық пластиналарға микрокветпен автоматты түрде мөлшерлеуге арналған. Бір реттік дозаның көлемі эксперимент мақсатына байланысты белгіленеді.
ПЛ-01 типті зертханалық пипеткалар, КДП-1 және Р1 типті тамшуырлар дисплейлері биологиялық белсенді сұйықтықтарды жартылай автоматты түрде шығарады, ПЛ-01 зертханалық пипеткалары 3 модельден тұрады. Доза мөлшерін пайдаланушы белгілі бір диапазонда белгілейді (2 20 мкл, 20 200 мкл, 200 1000 мкл). КДП-1 тамшуыр диспенсерлерінің жиынтығына 8 модель кіреді, олардың әрқайсысы көлемінде бекітілген 2 дозаны (5-тен 1000 мкл дейін) жеткізуді қамтамасыз етеді. Р1 диспенсерлер жиынтығына 1 бекітілген дозаға (20 -дан 500 мкл -ге дейін) конфигурацияланған 5 модель кіреді. Бұл құрылғылардың барлық түрлері бумен зарарсыздандыруға және қайта пайдалануға болатын ауыстырылатын кеңестерді қолдануды болжайды.
Жоғарыда сипатталған құрылғылар 40 ° C дейін қыздырылған және тұтқырлығы суға жақын сұйықтықтармен жұмыс жасауға мүмкіндік береді. Бұл оларға тұтқырлығы төмен болу үшін кемінде 60 ° С температураға дейін қыздыру қажет агар негізіндегі қоректік ортаны мөлшерлеуді қамтамасыз етпейді.
Агар-1. Перистальтикалық дозалау сорғысы мен толтыру механизмінен тұратын қоректік ортаны толтыруға арналған бұл құрылғы қамтамасыз етеді арнайы пластиналарда орналасқан диаметрі 100 мм болатын 16 шыны Петри табақшасынан 1 минут ішінде бір мезгілде автоматты түрде толтыру. Аппараттағы стерильді жағдайлар оның ішкі көлемінің ультракүлгін сәулеленуімен сақталады.
Эксперименттерде кіші зертханалық қондырғылар да қолданылады, олар диспенсерлер емес, бірақ бұл процесті жеңілдетуге қабілетті.
Flow, Bellco, Cole-Parmer және басқалар), Пастер тамшуырларымен және сыйымдылығы 75 мл-ге дейінгі кез келген пипеткамен жұмыс кезінде дозаны іріктеуге және таратуға арналған. Пипетка арнайы ұстағышқа салынған тікелей ұстағышта немесе автономды орналасқан шағын көлемді вакуумдық сорғыға қосылған. Құрылғының жұмысы ұстағышта орналасқан түймелерді басу арқылы басқарылады.
22. Қоректік орталарды дайындау үшін қолданылатын құрылғыларды сипаттаңыз
Жасушалық дақылдарға арналған сұйық қоректік орталарға қойылатын негізгі талаптардың бірі олардың стерильділігі болып табылады, кейбір жағдайларда қоспалық бөлшектерден, бактериялар мен коллоидтардан қоректік ортаны бөліп шығаратын стерильдеу деп аталатын сүзу арқылы қол жеткізіледі.
Қоректік ортаның микро және ультра сүзгілеуін ажырату қажет.Сұйықтықтан бастапқы сүзу 0,25-тен 10 микронға дейінгі қоспалар мен бактериялардың бөлшектерін жояды. Ультрафильтрация өте ұсақ бөлшектер мен коллоидтардың ерітіндісін, сондай -ақ молекулалық массасы 1000 -нан 1 млн. Дейін еріген заттардың молекулаларын алуға әкеледі.
Микрофильтрация процесі сұйықтықты мембрана немесе тереңдік сүзгілері арқылы өткізу арқылы жүзеге асады. Мақта жүнінен, шыны талшықтан, фарфордан және басқа материалдардан жасалған терең сүзгілерге тән бірқатар кемшіліктер (мысалы, сүзгі массасында микроорганизмдердің көбею мүмкіндігі, сүзілген сұйықтықтардың едәуір мөлшерін сіңіру) қолдануды жөн көреді. Мембраналық сүзгілер әр түрлі полимерлерден жасалған, соның ішінде зарарсыздандыруға мүмкіндік беретін (фторопластикалық, поливинилденді дифторид, целлюлоза эфирлері) және химиялық төзімділікті қамтамасыз ететін қоректік ортаны тазартуға арналған мембраналық сүзгілер. қоректік ортаның компоненттері. Қоректік заттарды фильтрлеу үшін әдетте диаметрі 0,2 - 0,22 мкм мембраналық сүзгілер қолданылады.
Миллипоре, Сарториус, Шлейхер-Шулл және басқалар шығаратын сүзгілер.
Тұтастай алғанда, фильтрлеуді зарарсыздандыруға арналған қондырғы сүзілген сұйықтыққа артық қысым жасау жүйесінен, стерильді фильтр ұстағыштан, сүзгі мембранасынан, құбырлар мен сүзілетін сұйықтық пен фильтратты орналастыруға арналған ыдыстардан тұрады.
Сұйықтықтың сүзгі арқылы қозғалысын қамтамасыз ету үшін оған сырттан белгілі бір қысымды қолдану қажет.Осындай қысымды орталықтан тепкіш күштер, агрегаттың шығысындағы вакууммен жасауға болады, бірақ көбінесе осы мақсат үшін жеткізу инертті газ (мысалы, азот) тазартылатын ортасы бар ыдысқа белгілі бір қысыммен қолданылады. Артық қысымның шамасы тері тесігі мен мембрананың ауданына байланысты.
23. Жасушаны культивирлеу бөлмелеріне сипаттама беріңіз
Қоректік ортаны зарарсыздандыру, жасушалық культуралармен жұмыс кезіндегі барлық басқа манипуляциялар сияқты, қорап бөлмелерінде немесе ламинарлы қораптарда жүргізіледі.
Бокс бөлмесі-бұл жуылатын шаң сіңіретін жабындылары бар оқшауланған бөлме, ол алдын ала қорапшасы бар және қажетті жалпы және арнайы жарықтандырумен, қоректендіру мен шығатын желдету жүйелерімен, суық және ыстық сумен, сондай-ақ газбен және сығылған ауамен қамтамасыз етілген. жабдықтар.
Ламинарлы қораптар немесе стерильді жұмыс орындары жабдықты аз қажет ететін қорап бөлмелеріне балама болып табылады. Бұл жағдайда кез келген бөлмеде жергілікті стерильді көлемді жасауға болады, ол жұмыс үшін қажет және пайдаланушыларға биологиялық қорғаныс жасайды. Техникалық тұрғыда мәселе ламинарлы ағынмен жұмыс алаңын үздіксіз үрлеу арқылы шешіледі. Патогенді емес екендігі белгілі материалдармен жұмыс істеу кезінде жұмыс аймағынан шаңсыз ауа ағыны тікелей қоршаған кеңістікке түседі. Потенциалды патогенді материалмен жұмыс кезінде ауа жұмыс аймағынан шықпас бұрын қосымша сүзіледі, операторды үрлеу мүмкіндігі жоққа шығарылады. Ламинарлы-қорапты құрылғыға байланысты жұмыс аймағындағы шаңсыз ауа ағыны көлденең, тік, көлбеу болуы мүмкін.
Шаңсыз ауаның көлденең ағыны бар ламинарлы қорап, paUOBG түрі (көлденеңінен биологиялық шаңсыз қондырғы) ағын) жұмыс аймағына жеткізілетін ауаны құрылғыға салынған ірі және жұқа сүзгілерде сүзу арқылы тазартуды қамтамасыз етеді (ол ластанған сайын, ірі сүзгі жуылады, жұқа сүзгі ауыстырылады). Құрылғыда жарықтандырудың кіріктірілген көздері, ультракүлгін сәулелену (қорапты пайдалану арасындағы үзіліс кезінде жұмыс аймағын зарарсыздандыру үшін) және ауа ағыны реттегіші бар.
UOBV және UOBN типті шаңсыз ауаның тік және көлбеу ағындары бар ламинарлы қораптарды ұйымдастыру жоғарыда сипатталған көлденең ағыны бар ламинарлы қорапты ұйымдастыруға ұқсас.
BP-4004 (Box-R) потенциалды патогенді культурамен жұмыс жасауға арналған ламинарлы қораптың кейбір айырмашылықтары бар. Құрылғы ауа ағынының рециркуляциясын қамтамасыз етеді, ол жұмыс көлеміндегі ауа арнайы жұқа сүзгіге енеді, оның бір бөлігі қоршаған кеңістікке шығады, ал қалған ағын жұқа сүзгіден өтеді. және қайтадан жұмыс көлеміне енеді. Бұл өңделген материалды бөлмеге кіргізудің мүмкін еместігіне қол жеткізеді. Шығатын ауаның операторға ену мүмкіндігі қораптың жұмыс көлемінің ашық жағында сору аймағын құру арқылы алдын алады. Құрылғыда жарық пен ультракүлгін сәулеленудің кіріктірілген көздері, баспайтын болаттан жасалған үстел үстелі бар. Жұмыс көлемінің алдыңғы бөлігі мөлдір әйнекпен жабылған, оны биіктік бойынша жылжытуға болады. Қорап ауа ағынын реттейтін жүйемен және жұқа сүзгінің ластану көрсеткіштерімен жабдықталған.
Жоғарыда аталған ламинарлы қораптардың түрлері ауаны алдын ала тазартумен жабдықталған желдеткіші бар кез келген өндірістік үй-жайға орналастыруға арналған.
