Олигодезоксирибонуклеотидтерді химиялық синтездеу әдістері

ДНҚ – ны химиялық синтездейтін автоматты құралдардың (ДНҚ – синтезатор) пайда болуымен ұзындығы ≤50 нуклеотидтік бір тізбекті олигонуклеотидтерді алу жеңілдеу түсті. Кез – келген ДНҚ – синтезатордың негізгі компоненті клапандар мен насостар жүйесі. Олардың көмегімен қатаң белгіленген программамен реакциялық қоспаға өсіп жатқан тізбекке қажетті мономерлі қалдықтардың қосылуын қамтамасыз ететін нуклеотидтер мен реагенттерді енгізеді. ДНҚ – ның химиялық синтездің биологиялық синтезге қарағанда ерекшелігі тізбектің 5' – гидроксильді соңына кез келген жаңа нуклеотидті қосуға болады. Барық реакциялар бір реакциялық колонкада жүреді, ал олардың әр қайсысының жүру ұзақтығы мен жуу уақыты компъютер көмегімен бақыланады.
Фосфорамидті әдіс
Ондағы алғашқы құрылыс блоктары модифицирленген дезоксирибонуклеозидтер болып табылады. Модификация дезоксиаденозин мен дезоксицитидиннің аминотоптарына бензолды топтардың, ал дезоксигуанозиннің аминотоптарына – изобутирильдің қосылуынан тұрады. Аминотобы жоқ тимидин модификацияланбайды. Мұндай модификация тізбектің өсуі кезінде нуклеозидтерді қажетсіз кері реакциялардан қорау үшін қажет. Синтез қатты фазада (ДНҚ өсіп жатқан тізбегі қатты тасымалдағышқа бекінеді) жүреді. Ол барлық реакцияларды бір емкоста өтуді, әр сатысынан кейін қажетсіз реагенттерді жуып тастауға және реакцияның толық жүруін қамтамасыз ететін жаға реагенттерді қосуға мүмкіндік береді.
Көпсатылы синтездің этаптары суретте көрсетілген. Бірінші нуклеозид (азоты негіз + қант) инертті қатты тасымалдағышқа бекінеді. Қатты тасымалдығыш ретінде әдетте саңылауларының мөлшері бірдей кеуекті әйнек шарлар пайдаланылады. Синтезделетін тізбектің 3'–соңындағы нуклеозиді боатын бірінші нуклеозидтің 3'–гидроксильді тобы тасымалдаушымен ковалентті байланысқан спейсерлі молекулаға бекітіледі. Бірінші нуклеотидтің 5'–гидроксильді тобының реакциялық қоспаға екінші нуклеотидті қоспас бұрын спецификалық емес әсерлесуін алдын алу үшін, оларды диметокситритильді (ДМТ) топтың көмегімен қорғап тұрады. Мұндай топ өсіп жатқан тізбекке байланысатын әр нуклеотидте болады, сонымен қатар онда диизопопиламинді тобы бар. Ол өз кезегінде метильдің қалдығымен қорғалған 3'–фосфидті тобына байланысқан. Мұндай молекулярлы конфигурация фосфорамидті деп аталады.
        
