Жасыл микробалдыр CHLAMYDOMONAS REINHARDTII-дің пигментті мутанттық штаммдарын алу

Пән: Өнеркәсіп, Өндіріс
Жұмыс түрі: Материал
Тегін: Антиплагиат
Көлемі: 2 бет
Таңдаулыға:

Chlamydomonas reinhardtii - бұл қозғалмалы бір жасушалы жасыл балдыр, хламидомонада ( Chlamydomonas ) туысының өкілі. Бұл балдырлар топырақ пен тұщы суда кең таралған. Жасушаның диаметрі 10 мкм шамасында, жіңішкерген алдыңғы ұшында орналасқан екі бірдей (тең) талшық көмегімен жүзеді.

Микробалдырды дақылдау автотрофты және гетеротрофты жағдайларда 25-28 ⁰ С температурада жүзеге асырылады.

Мутация индукторы ретінде УК- сәуле қолданылды. УК-сәулелер клеткаларға, әсіресе микроорганизмдердің клеткаларына, жеңіл енеді де, ДНҚ-ның әмбебап бөліктерін зақымдап, әртүрлі мутациялық өзгерістерді тудырады. Осыған байланысты УК-сәулелендіру индуцирленген мутагенезді зерттеу бойынша жүргізілетін тәжірибелерде қолданылады.

Кез келген мутацияларды алу үшін мутаген дозасын таңдау керек екендігі белгілі, бұл дозада мутанттардың шығым пайызы жоғары болуы және салыстырмалы жоғары дәрежеде тіршілігін сақтап қалуы тиіс. Бұл өз кезегінде қолданылатын мутагеннің әртүрлі дозаларының летальділік және мутагендік әсерін зерттеуді талап етеді. Қоюлығы 10 ⁶ шамасында клеткалардың суспензиясын 4 мл мөлшерінде Петри табақшаларында 1, 3, 5, 7, 10 минут бойы сәулелендірдік.

Chlamydomonas reinhardtii СС-137 табиғи штамы клеткаларының тіршілігін сақтауына УК-сәуленің әсері зерттелді. Сәйкес дозада сәулелендіруден кейін тірі қалған клеткалардан қалыптасқан макроколониялар санының бірдей сұйылтудағы сәулелендірілмеген суспензия егулеріне пайыздық қатынасы бойынша тіршілігін сақтауы есептелді.

Экспериментальді мәліметтер УК-сәулесі жасушалардың тіршілік сақтауына күшті токсикалық әсер ететіндігін көрсетті

Сонымен, 1 мин сәулелендіруден тірі қалған клеткалардың үлесі 31%-ды құрады. Жасушалар орташа мөлшерлі және жасыл түсті болды, олар бақылау тобынан аз ерекшеленді.

2 мин бойы сәулелендіруден кейін тірі қалған клеткалардың үлесі біршама азайды, сонымен қатар колониялардың мөлшері мен түсі бойынша біртекті емес (ірі, орташа және өте ұсақ, жасыл, ашық жасыл және қою жасыл түсті) екендігі байқалады - 10, 5%.

3 минуттық сәулелендіруден кейін өсіп шыққан клеткалардың жалпы саны 4, 5%-ды құрады.

5 минут бойы сәулелендіруден кейін микробалдырлар клеткаларының өсуі байқалмады.

Сәулелендіру дозасы жоғарылаған сайын тіршілік сақталуының төмендеуі бойынша УК-сәуленің күшті зақымдаушы әсері жайында айтуға болады. Алынған экспериментальды мәліметтерден УК-сәулесі хламидомонада клеткаларына летальды әсер ететіні көрінеді. Тіршілігін сақтау қисығы сигмоидты сипатқа ие

Зерттеулер барысында Chlamydomonas reinhardtii СС-137 штамын УК сәулемен 1-5 минут бойы сәулелендіру клеткалардың тіршілік сақтауының төмендеуіне әкелетіні және морфологиялық мутациялардың оптимальды пайда болуына мүмкіндік жасайтыны анықталды.

Сәулелендіру дозасының жоғарылауымен бұзылу көріністері дәрежесінің көбеюі ғана емес, сонымен қатар олардың уақыттағы динамикасының тұрақтануы, яғни сапалық өзгерісі жүрді.

Мутанттарды анықтау бірден сәулелендіруден кейін емес, жасушалардың бір тәуліктік қараңғылық репарациясынан кейін жүргізілді, себебі бұл жағдайда ДНҚ репликациясындағы қателіктер нәтижесінде түрлі мутациялар жиілігі жоғарылайды.

Мутациялық үдеріс макроколониялар әдісімен көрінетін мутанттар бойынша зерттелді.

УК сәулелер көмегімен колониялардың бояуы мен мөлшерлерінің өзгеруімен сипатталатын морфологиялық мутанттар алынды.

Дақылдаудың әр түрлі жағдайларында генотипін тексерусіз, массалық сұрыптау нәтижесінде колониялардың бояуы мен мөлшерлерінің өзгеруімен сипатталатын колониялар алынды. Алынған колонияларды біз 6 топқа бөлдік.

В фотоавтотрофных условиях культивирования:

Фототрофты жағдайда культивирлеу:

топ - ірі көйлемді, жасыл түсті субклондар (А) - 18%;
топ - микроскоптық көйлемді, жасыл түсті субклондар (В) - 32%;
топ - орташа көйлемді ашық-жасыл түсті субклондар(С) - 33%;
топ - орташа көйлемді, сары түсті субклондар (D) -17%.

Бақылау тобының колониялары жасыл түсті, орташа көйлемді көрсетті.

Гетеретрофты жағдайда культивирлеу:

топ - орташа көйлемді, ашық-жасыл түсті субклондар (E) - 68%;
топ - орташа көйлемді, сары түсті субклондар(F) - 32%.

Бақылау тобының колониялары жасыл түсті, орташа көйлемді көрсетті.

Түрлі мутантты колониялар шығымының анализі фотоавтотрофты жағдайларда ең көп пайызды ашық жасыл түсті, орташа мөлшерлі колониялар 32%-ға дейін құрағанын көрсетті. Гетеротрофты жағдайларда мутантты колониялардың жалпы санынан 68%-ын құраған ашық жасыл түсті, майда мөлшерлі колониялар басым болды. Мутациялардың максимальды жиілігі УК сәулемен 2 минут бойы әсер еткеннен кейін белгіленетіні анықталды.

Ғылыми жетекшісі: б. ғ. к., аға оқытушы Садвакасова А. К.

... жалғасы

Сіз бұл жұмысты біздің қосымшамыз арқылы толығымен тегін көре аласыз.