24. Культуралық зертханалар жабдықтарының түрлерін сипаттаңыз
Культура зертханаларына арналған жабдықтар.
Зертханалық термостаттар. СО2 инкубаторлары.Жасушаны өсіруге арналған зертханалық термостаттар бірқатар арнайы талаптарға сай болуы керек: 1) берілген температураны ұстап тұрудың жоғары тұрақтылығын қамтамасыз ету; 2) пайдалы көлемнің ең төменгі температуралық градиентін құру; 3) пайдалы көлемнің қысқа мерзімді ашылуынан кейін температураны тез қалпына келтіру жүйесі болуы; 4) ішкі көлем биологиялық пассивті материалдардан, яғни жасушалардың өмірлік белсенділігіне әсер етпейтін және қоректік орта компоненттерінің әсеріне төзімді материалдардан жасалуы керек.
Термостат алкогольдің сулы ерітінділерімен залалсыздандыруға және ультракүлгін сәулелену арқылы түзетуге және зарарсыздандыруға қабілетті болуы керек.
Дизайн бойынша зертханалық термостаттар сұйық және ауа болып бөлінеді. Сұйық термостаттарда пайдалы көлем тазартылған сумен толтырылған ыдыспен қоршалған, ол іс жүзінде қызады. Ауа термостаттары электрлік қыздыру элементтерімен тікелей байланыста пайдалы көлемге ие. Сұйық термостаттар камерадағы температура градиентінің шағын мәндерін қамтамасыз етеді, бірақ өте үлкен термиялық инерцияға ие, демек, жұмыс режиміне кіру үшін ұзақ уақыт. Бұрын бірқатар негізгі параметрлері бойынша сұйық термостаттардан төмен болатын ауа термостаттарының жетілдірілген түрлері қазір сериялық шығарылатын модельдердің едәуір бөлігін құрайды.
25. СО2 инкубаторының құрылғысын сипаттаңыз
СО2 инкубаторлары
Қоректік ортада рН тұрақты мәнін ұстап тұру қажеттілігі және жасушалардың инкубациясы кезінде оның минималды булануы жоғарыда сипатталған термостаттарға ұқсас арнайы құрылғылардың дамуына әкелді.Басты айырмашылығы-белгілі бір жүйені құру мен қолдау жүйелерінің болуы. газды ортаның пайдалы көлемдегі құрамы және ондағы салыстырмалы ылғалдылығы жоғары. Бұл Heraues, Hotpack шығаратын ұялы көміртекті инкубаторлар.
Ағын. СО2 инкубаторының камераларындағы газды ортада оттегі мен көмірқышқыл газының концентрациясы жоғарылайды, ал көп жағдайда тек көмірқышқыл газы. Шоғырлану мәні өсіру жағдайына сәйкес орнатылады және автоматты түрде сақталады. СО2 автоматты инкубаторларында газды ортаның берілген құрамы құрылғының ішкі көлеміне берілетін шаңсыз сыртқы ауа ағынына қажетті газдың мөлшерленген берілуімен сақталады. Инкубаторлардың тағы бір түрі-бұл GPI-1 типті газ ағыны деп аталатын инкубаторлар, онда қажетті газдарды беру үздіксіз жүзеге асады, ал нақты пайызға ағынның жылдамдығын өзгерту арқылы қол жеткізіледі.
26. Аэратордың мәнін сипаттаңыз
Аэраторлар
Қоректік ортаның аэрациясын қамтамасыз ету үшін - оттегімен қамтамасыз ету air ауаны, сондай -ақ оттегімен байытылған ауаны жиі пайдаланыңыз - таза оттегі. Газ тәрізді субстраттарға және қажеттілікке байланысты оттегіне қол жеткізе алмайтын процестер (анаэробты) қалдықтар. Аэраторлар газбен жабдықтау мен шығару жүйелерінің жұмысының жарқын мысалы болып табылады.
27. Зертханалық ферментатордың мәнін сипаттаңыз
Зертханалық ферментерлер
Бұл жасушалық және бактериялық дақылдарды жаппай суспензиялауға немесе су астына өсіруге арналған құрылғылар мен аппараттар кешені. Зертханалық тәжірибеде ферментерлер зерттеу жұмыстарын жүргізу үшін немесе жаппай өсіру технологиясын жасау үшін қолданылады (пилоттық биореакторлар).
Жалпы жағдайда ферментератор өсіру ыдысынан, сорғылар мен қосылатын құбырлардан (қоректік ортаны, газдарды, егу мен өнімді таңдауға арналған), ыдыстағы ортаның температурасын, оның рН -ын бақылайтын өлшеу құралдары мен реттегіштерден тұрады. тотықсыздану потенциалы және басқа параметрлер.
Зертханалық тәжірибеде 1 -ден 20 литрге дейінгі жеті ыдысы бар ферментерлер, өңдеу технологиялары үшін - 30 -дан 400 литрге дейін жиі қолданылады. Барлық жағдайларда ыдыс көлемінің 75% -дан аспайтын қоректік ортаға толтырылады.
Ашытқыштардың қоректік ортаға тиетін бөліктері (ыдыстар, байланыстырушы құбырлар, сорғылар және т.б.) биологиялық пассивті, қаныққан су буымен зарарсыздандыруға мүмкіндік беретін химиялық төзімді материалдардан жасалған (жоғары сапалы баспайтын болат, фторопласт, боросиликат шыны, силикон резеңке) ).
Ашытқыш ыдыстар цилиндрлік (резеконикалық) пішінге ие. Оларда температура, рН, оттегіге арналған датчиктер, сондай -ақ қоректік орта арқылы газдарды көпіршіктендіру арқылы (газды түбінен көпіршігі арқылы беру) немесе газды тазартуды механикалық араластырумен біріктіру арқылы алынатын қоректік ортаны аэрациялау жүйесі бар. қоректік ортаның ластануы. Механикалық және пневматикалық араластырудан басқа, сорғылардың көмегімен жабық тізбектегі бағытталған сұйықтық ағынымен циркуляциялық (гидродинамикалық) араластыру жүйелері де қолданылады.
Араластырылған және газдалған культуралардың көпшілігі өсу кезінде көбіктің жеткілікті мөлшерін құрайды.Өсіру ортасының бетінде көпіршіктер қабатының пайда болуы ортада беттік активті заттардың болуымен байланысты, олардың құрамына майлардың ыдырау өнімдері кіреді - сабындар, ақуыздар сияқты. Беттік активті заттарға полярлық иондық және полярлық емес топтар жатады. Зарядталған топтардың сулы фазаға жақындығы ... жалғасы
Сіз бұл жұмысты біздің қосымшамыз арқылы толығымен тегін көре аласыз.
Кредит саны: 6; Сұрақтың саны: 125;
1 деңгей
1.Жасуша культивирлеу процестерін түсіндіріңіз
Жасуша мәдениеті дегеніміз-жануардағы немесе өсімдіктегі жасушаларды алып тастау және олардың қолайлы жасанды ортада өсуі. Жасушаларды ұлпадан тікелей алып тастауға болады және өсірілгенге дейін ферментативті немесе механикалық құралдармен бөлшектеуге болады немесе олар жасуша сызығынан немесе қазірдің өзінде құрылған жасуша штаммынан алынуы мүмкін.
Жасуша өсіру-бұл процесс in vitro прокариоттар мен эукариоттардың жеке жасушалары (немесе жалғыз жасуша) бақыланатын жағдайда өсіріледі. Іс жүзінде "жасуша культурасы" термині негізінен көп клеткалы эукариоттардан, көбінесе жануарлардан алынған бір тіндерге жататын жасушалардың өсуін білдіреді. Жасуша дақылдарын өсіру технологиясы мен әдістерінің тарихи дамуы тіндік дақылдар мен бүкіл мүшелерді өсірумен тығыз байланысты.
Қазіргі уақытта жануарлардың жасушалары мен тіндерін өсіру жасушалық және молекулалық биологиядан бастап биотехнологияның тез дамып келе жатқан салаларына дейін әртүрлі зерттеу салаларында кең таралды. Жануарлардың ұлпалық мәдениеті жасушалардың өсу және саралау механизмдерін, интерстициальды және жасушааралық өзара әрекеттесуді, зат алмасуды және т.б. зерттеу үшін қолданылады. Вирустар оларды анықтау және вакциналар алу үшін өсіріледі. Жасушалық культуралар көбінесе дәрі-дәрмектер мен косметиканың, пестицидтердің, консерванттардың әсер ету механизмін сынау және зерттеу кезінде қолданылады.
2. Микроорганизмдердің жасушаларын культивирлеу процесін сипаттаңыз
Микроорганизмдердің культивирлеу туралы ұғым:: Коректік ортада микроорганизмдердің өсуі культивирлеу деп аталады. Культуралардың өсуі
кезінде физиологиялық процесс жүреді, нәтижесінде биомасса ұлғаяды. Биомассаосы микроорганизмнің клеткалық затының массасы.
Микроорганизмдердің культиверлеу тәсілдері.
Культиверлеу тәсілі культиверлеудің түпкі мақсатына
байланысты (мақсаты ретінде биомасса жинау немесе
белгілі бір тіршілік әрекеті өнімін - метаболитті өндіру
болып табылады).
3. Культивирлеу процестері жіктелуінің қандай кезеңдері бар
Микроорганизмдердің культиверлеу тәсілдерінің келесі түрлерін ажыратады:
Беттік культиверлеу
Түптік культиверлеу
Мерзімді культиверлеу.