        әл – Фараби атындағы Қазақ ұлттық университеті Биология факультеті
Биотехнология мамандығы
Тақырыбы: Олигодезоксирибонуклеотидтерді химиялық синтездеу ... ... ... ... С. ... І курс ... Байқара Баршагүл
Алматы, 2009
ДНҚ – ны химиялық ... ... ... (ДНҚ ... пайда болуымен ұзындығы ≤50 нуклеотидтік бір тізбекті
олигонуклеотидтерді алу ... ... Кез – ... ДНҚ – ... ... клапандар мен насостар жүйесі. Олардың көмегімен қатаң
белгіленген программамен реакциялық қоспаға өсіп жатқан тізбекке ... ... ... ... ... нуклеотидтер мен
реагенттерді енгізеді. ДНҚ – ның химиялық синтездің биологиялық синтезге
қарағанда ерекшелігі ... 5' – ... ... кез ... ... қосуға болады. Барық реакциялар бір реакциялық колонкада
жүреді, ал ... әр ... жүру ... мен жуу ... ... ... әдіс
Ондағы алғашқы құрылыс ... ... ... ... ... дезоксиаденозин мен
дезоксицитидиннің аминотоптарына бензолды топтардың, ал дезоксигуанозиннің
аминотоптарына – изобутирильдің қосылуынан ... ... жоқ ... Мұндай модификация тізбектің өсуі ... ... кері ... ... үшін қажет. Синтез қатты
фазада (ДНҚ өсіп ... ... ... ... ... ... ... реакцияларды бір емкоста өтуді, әр ... ... ... жуып ... және ... ... ... қамтамасыз ететін
жаға реагенттерді қосуға мүмкіндік береді.
Көпсатылы синтездің этаптары суретте көрсетілген. Бірінші нуклеозид
(азоты негіз + ... ... ... ... ... Қатты
тасымалдығыш ретінде әдетте саңылауларының мөлшері бірдей кеуекті әйнек
шарлар ... ... ... ... ... бірінші нуклеозидтің 3'–гидроксильді тобы тасымалдаушымен ковалентті
байланысқан спейсерлі молекулаға ... ... ... ... реакциялық қоспаға екінші нуклеотидті қоспас бұрын
спецификалық емес әсерлесуін алдын алу ... ... ... ... ... ... тұрады. Мұндай топ өсіп жатқан ... әр ... ... ... ... онда ... бар. Ол өз ... метильдің қалдығымен қорғалған 3'–фосфидті тобына
байланысқан. Мұндай молекулярлы конфигурация фосфорамидті деп ... ... ... ... ... ... басталады. Кейін
су мен басқа нуклеофильді заттарды бөліп таста үшін коллонканы ... ... ... ... ... ацетонитрил) жуылады және ацетонитрильді
коллонка ... үшін ол ... ... ... Содан соң үшхлорсірке
қышқылының көмегімен 5'–гидроксильді тобының реакцияға қабілеттілігін ... ... ... байланысқан 5'–ДМТ (детритилдену) бөліп
алады. Үшхлорсірке қышқылын бөліп тастау үшін ... ... ... ... ... үшін аргонмен үрлейді. Процесс
екінші сатыда коллонкаға бір уақытта келесі нуклеозид ... ... ... ... мен қосылуы) енгізетіндей етіп программаланған.
Тетразол 3'–фосфидті топтың ... ... ... ... ... ... ... активтендіреді. Байланыспаған
фосфорамидит пен тетразолды аргонмен үрлеу ... ... ... саты ... ... ... ... нуклеозидтер
толығымен фосфорамидпен байланыспайтындықтан, олардың екінші ... ... ... ... ету ... Ол үшін
реакцияға түспеген 5'–гидроксильді топты сірке ... ... ... ... ... Егер мұны ... бірнеше циклден кейін синтезделіп жатқан ... ... ... ... ... бойынша әр түрлі болады.
Екінші сатыда нуклеотидтер арасында түзілген фосфиттриэфирлі байланыс
тұрақсыз және сілті немесе қышқылды ... тез ... ... ... да ... йод ... ... тұрақты бесвалентті
фосфитэфирге дейін тотықтырады. Содан кейін коллонканы жуады да , ... ... ... мен ... кэптеу,
тотықтыру). Барлық айтылған ... өсіп ... ... программа
бойынша соңғы нуклеозид келіп байланысқанша жүргізіледі. Синтезделген
олигонуклеозид әйнек шарикпен байланысқан; әр ... ... ... әр ... цитозин және адениннің аминотобы, ал соңғы нуклеотидтің
5'–соңында ДМТ – топ ... топ ... ... ... өңдеу көмегімен бөлініп
тасталынады. Содан кейін, олигонуклеотидті 3'–гидроксильді соңын ... ... ... да, ... ... элюирлейді; кейін ретімен
бензоильді, изобутирильді және ДМТ – ... ... алып ... 5'–соңын ферментативті (полинуклеотидкиназа Т4+ATP) ... ... ... Бұл ... ... тасымалдаушымен
байланысқан, бірақ детритильденгеннен кейін өткізу керек.
Өнімнің шығымы жоғары болу үшін, ... ... ... ... ... ... Эффективтілігін бөліп
тасталынатын тритильді топтардың мөлшерін анықтай отырып, спектрофотометр
көмегімен ... ... ... 20-мүшелі олигонуклеотидтің синтезі
кезінде әр циклдің эффективтілігі 99% ие болады, онда ... ... ... ... осындай болады. Егер 60-мүшелі
олигонуклеотид ... ... онда ... ... ... лоигонуклеотидтердің тек 55% 60 нуклеотидтен тұрады.
Химиялық әдіспен синтезделген олигонуклеотидтерді ... ... ... Оларды ДНҚ – гибридизациясы кезінде зонд
ретінде, клондау тәжірибелерінде ДНҚ – ның әр ... ... ... ДНҚ – ны ... ... праймер ретінде
немесе клонданған ген – ... сайт – ... ... ... ... ... N циклдан кейін n+1 нуклеотидті
фрагментінен тұратын бір тізбекті ДНҚ түзіледі.

Пән: Химия
Жұмыс түрі: Материал
Көлемі: 3 бет
Бұл жұмыстың бағасы: 300 теңге









Ұқсас жұмыстар
Тақырыб Бет саны
Автоматты басқару теориясы31 бет
Бейорганикалық заттардың химиялық технологиясындағы катализаторлар7 бет
Тағамдық бояғыштар7 бет
Түсті металдарды және темірді өндірістік айнымалы токпен поляризациялау арқылы олардың бейорганикалық қосылыстарын синтездеу109 бет
Химияда катализаторлардың ролі16 бет
Цитология15 бет
Цитология негіздері4 бет
Ірі қара, ұсақ малдардың бауырын тексеру7 бет
Ірі қара,ұсақ малдардың бауырын тексеру3 бет
Ірі қара,ұсақ малдардың бауырын тексеру жайлы4 бет


+ тегін презентациялар
Пәндер
Көмек / Помощь
Арайлым
Біз міндетті түрде жауап береміз!
Мы обязательно ответим!
Жіберу / Отправить


Зарабатывайте вместе с нами

Рахмет!
Хабарлама жіберілді. / Сообщение отправлено.

Сіз үшін аптасына 5 күн жұмыс істейміз.
Жұмыс уақыты 09:00 - 18:00

Мы работаем для Вас 5 дней в неделю.
Время работы 09:00 - 18:00

Email: info@stud.kz

Phone: 777 614 50 20
Жабу / Закрыть

Көмек / Помощь