Үздіксіз культиверлеу
Беттік культиверлеу деп аэробты микроарганизмдерді сұйық және сусымалы орталардың бетінде өсіруді айтамыз. Бұл ретте микроорганизмдер о
Беттік культиверлеу
Беттік
культиверлеу деп аэробты микроарганизмдерді сұйық және
сусымалы орталардың бетінде өсіруді айтамыз. Бұл ретте микроорганизмдер оттегіні тікелей ауадан алады. Беттік культиверлеулеу кезінде микроорганизмдер сұйық орталардың бетінде қабыршақ түрінде өседі.
Беттік культиверлеу арнайы ванналарда кюветаларда орындалады. Әдістің кемшілігі үлкен аймақты қажет ететіндігі.
Беттік культивирлеудің басты артықшылығы -
ақырғы өнім концентрациясының жоғары болуы.
Беттік культураларды кептіру процесі оңай әрі тез
жүреді. Оларды тауарлық күйге көшіру оңай және
тасымалдауға ыңғайлы.
Түптік
әдіспен
салыстырғанда энергия шығыны үлкен емес.
Түптік культиверлеу:
Түптік культиверлеу - микроорганизмдер қоректік
ортаның барлық көлемінде дами алатын сұйық
қоректік орталарда жүргізіледі. Қоректік орта мен ондағы өсетін микроорганизмдердің үйлесімі культуралды сұйықтық деп аталады. Түптік
культиверлеу арнайы аппараттарда - арнайы араластырғыштармен және
аэробты микроорганизмдердің өсуін қамтамасыз ету үшін,таза
ауажеткізужүйесіменжабдықталған,фер ментаторларда жүзеге асырылады.Аэрация деп
культуралды сұйықтық арқылы таза ауаны үрлеуді
айтамыз. Барлық процесс қатаң асептикалық
жағдайда жүргізілуі керек.
Түптік культиверлеу
Ферментаторлар
Арнайы араластырғышта
Мерзімді культиверлеу:
Мерзімді культиверлеу кезінде қоректікортының барлық көлемін таза культурамен егіптастайды, ол қолайлы жағдайларда, белгіліуақыт аралығында, мақсатты өнімнің керектімөлшерін жинағанша өсіріледі. Культиверлеужаңартылмайтын қоректік ортада (стационарлықортада) жүргізілетіндіктен, клеткалар үнеміөзгермелі жағдайда болатынын атап кеткен жөн.Сөйтіп периодтық жүйені тұйық жүйе ретіндеқарастыруға болады.
Беттік культиверлеу тек қана мерзімді(периодты)
бола алады, ал түптік культиверлеуді мерзімді де,
үздіксіз де әдістерімен жүзеге асыруға болады.
Үздіксіз культиверлеу:
Үздіксіз
культиверлеукезіндекультураарнайы аппаратта орналасады, ол жергеүздіксіз қоректік орта келіп түседі және солжерден сондай жылдамдықпен культуралдықсұйықтық сыртқа шығарылып отырады.Микроорганизм
үшінөзгермейтінортажағдайлары жасалады, сондықтан үздіксіз
жүйені ашық жүйе ретінде қарастыруға
болады.
4. Қатты қоректік орталарда өсіру әдістерін сипаттаңыз
Тығыз және жартылай сұйық орталар сұйық заттардан гельді агенттің (агар-агар, сирек желатин) болуымен ерекшеленеді. Сонымен қатар, тығыз орта ретінде коагуляцияланған жұмыртқа немесе сарысуы бар ақуыздар, картоп, кремний гелі бар орталар қолданылады. Кейбір микроорганизмдер желатинді қоректік зат ретінде пайдаланады -- олардың өсуімен орта сұйылтылады.
Құрамы бойынша:
қарапайым: ет-пептонды сорпа (МПБ), ет-пептонды агар( МПА), қоректік желатин,
күрделі-құрамында аминқышқылдары, дәрумендер, микроэлементтер және басқа заттар болуы мүмкін көп компонентті орта.
Мақсаты бойынша:
негізгі-көптеген микроорганизмдерді өсіру үшін қолданылады, мысалы, MPB, Mpa, сорпа, шоколад агары, пептон суы.
арнайы-қарапайым ортада өспейтін микроорганизмдерді оқшаулау және өсіру үшін қолданылады.
элективті (селективті) -- микробтардың белгілі бір түрін оқшаулау үшін қызмет етеді, олардың өсуіне ілеспе микроорганизмдердің өсуін кешіктіру немесе басу арқылы ықпал етеді. Орталар оларға белгілі бір антибиотиктер, тұздар, РН өзгерген кезде элективті болады. Сұйық элективті орталар жинақтау ортасы деп аталады.
дифференциалды диагностикалық-микробтардың бір түрін екіншісінен ферментативті белсенділігі бойынша ажыратуға мүмкіндік береді.
көлік-зерттелетін материалды алғашқы себуге және тасымалдауға арналған.
Суспензия -- қатты дисперстік фазаның сұйық дисперстік ортада таралған микрогетерогенді система. Ондағы қатты бөлшектердің өлшемі 0,1 мкмг10 мкм. Егер бөлшектердің дисперстік дәрежесі төмен болса, онда оның радиусы үлкейіп, тұрақтылығы төмендейді де тез тұнбаға шөгеді. Суспензиялардың дисперстілігін микроскоп, электронды микроскоп сияқты оптикалық немесе седиментациялық анализ көмегімен анықтауға болады.
5. Суспензия және түптік культивирлеу туралы түсінік беру
Түптік культиверлеу:
Түптік культиверлеу - микроорганизмдер қоректік ортаның барлық көлемінде дами алатын сұйық қоректік орталарда жүргізіледі. Қоректік орта мен ондағы өсетін микроорганизмдердің үйлесімі культуралды сұйықтық деп аталады. Түптік культиверлеу арнайы аппараттарда - арнайы араластырғыштармен және аэробты микроорганизмдердің өсуін қамтамасыз ету үшін, таза ауа жеткізу жүйесімен жабдықталған, ферментаторларда жүзеге асырылады.Аэрация деп культуралды сұйықтық арқылы таза ауаны үрлеуді айтамыз. Барлық процесс қатаң асептикалық жағдайда жүргізілуі керек.
6. Кезеңдік культивирлеу процесін сипаттаңыз
Кезеңдік культивирлеу микробты биосинтез танысқанда алдымен кезеңді культуранаң өсу динамикасын зерттеуден басталады. Периодты культураның дамуы үшін қоректік ортаға егуден басталады. Егу процесі мынадай мөлшерде іске асырылады, минималдды ұстаумен немесе лаг фазасыз микроорганизмнің алдымен өсуімен қамтамасыз етіледі. Биосинтез барысында лаг фазаға түсінікті аз береді немесе өсу үшін қолайсыз жағдаймен түсіндіріледі. Көптеген микробиологиялық процесс үшін ортанаң көлемінің 2% -дей мөлшері жаңадан жасалған егіс материалына қатысады.
I-фаза лаг-фаза немесе бейімделу фазасы деп аталады.
II-фаза өсу жылдамдығының фазасы немесе ауыспалы деп аталады.
III-фаза - жасуша санының анағұрлым активті өсу фазасы.
IV - фаза баяу өсу фазасы немесе өсу жылдамдығының төмендеуі
V - фаза - стационарлы фаза деп аталады
VI - фаза - қырылу фазасы немесе жойылу фазасы.
7. Кезеңдік культивирлеу процесінің өсу фазаларын атаңыз (4 фаза)
Мерзімді жағдайда сұйық қоректік ортадағы микроорганизмдердің өсу және көбею динамикасы бактерияларға, актиномицеттерге, микроскопиялық саңырауқұлақтарға, микоплазмаларға және басқа про - және эукариоттарға тән бірқатар ерекшеліктерге ие. Жеке даму кезінде олар көбеюдің жоғары жылдамдығымен сипатталады. Даму дәйекті фазалар түрінде жүреді, олардың сипаты мен ұзақтығы жасушалардың физиологиялық жағдайына байланысты, бұл өз кезегінде белгілі бір организмнің популяциясы дамитын қоршаған орта факторларының жағдайымен анықталады.Басқаша айтқанда, микроорганизмнің өсу кезеңдері олардың биомассасы мен қоршаған ортасындағы сандық және сапалық өзгерістерді көрсетеді.Қарапайым біртекті периодтық культурада микроорганизмдер 4-тен 8-ге дейін, тіпті 16 фазаға дейін бөлінеді.
1. Бастапқы фаза (лаг фазасы немесе индукциялық кезең)-бұл микробтық жасушалардың көбеюі болмайтын өсудің тежелу кезеңі. Бұл фаза жасуша өсуінің болмауымен сипатталады. Осы кезеңде егістік дақыл өзгерген сыртқы жағдайларға бейімделеді және белгілі бір қоректік ортада өсу үшін қажетті ферменттер шығарады. Лаг-фазада культуралық жасушаларда айтарлықтай сапалы өзгерістер болады: нуклеин қышқылдарының саны артады, ең алдымен РНҚ, кейбір ферменттер белсендіріледі және басқалары синтезделеді.
Кеш фазасының ұзақтығы келесі факторларға байланысты:
- қоректік ортаның құрамынан - егер қоректік орта құрамы жағынан егістік дақыл өскен ортадан аз ерекшеленсе, кешеуілдеу кезеңі іс жүзінде болмауы мүмкін;
- тұқым сапасынан ~ ондағы өміршең жасушалардың саны, олардың жасы, сақтау әдісі;
- егу дозасынан.
2. Өсудің оң үдеу кезеңі. Көптеген микроорганизмдер үшін бұл кезеңнің ұзақтығы 2 сағатты құрайды және ол температураға, қоректік ортаның құрамына, тұқымның сапасына байланысты. Көптеген авторлар бұл екі кезеңді бірге қарастырады. Осы кезеңде жасуша бөлінуінің болмауына байланысты жасушалар саны тұрақты болып қалады. Микробтық жасушалардың жалпы жағдайы қоректік ортаға бейімделу жағдайы ретінде сипатталады. Осы кезеңде заттардың, жасушалардың синтезі күшейеді, олардың мөлшері артады, оларда көптеген индукциялық ферменттер пайда болады.
3. Логарифмдік (лог-фаза) немесе экспоненциалды (экспоненциалды) өсу фазасы. Ол жасушалардың тұрақты және максималды өсу қарқынымен сипатталады. Бұл фазада микробтардың өсуі экспоненциалды түрде жүреді.
Бұл кезеңнің ұзақтығы байланысты:
- қоршаған ортадағы қоректік заттар қорынан;
- аэрация шарттарынан;
- араластырудан және басқа факторлардан.
Микроорганизмдердің өсу процестерін сипаттау үшін биомассаның жалпы және нақты өсу қарқыны (немесе жасушалар саны) сияқты сипаттамалар қолданылады. Мәдениеттің өсуінің тағы бір маңызды сипаттамасы-бұл мәдениеттің биомассасы екі есе өсетін уақыт. Уақытта генерациялау түрлі микроорганизмдер дақылдары қатты ерекшеленеді. Ең жылдам өсетін бактериялар қолайлы генерация жағдайында генерация кезеңіне ие-20-25 минут.Әр түрлі микроорганизмдердегі лог фазасындағы генерация ұзақтығы бірдей емес. Сонымен, сальмонеллалар үшін ол 20-30 минутқа, стрептококктар мен стафилококктар үшін - 25-35 минутқа, эшерихия үшін - 15-17 минутқа тең.Генерацияның ұзақтығына температура, ортаның рН, ортаның құрамы және т.б. әсер етеді. Ол үшін жасушалар тығыз қоректік ортаға себіліп, содан кейін өміршең жасушалар түзетін колониялардың саны есептеледі.
8. Түптік кезеңдік культивирлеу процесі туралы түсінік беріңіз
Түптік культивирлеу
- микроорганизмдер қоректік
ортаның барлық көлемінде дами алатын сұйық
қоректік орталарда жүргізіледі. Қоректік орта мен
ондағы өсетін микроорганизмдердің үйлесімі
культуралды сұйықтық деп аталады. Түптік
культиверлеу арнайы
аппараттарда
-арнайы
араластырғыштармен
және
аэробты
микроорганизмдердің өсуін қамтамасыз ету үшін,
таза ауа жеткізу жүйесімен жабдықталған,
ферментаторларда жүзеге асырылады.Аэрация деп
культуралды сұйықтық арқылы таза ауаны үрлеуді
айтамыз. Барлық процесс қатаң асептикалық
жағдайда жүргізілуі керек
9. Ұзартылған кезеңдік культивирлеу процесін сипаттаңыз
Ұзартылған топырақ өсіру процесі, периодтық сияқты, ферментті бір реттік тиеу мен түсіруді қарастырады. Алайда, ұзақ мерзімді процестегі микроорганизмдердің даму циклі не қоректену есебінен (периодты немесе үздіксіз), не жүйеде жасушалардың ұзақ сақталуына байланысты (диализ мәдениеті) ұзарады.
Ұзартылған периодтық процесте микроорганизмдердің концентрациясының және нақты өсу жылдамдығының уақытқа тәуелділігі периодтық процеске қарағанда уақыт бойынша кеңейетіні белгілі. Бұл экспоненциалды фазаны да, атап айтқанда, сызықтық өсу фазасын да ұзартады.
Қоректік заттар қосылған мәдениет-субстратпен шектелген өсуді алудың бір әдісі. Сонымен қатар, қоректендіру кезіндегі мәдениеттің экономикалық коэффициенті қарапайым периодтық мәдениетке қарағанда жоғары. Макияж партиялық процесті кеңейтілген партиялық процесске айналдырады және негізінен процестің өнімділігін едәуір арттыратын биосинтез өнімдерін алу үшін қолданылады.
Мерзімді мәдениетте, сіз білетіндей, метаболикалық өнімдер біртіндеп жиналады, олар өсуді тоқтатады. Өнімдердің шығымын жоғарылату немесе биомассаның концентрациясын арттыру үшін диализ процесі қолданылады.Бұл әдістің мәні - мәдениеттің жартылай өткізгіш мембранамен шектелген кеңістікте дамуы, ал өнімдер сыртқы ерітіндіге таралуы. Диализдің қарапайым әдісі - қоректік ортаға батырылған целлофан пакеттерде өсіру. Бұл әдісті бірқатар авторлар экзотоксиндерді алу үшін жасады және жоғары белсенді дәрілік заттарды алуға мүмкіндік берді, бірақ оны өндірістік ауқымда енгізудің күрделілігіне және токсинді көп мөлшерде алудың мүмкін еместігіне байланысты кең практикалық қолдануды таппады.
10. Жартылай үздіксіз культивирлеу процесін түсіндіріңіз
Үздіксіз культивирлеу
Үздіксіз культивирлеу деп- суспензиядағы клеткаларды өсіру процесі үздіксіз
Үздіксіз культивирлеу жартылай ағынды және ағынды жүйеге ажыратылады.
Жартылай ағынды жүйеде өсіру,бірнеше уақыт интервалында суспензияның бір
Жартылай үзіліссіз жүйелерде ашытқышты толық тиеу және түсіру бір рет жүзеге асады, алайда культураның өсуі кезінде оның бір бөлігі бірігіп кетеді, ал босатылған көлем жаңа қоректік ортамен толтырылады. Осылайша, ағызу және толтыру жүйесі жұмыс істейді. Демек, жартылай үздіксіз культивация құрғатылған өсірілетін өсімдіктің жиілігі мен көлемімен және ферменттеуіштің жұмыс қабілеттілігіне жаңа қоректік ортаны қосумен сипатталады.
Жартылай үзіліссіз өсірудің белгіленген режимдері микроорганизмдердің концентрациясының бірдей тұрақты мәнге сәйкес ауытқуымен және популяцияның орташа өсу жылдамдығының тұрақтылығымен сипатталады.
Микроорганизмдерді жартылай үздіксіз өсіру ашық динамикалық біртекті бір сатылы жүйеде араластыру және аэрация жүйесімен жабдықталған кез келген сериялы ферментерде жүргізіледі.
Ашытқы, балдырлар, антибиотиктер, лимон қышқылы және басқаларды өндіруде жартылай үздіксіз жүйелердің әр түрлі нұсқалары қолданылады.
11. Өсімдік жасушаларын культивирлеу туралы түсінік беріңіз
Өсімдік клеткаларының, тіндерінің, органдарын культивирлеу жетістігі тек ортаның құрамы ғана емес, культивирлеу жетісітігі тек ортаның құрамы ғана емес, культивирлеу шартымен де анықталады, өкінішке орай , олардың in vitro клеткаасының өсуіне және дамуына әсерінашар зерттелген және арнайы зерттеуді қажет етеді. Айтылған тұқымдарға сәйкес клетканың сәтті культивирленуі үшін 25+-2 градус тұрақты жылу қажет. Бірақ бұл қалыптасқан, жағдай мәліметтердің шектеулігін қамтиды. Темекінің каллустың өнімінің оптимальды өсуі 32гр - та, ипомеяның суспензиялық өнімі -30-32гр да қадағаланады.
Өсімдіктің бірінші және екінщі метабализм үрдісіне жыылу әсер етеді. Жылулық оптоминимумды таңдап алу әр культураға эксперимент мақсатына байланысты эмприкалық тәсілмен жүзеге асуы қажет. Дегенмен, мұндай тәжірибені қою-еңбекпен , ұзақ жұмыспен келеді, сонд. Зерт-р клетканы әдеттегідей 25гр мөлшерде өсіреді.
Клетка культивирлеуге әсер ететін сыртқы факторға жылудан басқа жарық та жатады. Осы уақытқа дейін фотоавтотровты өсімдіктер, өсімдіктің 16 түрі үшін сипатталған. Қалған басқа өнімдер фотоавтотровты өсімге қабілетсіз, сонд. Қараңғыда өсуге қабілетсіз.
12. Жануарлар жасушаларын культивирлеу туралы түсінік беріңіз
20 ғ. Бірінші 10 ж-да жануардың клетка тіндерін организмнен бөліп алуды және олардың өсуіне жағдай және in vitro өндіруді мойындады. Мұндай процесстерге қол жеткізуге болатындығы белгілі болғандықтан, жұмыстың екінші этапы басталып, негізгі болып өсіру мүмкіндіктерінің демонстрациясы және мұндай клеткадағы инфекция агент-вирустарының ренпродукциясы б.т.
Каррель өзінің әріптестеріне клеткаларды in vitro культивирлеуге үлкен үлесін тигізді. Каррель өзінің әріптестеріне клеткаларды қайтадан өткізу процесі кезінде жасалатын бақылаулар туралы демонстрация жасады. Істелінген жұмыс барысында культивирлеу ортасы рецептурасына бірқатар өзгертулер Ренгердiң ерітіндісін модифицирледі және тауық сарысуымен эмбриональды қолдана коагулятын бастады . Бөлiнiп жатқан экстракты толтыруда фибрин жануарлар клеткаларын бақылау үшін 1928ж Канти кинофотомикрография тәсілін кезеңде клеткалык жұмыс техникамына қосымша шығарды . Осы және түбiрлi өзгерістер болды . Ең бірінші жалғыз клетка культуралар клонын 1948 Эрли мен онын әріптестері алды .
Жануарлар клеткасы культурасын жүргізу үшін стандарттық орта . орталары МЕМ ( minimal essetial medium ) және ВМЕ ( basal medium , Eagle ) . MEM жиі қолданылады . Олар көмірсулар субстратының міндетін атқаратын минералды заттар , Аминқышқылдары ( 13 ауыстырылмайтын ) , 6 суда ерітілген ерітінділер , витаминдер , холин мен инозитті құрайды . МЕМ тек сарысумен ғана өйткенi онда тек кана биотин , B12 витамині , Temip микроэлементтер . Эрл ерітіндісінің негізі . дульбекко ДМЕ және ДМЕМ ортасы ( Игл ерітіндісінің қосарланған модификациясы ) . Клетка культивирленгенде әртүрлі типтер қолданылады , оның iшiнде трансформирленген клеткалар мен гибридтер бар ) . Марысусыз ортада негiз болып табылады . Амин қышқылының қосарланған концентрациясын , глицин , серин , пируват , Tемiр құрайды . Бұл ортаны қолданғанда 10 % -Tik CO2 концентрациясымен инкубатор қажет.
13. Жануарлар жасушаларының культуралық жүйесін сипаттаңыз
Өсіру клеткаларын сау жануарлардан эмбрионалды және қатерлі тіндерден өсіру арқылы жүзеге асыруға болады. Кейбір жағдайларда жеке жасушалардан суспензия дайындау үшін жасушаларды бұзу үшін физикалық немесе ферментативті әдстер қолданады.
Культурасын өсіру үшін тірі жасушаларды бірнеше жолмен алуға болады. Жасушаларды қаннан оқшаулауға болады, бірақ лейкоциттер ғана мәдениетте өсе алады. Монокулеарлы жасушаларды жасушадан тыс матрицаны бұзатын коллагеназа,трипсин, проназа сияқты ферменттердің көмегімен жұмсақ тіндерден оқшаулауға болады. Сонымен қатар, мата мен материалдардың бөліктері қоректік ортаға орналастыруға болады.
14. Біріншілік культураларға анықтама беріңіз
Клеткалар популяциясы үнемі гомогенді болмайды және фиксирленген фенотипі бар. Культураға енгізуге қандай ті алуғаЖаңа бөлінген культуралар пассирлеу мен субкуьтурлеубасталғанға дейін біріншілік культура деген атқа ие болады.
Біріншілік культуралар клеткалары әдетте гетерогенді және төменгі пролиферациямен сипатталады. пассерлеу культураның өмір сүруін ұзартып, клонирлеу мүмкіндігін зерттеу және клетканың сақтау қасиетін қамтамасыз етеді. Бұдан неғұрлым біртекті популяция пада болады, сонымен қатар специфирленген клеткалар жоғалады. Бірнеше егуден кейін клеткалар линиялары өледі неме транформацияланады және тұрақты клеткалар линияларына айналады. Өлмейтін қасиетке ісіктен алынған клеткалар ие. Тұрақты клеткалар линиялар морфологиялық өзгерістерімен, сарысуға тәуелділігінің төмендеуімен, эффектісінің жоғарлауымен субстратқа тәуелділігінің төмендеуімен гетероплоидтылықтың жоғарлауымен анеуплоидтықпен және ісіктектіліктің көбеюімен констатирленеді. болады, ересек немесе эмбринальды, калыпты немесе ісіктік? Эмбриональды тіннен алынған культуралардың тіршілікке қабілеттілігімен және ересек тіндерге қарағанда белсенді өсу қабілетімен сипатталады. Мұның себебі болып, мамандандырудың төменгі деңгейі қызмет етеді. Ересек тіндерді пролиферативті қабілеті болып, олардың бөлінбейтін маманданған клеткалардың көп болуы. Үлкен тіндердің біріншілік клетка культураларын алу және олардың көбеюі қиын болғандықтан, мұндай клеткалардың өмірі ұзақ емес. Ісіктен алынған культуралар үздіксіз ұзақ уақыт пролиферленгенде қалыпты тіндер культуралар өміріне белгілі бір уақыт береді. Ісік клеткалары культурасында пролиферацияға қабілеттілікті сақтауда аздаған бөлікте дифференцировка болуы мүмкін.Жаңа бөлінген культуралар пассирлеу мен субкуьтурлеубасталғанға дейін біріншілік культура деген атқа ие болады.
Біріншілік культуралар клеткалары әдетте гетерогенді және төменгі пролиферациямен сипатталады. пассерлеу культураның өмір сүруін ұзартып, клонирлеу мүмкіндігін зерттеу және клетканың сақтау қасиетін қамтамасыз етеді. Бұдан неғұрлым біртекті популяция пада болады, сонымен қатар специфирленген клеткалар жоғалады. Бірнеше егуден кейін клеткалар линиялары өледі неме транформацияланады және тұрақты клеткалар линияларына айналады. Өлмейтін қасиетке ісіктен алынған клеткалар ие. Тұрақты клеткалар линиялар морфологиялық өзгерістерімен, сарысуға тәуелділігінің төмендеуімен, эффектісінің жоғарлауымен субстратқа тәуелділігінің төмендеуімен гетероплоидтылықтың жоғарлауымен анеуплоидтықпен және ісіктектіліктің көбеюімен констатирленеді.
15. Тұрақты культураларға анықтама беріңіз
Тұрақты культуралар алынған жасуша сызықтарында 2 жол бар: бірнеше қайта егуден кейін 1 жасуша сызығы. немесе өледі (жасушалардың шектеулі сызығы), 2. немесе ол өзгеріп, тұрақты жасуша сызығына айналады. Қазіргі уақытта жануарлардың 40 - тан астам түрінен алынған 500-ге жуық тұрақты жасуша сызықтары бар. тұрақты жасуша сызығының пайда болуы морфологиялық өзгерістермен (жасуша мөлшерінің азаюы, олардың адгезиясының төмендеуі, дөңгелектеу, ядролық - цитоплазмалық арақатынастың жоғарылауы), өсу қарқынының жоғарылауымен (жасушаның екі есе өсу уақыты 36-48 орнына 1,5-4 есе-12 сағ төмендейді), Сарысуға тәуелділіктің төмендеуі және қарапайым ортада ұстап тұру мүмкіндігі, субстратқа тәуелділіктің төмендеуі, демек, олардың суспензиядағы өсу қабілеті; гетероплоидты және анеуплоидты, сондай-ақ ісік туғандығының ұлғаюы бойынша. Алайда, өздігінен тұрақты сызыққа айналатын қалыпты жасушалар қатерлі болмайды (ұқсастықтың кейбір ерекшеліктеріне қарамастан).
Осылайша, тұрақты жасуша сызықтарының белгілі бір артықшылықтары бар: жоғары өсу қарқыны, жоғары тығыздыққа қол жеткізу мүмкіндігі, сондықтан биомассаның жоғары өнімділігі; арзан ортаны пайдалану мүмкіндігі; суспензияның өсу мүмкіндігі. Бірақ кемшіліктер-хромосомалық тұрақсыздықтың жоғарылауы, донордың фенотипінен ауытқу, нақты маркерлердің жоғалуы.
16. Культуралық жүйелердің түрлерін атаңыз
Жануарлардың жасушалық дақылдарының 3 негізгі түрі бар:
- кез-келген органнан алынған және алғашқы қайта егуге дейін бар бастапқы дақылдар;
- диплоидты культуралар, көбінесе эмбриональды тіндерден алынады және 50-ге дейін хромосомалардың диплоидты жиынтығын сақтайды, содан кейін олар өзгереді..- организмнен тыс ондаған жылдар бойы қалыптасқан тұрақты (ауыстырылатын) гетероплоидты дақылдар.
Сонымен қатар, мата дақылдарын бөлуге болады:
- олар пайда болатын жануардың түрі бойынша;
-бастапқы Матаның түрі бойынша;
- алу сәтіндегі тіннің жағдайы бойынша (қалыпты, ісік),
- өсіру әдісі бойынша (монолярлы, суспензиялық, микротасымалдағыштарда және т.б.).
Әрі қарай зерттеу үшін ұлпаны немесе жасуша сызығын таңдаудағы негізгі фактор-бұл жасушаларда зерттелетін процестің табиғаты.Әдетте, эмбриональды тіндерден алынған культуралар тиісті ересек тіндердің дақылдарымен салыстырғанда жақсы өмір сүруімен және белсенді өсуімен сипатталады, бірақ бірқатар практикалық артықшылықтарға қарамастан, бұл жасушалар кейбір жағынан ересек жасушалардан ерекшеленетінін есте ұстаған жөн.Қалыпты тіндер, әдетте, өмір сүру уақыты шектеулі дақылдарды тудырады, ал ісіктерден алынған жасуша культуралары шексіз ұзақ уақыт бойы көбейе алады.
17. Бір қабатты культураларға анықтама беріңіз
Бір қабатты культура - бұл қоректік ортасы бар колбада немесе петри табақшасында жасушалар бір қабатта өсірілетін мәдениет түрі. Бір қабатты мәдениет сонымен қатар жабысатын мәдениет немесе якорьге тәуелді мәдениет деп аталады. Жабысқақ немесе якорьге тәуелді мәдениетке сілтеме жасаудың себебі-бұл жасушаларға өсу кезінде бекіту үшін субстрат қажет. Олар субстраты бар жасуша мәдениетін ұстанады.Қоректік ортада қолданылатын субстраттар қолданар алдында зарядталуы керек. Бұл зарядталған субстраттар жасушаның жасушалық өзара әрекеттесуіне ықпал етеді. Электр ионды разрядтаушы, екі валентті катионды жабындар мен гамма -сәулелендіру - бұл субстраттарды зарядтау үшін қолданылатын көздер. Бір қабатты қоректік ортада, жасушалар егілгеннен кейін, контактілі ингибирлеу деп аталатын процестің көмегімен өсу реттеледі. Байланысты тежеу кезінде жасушаның беткі қабатына бекітілген бір қабатты қалыптастырғаннан кейін олардың қалыпты көбеюін тоқтату үшін жасушаның өсуі тоқтатылады.
18. Суспензия культураларының не екенін түсіндіріңіз.
Сұйық қоректік ортада культивирленген өсімдік жасушларының культураларын әдетте суспензиялы культуралар деп атайды. Бұл термин нақты және қатаң ғылыми емес, себебі мұндай әдіспен өсірілген жасушалар қасиетінің негізгі ерекшеліктерін түсіндіре алмайды.
Параметрлері бойынша толығымен суспензиялы (түптік) культивирлеу талаптарын толығымен қанағаттандыратын жоғары сатыдағы өсімдік жасушаларының салыстырмалы түрде әлі аз культуралары алынды. Бұл негізінен жеке жасушалардан немесе ұсақ агрегаттардан тұратын жасуша культураларын алу қиындықтарымен байланысты.Сондықтан алдымен жасушалық суспензияны алу әдістерін қарастыру, сондай-ақ өсу жасушаларына қолданылатын суспензиялы (түптік) культура деген тұжырымдаманы талқылау орынды болып көрінеді.Әрине, сұйық қоректік ортада жасушалық суспензия өсірудің каллустық жасушаларды беттік әдіспен өсіруге қарағанда бірқатар артықшылықтары бар.Бұл жерде экзогендік факторлармен жасуша популяциясының метаболизмі мен өсуіне әсер ету оңай жаңғыртылмалы болып табылады. Суспензиялық культуралармен биохимиялық және молекулярлы-биологиялық тәжірибелер жүргізу - ферменттердің индукциясын мен олардың жасушалық циклдармен байланысын, белгілі бір гендердің экспрессиясы мен репрессиясын, мутагендерді оқшаулау мен сипаттамаларын зерттеу жүргізуге ыңғайлырақ.
Суспензиялы культураны өсімдік мүшелерінің бөліктерінен алуға болады (картоп түйнектерінің, ақжелкеннің, сәбіздің етті тамырларының қоршаған паренхимасынан алынған диск), бірақ бұл әдіс көп еңбекті және көп уақытты қажет етеді. Бұл жағдайда эксплант жасушалары бастапқы каллус түзуі керек, содан кейін ғана сұйық ортаға отырғызылған және көбейген беттік каллусты жасушалар суспензияда өсетін өсімдіктер линиясына бастау болады. Әдетте жасушалар культурасын алу үшін каллусты ұлпалар культурасы қолданылады. Каллусты ұлпалардың бос сулы культуралары құрылымды қатты каллустарға қарағанда суспензияға ауыстыруға көбірек жарамды. Суспензия алуға ең дұрыс әдіс каллустарды құрамында 2,4-Д бар ортада өсіру, орда кальций иондарының болмауы, трансплантантты суспензиялы культурада өсіруге арналған пектиназамен өңдеу. Жасуша культурасын алу үшін каллус ұлпасының ең өміршең (пролиферацияланатын) бөлігі алынады және оның мөлшері агарда сериялық өсіруге қарағанда қоректік орта көлемінен 15-20 есе көп болуы керек. Бұл жағдайда беттік культивирлеуде қолданылатын құрамды қоректік орта қолданыла алады, бірақ кейбір жағдайларда ауксиндердің мөлшерін арттырады және (немесе) цитокининдердің мөлшерін азайтады. Жасушалар культурасын инициациялауда араластыру және аэрациялау режимі әрі қарай роллерлер мен шайқағыштарда (айналдырып шайқағыш 10-20 айн.мин) жасушалар культурасын сериялы субкультивирлеудегідей.
19. Қоректік орталар дегеніміз не екенін түсіндіріңіз.
Қоректік орта дегеніміз - күрделі және жай құрамдардың әртүрлі қосылыстары болып келетін орталар. Оны лабораториялық жағдайда бактериялар мен басқа микроорганизмдерді көбейтіп өсіру үшін қолданылады.
Қоректік ортаны жануардан немесе өсімдіктен туындаған өнімдерден дайындайды. Қоректік ортада өсу факторының болуы үлкен маңызға ие. Оларды дайындау үшін экономикалық рентабельді тағамдық емес шикізат қолданылады: жарамсыз қалған қан алмастырушылар, жануар қанының гидролизаты, аминопетиферментативті, қан гидролизаты, биотехнология өнімдері - жем ашытқылары, жемдік лизин, жүзім ұнтағы, ақуыз лизин. Синтетикалық орталардың құрамына химиялық таза заттар - аминқышқылдары, минералды тұздар, көмірсулар, витаминдер және өсіру факторлары кіреді. Консистенциясы бойынша қоректік орталар сұйық, жартылай сұйық, тығыз болып келеді.
Құрамы бойынша - табиғи, синтетикалық және жартылай синтетикалық. Тағайындалуы бойынша негізгі, элективті және дифференциалды - диагностикалы болып бөлінеді.
20. Биологиялық нысандарды культивирлеуге арналған субстраттарды сипаттаңыз
Ертеден белгілі микробиологиялық синтездеу үшін қолданылатын көміртегін құрайтын шикізат көмірсулар, демек субстраттар жасушаның құрылысын синтездеуге арналған микроорганизмдерді пайдаланады.
Биотехнологияда қолданылатын субстраттар мен қоректік орталардың құрамы әр түрлі және олардың ортасы үнемі кеңейіп отырады. Өндірістік процестердің дамуымен шығындардың жаңа түрлері залалсызданады және қажет затқа биотехнологиялық әдіспен жинақталады. Бір жағынан биотехнологиялық өндірістік ағымның өте тез дамуы дәстүрлі шикізат түрлерін тұтыну жағдайларымен байланысты, сондықтан ол шикізат базасын кеңейтуді қажет етеді, басқа жағынан жинақталған қалдық көлемінің ұлғаюы дәстүрлі емес өндіріске қайта айналдырылады, сонымен қатар биотехнологиялық тәсілдермен өнделеді.
21. Жасуша культураларымен жұмыс істегенде қолданылатын құрал-жабдықтарды атаңыз
Жасуша дақылдарымен жұмыс кезінде қолданылатын құрал -жабдықтар.
Суды тазартуға арналған қондырғы
Қоректік заттарды дайындау немесе мәдени ыдыстарды жуу үшін қолданылатын судың сапасы маңызды. Соңғы уақытқа дейін мұндай суды ауыз суды қарапайым және екі есе айдау арқылы дайындайтын. Қазіргі кезде дәстүрлі әдістермен қатар кері осмос, ион алмасу және мембраналық фильтрлеудің физико -химиялық процестерін қолдану арқылы суды тазарту әдістері кеңінен қолданылады. Бұл қондырғыларда бастапқы су ретінде пайдаланылатын және кері осмос арқылы өтетін ағынды сулар активтендірілген көмір сүзгілеріне түседі, олардан - ион алмастыратын шайырлары бар тіректерге, содан кейін диаметрі 0,22 мкм болатын мембраналық сүзгілерге. Қажет болса, су қосымша ультракүлгін сәулеленудің күшті ағынына ұшырайды.
Суды тазарту үшін ОВ-1 типті қондырғылар жиі қолданылады, олар тәуелсіз пайдалануға мүмкіндік беретін екі құрылымдық тәуелсіз бөліктен тұрады-ОВ-2 және ОВ-3. ОВ-2 қондырғысы тазартылған судың тазарту сапасынан асатын жалпы зертханалық суды дайындайды.
Ыдыс -аяқтарды зарарсыздандыруға арналған құрылғылар мен құрылғылар
Ыдыс жууға және зарарсыздандыруға арналған қондырғылар мен аппараттар технологиялық процестің барлық кезеңдерін қамтамасыз етеді: эксперименттен келетін бу стерилизаторларындағы қаныққан су буымен ыдыстарды алдын ала зарарсыздандыру (автоклавтар); химиялық реагенттердің сулы ерітінділеріне алдын ала сіңдіру (5% натрий гипохлоритінің ерітіндісі, 3% сутегі асқын тотығы ерітіндісі және т.б.); суық немесе сәл қыздырылған суға малынғаннан кейін шаю; аз көбіктенетін ыстық жуғыш зат ерітіндісімен жуу; ыстық сумен қайталама шаю; тазартылған немесе жалпы зертханалық сумен соңғы шаю; ыстық ауаны үрлеп кептіру шкафтарында кептіру; буып -түю; бу немесе ауа стерилизаторларында соңғы зарарсыздандыру.
Ыдыс жууға арналған ең жақсы нұсқа-автоматты кір жуғыш машиналарды пайдалану (Forma Scientific, Miele, Hotpack-Heinicke немесе P3-AMM сияқты отандық машиналар).
Дозалауға, сұйылтуға және сынама алуға арналған құрылғылар. Жасуша дақылдарымен жұмыс тәжірибесінде биологиялық белсенді сұйықтықтарды жаппай мөлшерлеу, сынама алу немесе сұйылту қажеттілігі үнемі туындайды. Ол үшін әр түрлі көздерде шақырылатын автоматты немесе жартылай автоматты құрылғылар, мөлшерлегіштер, автоматты пипеткалар және т.б.
Мұндай құрылғыларға қойылатын негізгі талаптардың бірі - дозаланған ерітінді мен диспенсер құрылымының бөліктері арасында байланыстың болмауы. Бұл талаптар екі арна арқылы бір мезгілде сұйылту немесе мөлшерлеуді шығаратын жартылай автоматты және автоматты шприц-диспенсерлермен орындалады және олар автоматты және жартылай автоматты режимде жұмыс істей алады.
Дозатрон-4 типті ең көп қолданылатын автоматты шприц-диспенсер сұйықтықтарды иммунологиялық пластиналарға микрокветпен автоматты түрде мөлшерлеуге арналған. Бір реттік дозаның көлемі эксперимент мақсатына байланысты белгіленеді.
ПЛ-01 типті зертханалық пипеткалар, КДП-1 және Р1 типті тамшуырлар дисплейлері биологиялық белсенді сұйықтықтарды жартылай автоматты түрде шығарады, ПЛ-01 зертханалық пипеткалары 3 модельден тұрады. Доза мөлшерін пайдаланушы белгілі бір диапазонда белгілейді (2 20 мкл, 20 200 мкл, 200 1000 мкл). КДП-1 тамшуыр диспенсерлерінің жиынтығына 8 модель кіреді, олардың әрқайсысы көлемінде бекітілген 2 дозаны (5-тен 1000 мкл дейін) жеткізуді қамтамасыз етеді. Р1 диспенсерлер жиынтығына 1 бекітілген дозаға (20 -дан 500 мкл -ге дейін) конфигурацияланған 5 модель кіреді. Бұл құрылғылардың барлық түрлері бумен зарарсыздандыруға және қайта пайдалануға болатын ауыстырылатын кеңестерді қолдануды болжайды.
Жоғарыда сипатталған құрылғылар 40 ° C дейін қыздырылған және тұтқырлығы суға жақын сұйықтықтармен жұмыс жасауға мүмкіндік береді. Бұл оларға тұтқырлығы төмен болу үшін кемінде 60 ° С температураға дейін қыздыру қажет агар негізіндегі қоректік ортаны мөлшерлеуді қамтамасыз етпейді.
Агар-1. Перистальтикалық дозалау сорғысы мен толтыру механизмінен тұратын қоректік ортаны толтыруға арналған бұл құрылғы қамтамасыз етеді арнайы пластиналарда орналасқан диаметрі 100 мм болатын 16 шыны Петри табақшасынан 1 минут ішінде бір мезгілде автоматты түрде толтыру. Аппараттағы стерильді жағдайлар оның ішкі көлемінің ультракүлгін сәулеленуімен сақталады.
Эксперименттерде кіші зертханалық қондырғылар да қолданылады, олар диспенсерлер емес, бірақ бұл процесті жеңілдетуге қабілетті.
Flow, Bellco, Cole-Parmer және басқалар), Пастер тамшуырларымен және сыйымдылығы 75 мл-ге дейінгі кез келген пипеткамен жұмыс кезінде дозаны іріктеуге және таратуға арналған. Пипетка арнайы ұстағышқа салынған тікелей ұстағышта немесе автономды орналасқан шағын көлемді вакуумдық сорғыға қосылған. Құрылғының жұмысы ұстағышта орналасқан түймелерді басу арқылы басқарылады.
22. Қоректік орталарды дайындау үшін қолданылатын құрылғыларды сипаттаңыз
Жасушалық дақылдарға арналған сұйық қоректік орталарға қойылатын негізгі талаптардың бірі олардың стерильділігі болып табылады, кейбір жағдайларда қоспалық бөлшектерден, бактериялар мен коллоидтардан қоректік ортаны бөліп шығаратын стерильдеу деп аталатын сүзу арқылы қол жеткізіледі.
Қоректік ортаның микро және ультра сүзгілеуін ажырату қажет.Сұйықтықтан бастапқы сүзу 0,25-тен 10 микронға дейінгі қоспалар мен бактериялардың бөлшектерін жояды. Ультрафильтрация өте ұсақ бөлшектер мен коллоидтардың ерітіндісін, сондай -ақ молекулалық массасы 1000 -нан 1 млн. Дейін еріген заттардың молекулаларын алуға әкеледі.
Микрофильтрация процесі сұйықтықты мембрана немесе тереңдік сүзгілері арқылы өткізу арқылы жүзеге асады. Мақта жүнінен, шыны талшықтан, фарфордан және басқа материалдардан жасалған терең сүзгілерге тән бірқатар кемшіліктер (мысалы, сүзгі массасында микроорганизмдердің көбею мүмкіндігі, сүзілген сұйықтықтардың едәуір мөлшерін сіңіру) қолдануды жөн көреді. Мембраналық сүзгілер әр түрлі полимерлерден жасалған, соның ішінде зарарсыздандыруға мүмкіндік беретін (фторопластикалық, поливинилденді дифторид, целлюлоза эфирлері) және химиялық төзімділікті қамтамасыз ететін қоректік ортаны тазартуға арналған мембраналық сүзгілер. қоректік ортаның компоненттері. Қоректік заттарды фильтрлеу үшін әдетте диаметрі 0,2 - 0,22 мкм мембраналық сүзгілер қолданылады.
Миллипоре, Сарториус, Шлейхер-Шулл және басқалар шығаратын сүзгілер.
Тұтастай алғанда, фильтрлеуді зарарсыздандыруға арналған қондырғы сүзілген сұйықтыққа артық қысым жасау жүйесінен, стерильді фильтр ұстағыштан, сүзгі мембранасынан, құбырлар мен сүзілетін сұйықтық пен фильтратты орналастыруға арналған ыдыстардан тұрады.
Сұйықтықтың сүзгі арқылы қозғалысын қамтамасыз ету үшін оған сырттан белгілі бір қысымды қолдану қажет.Осындай қысымды орталықтан тепкіш күштер, агрегаттың шығысындағы вакууммен жасауға болады, бірақ көбінесе осы мақсат үшін жеткізу инертті газ (мысалы, азот) тазартылатын ортасы бар ыдысқа белгілі бір қысыммен қолданылады. Артық қысымның шамасы тері тесігі мен мембрананың ауданына байланысты.
23. Жасушаны культивирлеу бөлмелеріне сипаттама беріңіз
Қоректік ортаны зарарсыздандыру, жасушалық культуралармен жұмыс кезіндегі барлық басқа манипуляциялар сияқты, қорап бөлмелерінде немесе ламинарлы қораптарда жүргізіледі.
Бокс бөлмесі-бұл жуылатын шаң сіңіретін жабындылары бар оқшауланған бөлме, ол алдын ала қорапшасы бар және қажетті жалпы және арнайы жарықтандырумен, қоректендіру мен шығатын желдету жүйелерімен, суық және ыстық сумен, сондай-ақ газбен және сығылған ауамен қамтамасыз етілген. жабдықтар.
Ламинарлы қораптар немесе стерильді жұмыс орындары жабдықты аз қажет ететін қорап бөлмелеріне балама болып табылады. Бұл жағдайда кез келген бөлмеде жергілікті стерильді көлемді жасауға болады, ол жұмыс үшін қажет және пайдаланушыларға биологиялық қорғаныс жасайды. Техникалық тұрғыда мәселе ламинарлы ағынмен жұмыс алаңын үздіксіз үрлеу арқылы шешіледі. Патогенді емес екендігі белгілі материалдармен жұмыс істеу кезінде жұмыс аймағынан шаңсыз ауа ағыны тікелей қоршаған кеңістікке түседі. Потенциалды патогенді материалмен жұмыс кезінде ауа жұмыс аймағынан шықпас бұрын қосымша сүзіледі, операторды үрлеу мүмкіндігі жоққа шығарылады. Ламинарлы-қорапты құрылғыға байланысты жұмыс аймағындағы шаңсыз ауа ағыны көлденең, тік, көлбеу болуы мүмкін.
Шаңсыз ауаның көлденең ағыны бар ламинарлы қорап, paUOBG түрі (көлденеңінен биологиялық шаңсыз қондырғы) ағын) жұмыс аймағына жеткізілетін ауаны құрылғыға салынған ірі және жұқа сүзгілерде сүзу арқылы тазартуды қамтамасыз етеді (ол ластанған сайын, ірі сүзгі жуылады, жұқа сүзгі ауыстырылады). Құрылғыда жарықтандырудың кіріктірілген көздері, ультракүлгін сәулелену (қорапты пайдалану арасындағы үзіліс кезінде жұмыс аймағын зарарсыздандыру үшін) және ауа ағыны реттегіші бар.
UOBV және UOBN типті шаңсыз ауаның тік және көлбеу ағындары бар ламинарлы қораптарды ұйымдастыру жоғарыда сипатталған көлденең ағыны бар ламинарлы қорапты ұйымдастыруға ұқсас.
BP-4004 (Box-R) потенциалды патогенді культурамен жұмыс жасауға арналған ламинарлы қораптың кейбір айырмашылықтары бар. Құрылғы ауа ағынының рециркуляциясын қамтамасыз етеді, ол жұмыс көлеміндегі ауа арнайы жұқа сүзгіге енеді, оның бір бөлігі қоршаған кеңістікке шығады, ал қалған ағын жұқа сүзгіден өтеді. және қайтадан жұмыс көлеміне енеді. Бұл өңделген материалды бөлмеге кіргізудің мүмкін еместігіне қол жеткізеді. Шығатын ауаның операторға ену мүмкіндігі қораптың жұмыс көлемінің ашық жағында сору аймағын құру арқылы алдын алады. Құрылғыда жарық пен ультракүлгін сәулеленудің кіріктірілген көздері, баспайтын болаттан жасалған үстел үстелі бар. Жұмыс көлемінің алдыңғы бөлігі мөлдір әйнекпен жабылған, оны биіктік бойынша жылжытуға болады. Қорап ауа ағынын реттейтін жүйемен және жұқа сүзгінің ластану көрсеткіштерімен жабдықталған.
Жоғарыда аталған ламинарлы қораптардың түрлері ауаны алдын ала тазартумен жабдықталған желдеткіші бар кез келген өндірістік үй-жайға орналастыруға арналған.
24. Культуралық зертханалар жабдықтарының түрлерін сипаттаңыз
Культура зертханаларына арналған жабдықтар.
Зертханалық термостаттар. СО2 инкубаторлары.Жасушаны өсіруге арналған зертханалық термостаттар бірқатар арнайы талаптарға сай болуы керек: 1) берілген температураны ұстап тұрудың жоғары тұрақтылығын қамтамасыз ету; 2) пайдалы көлемнің ең төменгі температуралық градиентін құру; 3) пайдалы көлемнің қысқа мерзімді ашылуынан кейін температураны тез қалпына келтіру жүйесі болуы; 4) ішкі көлем биологиялық пассивті материалдардан, яғни жасушалардың өмірлік белсенділігіне әсер етпейтін және қоректік орта компоненттерінің әсеріне төзімді материалдардан жасалуы керек.
Термостат алкогольдің сулы ерітінділерімен залалсыздандыруға және ультракүлгін сәулелену арқылы түзетуге және зарарсыздандыруға қабілетті болуы керек.
Дизайн бойынша зертханалық термостаттар сұйық және ауа болып бөлінеді. Сұйық термостаттарда пайдалы көлем тазартылған сумен толтырылған ыдыспен қоршалған, ол іс жүзінде қызады. Ауа термостаттары электрлік қыздыру элементтерімен тікелей байланыста пайдалы көлемге ие. Сұйық термостаттар камерадағы температура градиентінің шағын мәндерін қамтамасыз етеді, бірақ өте үлкен термиялық инерцияға ие, демек, жұмыс режиміне кіру үшін ұзақ уақыт. Бұрын бірқатар негізгі параметрлері бойынша сұйық термостаттардан төмен болатын ауа термостаттарының жетілдірілген түрлері қазір сериялық шығарылатын модельдердің едәуір бөлігін құрайды.
25. СО2 инкубаторының құрылғысын сипаттаңыз
СО2 инкубаторлары
Қоректік ортада рН тұрақты мәнін ұстап тұру қажеттілігі және жасушалардың инкубациясы кезінде оның минималды булануы жоғарыда сипатталған термостаттарға ұқсас арнайы құрылғылардың дамуына әкелді.Басты айырмашылығы-белгілі бір жүйені құру мен қолдау жүйелерінің болуы. газды ортаның пайдалы көлемдегі құрамы және ондағы салыстырмалы ылғалдылығы жоғары. Бұл Heraues, Hotpack шығаратын ұялы көміртекті инкубаторлар.
Ағын. СО2 инкубаторының камераларындағы газды ортада оттегі мен көмірқышқыл газының концентрациясы жоғарылайды, ал көп жағдайда тек көмірқышқыл газы. Шоғырлану мәні өсіру жағдайына сәйкес орнатылады және автоматты түрде сақталады. СО2 автоматты инкубаторларында газды ортаның берілген құрамы құрылғының ішкі көлеміне берілетін шаңсыз сыртқы ауа ағынына қажетті газдың мөлшерленген берілуімен сақталады. Инкубаторлардың тағы бір түрі-бұл GPI-1 типті газ ағыны деп аталатын инкубаторлар, онда қажетті газдарды беру үздіксіз жүзеге асады, ал нақты пайызға ағынның жылдамдығын өзгерту арқылы қол жеткізіледі.
26. Аэратордың мәнін сипаттаңыз
Аэраторлар
Қоректік ортаның аэрациясын қамтамасыз ету үшін - оттегімен қамтамасыз ету air ауаны, сондай -ақ оттегімен байытылған ауаны жиі пайдаланыңыз - таза оттегі. Газ тәрізді субстраттарға және қажеттілікке байланысты оттегіне қол жеткізе алмайтын процестер (анаэробты) қалдықтар. Аэраторлар газбен жабдықтау мен шығару жүйелерінің жұмысының жарқын мысалы болып табылады.
27. Зертханалық ферментатордың мәнін сипаттаңыз
Зертханалық ферментерлер
Бұл жасушалық және бактериялық дақылдарды жаппай суспензиялауға немесе су астына өсіруге арналған құрылғылар мен аппараттар кешені. Зертханалық тәжірибеде ферментерлер зерттеу жұмыстарын жүргізу үшін немесе жаппай өсіру технологиясын жасау үшін қолданылады (пилоттық биореакторлар).
Жалпы жағдайда ферментератор өсіру ыдысынан, сорғылар мен қосылатын құбырлардан (қоректік ортаны, газдарды, егу мен өнімді таңдауға арналған), ыдыстағы ортаның температурасын, оның рН -ын бақылайтын өлшеу құралдары мен реттегіштерден тұрады. тотықсыздану потенциалы және басқа параметрлер.
Зертханалық тәжірибеде 1 -ден 20 литрге дейінгі жеті ыдысы бар ферментерлер, өңдеу технологиялары үшін - 30 -дан 400 литрге дейін жиі қолданылады. Барлық жағдайларда ыдыс көлемінің 75% -дан аспайтын қоректік ортаға толтырылады.
Ашытқыштардың қоректік ортаға тиетін бөліктері (ыдыстар, байланыстырушы құбырлар, сорғылар және т.б.) биологиялық пассивті, қаныққан су буымен зарарсыздандыруға мүмкіндік беретін химиялық төзімді материалдардан жасалған (жоғары сапалы баспайтын болат, фторопласт, боросиликат шыны, силикон резеңке) ).
Ашытқыш ыдыстар цилиндрлік (резеконикалық) пішінге ие. Оларда температура, рН, оттегіге арналған датчиктер, сондай -ақ қоректік орта арқылы газдарды көпіршіктендіру арқылы (газды түбінен көпіршігі арқылы беру) немесе газды тазартуды механикалық араластырумен біріктіру арқылы алынатын қоректік ортаны аэрациялау жүйесі бар. қоректік ортаның ластануы. Механикалық және пневматикалық араластырудан басқа, сорғылардың көмегімен жабық тізбектегі бағытталған сұйықтық ағынымен циркуляциялық (гидродинамикалық) араластыру жүйелері де қолданылады.
Араластырылған және газдалған культуралардың көпшілігі өсу кезінде көбіктің жеткілікті мөлшерін құрайды.Өсіру ортасының бетінде көпіршіктер қабатының пайда болуы ортада беттік активті заттардың болуымен байланысты, олардың құрамына майлардың ыдырау өнімдері кіреді - сабындар, ақуыздар сияқты. Беттік активті заттарға полярлық иондық және полярлық емес топтар жатады. Зарядталған топтардың сулы фазаға жақындығы ... жалғасы
Сіз бұл жұмысты біздің қосымшамыз арқылы толығымен тегін көре аласыз.
Ұқсас жұмыстар
Пәндер
- Іс жүргізу
- Автоматтандыру, Техника
- Алғашқы әскери дайындық
- Астрономия
- Ауыл шаруашылығы
- Банк ісі
- Бизнесті бағалау
- Биология
- Бухгалтерлік іс
- Валеология
- Ветеринария
- География
- Геология, Геофизика, Геодезия
- Дін
- Ет, сүт, шарап өнімдері
- Жалпы тарих
- Жер кадастрі, Жылжымайтын мүлік
- Журналистика
- Информатика
- Кеден ісі
- Маркетинг
- Математика, Геометрия
- Медицина
- Мемлекеттік басқару
- Менеджмент
- Мұнай, Газ
- Мұрағат ісі
- Мәдениеттану
- ОБЖ (Основы безопасности жизнедеятельности)
- Педагогика
- Полиграфия
- Психология
- Салық
- Саясаттану
- Сақтандыру
- Сертификаттау, стандарттау
- Социология, Демография
- Спорт
- Статистика
- Тілтану, Филология
- Тарихи тұлғалар
- Тау-кен ісі
- Транспорт
- Туризм
- Физика
- Философия
- Халықаралық қатынастар
- Химия
- Экология, Қоршаған ортаны қорғау
- Экономика
- Экономикалық география
- Электротехника
- Қазақстан тарихы
- Қаржы
- Құрылыс
- Құқық, Криминалистика
- Әдебиет
- Өнер, музыка
- Өнеркәсіп, Өндіріс
Қазақ тілінде жазылған рефераттар, курстық жұмыстар, дипломдық жұмыстар бойынша біздің қор #1 болып табылады.
Ақпарат
Қосымша
Email: info@stud.kz