Көмірсутек тотықтыратын микроорганиздер
МАЗМҰНЫ
Кіріспе 4
1. Әдебиетке шолу 5
1.1 Көмірсутек тотықтыратын микроорганиздер 5
1.2 Мұнай және мұнай өнімдері көмірсутектерінің биодеструкциясы 12
2. МАТЕРИАЛДАР ЖӘНЕ ЗЕРТТЕУ ӘДІСТЕРІ 19
2.1 Зерттеу материалдар 19
2.2 Қоректік орталар 19
2.3 Зерттеу әдістері 21
3. НӘТИЖЕЛЕР МЕН ТАЛДАУЛАР 24
ҚОРЫТЫНДЫ 28
ҚОЛДАНЫЛҒАН ӘДЕБИЕТТЕР ТІЗІМІ 29
Түйіні 33
РЕФЕРАТ
Бітіру жұмысы 29 беттен, 4 кестеден және 34 аталған әдебиеттер тізімін
қосқанда тұрады.
Кілт сөздер: топырақ, микрофлора, мұнай, мұнай өнімдері, бактериялар,
көмірсутек тотықтыратын микроорганиздер, морфология, идентификациялау,
псевдомонадала.
Жұмыстың зерттеу мақсаты мұнаймен ластанған әртүрлі субстраттардан
бөлініп алынған активті микроорганизмдерді іріктеу, зерттеу және
идентификациялау болып табылады.
Бұл жұмыста Жетібай кен орынын ластанған топырақтан бөлініп алынған
микроорганизмдердің морфологиялық-дақылдық физиология-биохимиялық
қасиеттерің зерттеді. Алынған нәтижелерге байланысты бөлініп алынған
микроорганизмдердің индентификациясы жүргізілді.
Осылайша морфологиялық культуралдық және физиологиялық-биохимиялық
белгілерді зерттеуде алынған мұнай диструкторлар бактериялар Pseudomonas
sp. туысына жатқызылады.
Кіріспе
Мұнай мен газ өндірудегі жұмыстардың дамуы экономикалық пайдалылығымен
қатар, қоректік ортаға жағымсыз әсер ететін бірқатар зардаптарға әкеледі.
Апаттық төгінділер кезінде топырақ пен судың жалпы массалық ластануы жүреді
де, мұнай тірі организмдерге улы әсер етеді. Сондықтан табиғаттың мұнай
және мұнай өңдеу өнімдерімен ластануы қоректік ортаның қиын және көп
жоспарлы мәселелерінің бірі болып табылады.
Жылына мұнай және мұнай өнімдерін қолдану және тасымалдау кезінде
шамамен 50 млн. т. жоғалады 1. Ластану себептері бұрғылау, шығару,
тасымалдау және өңдеу кездеріндегі технологиялық процесстердің бұзылуы
болуы мүмкін. Қазақстан үшін мұнай және мұнай өнімдері табиғи ортаның кең
тараған ластаушылары болып табылады, сонымен бірге мұнай шығаруға,
тасымалдауға және өңдеуге байланысты қоршаған ортаға экологиялық зардабы
өсе түседі.
Мұнаймен ластанған экожүйенің қайта қалпына келу процесі ұзақ уақыт
жүреді және бұзылған территорияның рекультивациясының жаңа технологияларын
құру мен енгізу мәселелерін тудырады. Осындай жұмыстардың тиімділігінің
негізгі белгісі аз экономикалық шығынмен ластаудың компоненттерінің ыдырау
жылдамдығы. Негізгі өңдеулер мұнайлы ластануды жоюдың физикалық,
механикалық және биохимиялық әдістерін қолдануға негізделеді.
Топырақты әртүрлі күйдегі, құрамдағы мұнай өнімдерінен тазалаудың
перспективті әдісіжердің рекультивациясы болып табылады, оның негізінде
жерлердің өзін-өзі тазалау қабілеттілігі жатады.
Мұнай көмірсутектерінің биодеградация процесін тездету ауаны көбейту
арқылы, минералды және органикалық тыңайтқыштарды енгізу, арнайы іріктелген
астық және бұршақ дақылдар қоспасын топырақты өңдеудің қажетті
агротехникалық тәсілдерімен егу арқылы жүзеге асады. Мұнаймен ластанған
топырақтың рекультивациясы үшін ұсынылатын және қауанылатын бактериялық
препараттардың құрамына монокультуралар немесе микроорганизмдердің арнайы
қосылыстары кіруі мүмкін.
Осыған байланысты қазіргі зерттеулердің мақсаты мұнаймен ластанған
әртүрлі субстраттардан бөлініп алынған активті микроорганизмдерді іріктеу,
зерттеу және идентификациялау болып табылады.
1. Әдебиетке шолу
1.1 Көмірсутек тотықтыратын микроорганиздер
Топырақтың тірі организмдеріне мұнайдың әсері оның концентрациясына
байланысты. Төмен концентрацияда мұнай топырақ биотасына стимулдеуші әсер
етеді, себебі ол көптеген микроорганизмдер тобына энергетикалық субстрет
болып табылады және құрамында өсімдіктің өсуі мен дамуын стимулдеуші заттар
болады 2. Бірақ мұнайдың аппаты төгінділері кезінде топырақтың ластануы,
әсіресе ластанудың алғашқы кезінде тірі органимдерге құртушы әсер етеді.
Көмірсутектерді асимиляциялау қабілеттілігі тек микроорганизмдермен
ғана шектелмейтін табиғи құбылыс. Бірақ көмірсутектердің микробтық
колданылуы көбірек қызығушылық тудырады, себебі микроорганизмдерде зат
алмасу процесі белсенді жүреді, соған сәйкес уақыт бірлігінде қолданған
көмірсутектердің саны көп болады. Көптеген микроорганизмдерге көміртектік
қоректенудің жалғыз көзі ретінде көмірсутектерді қолдану қабілеттілігі тән.
Табиғатта мұнай көмірсутектерін сіңіретін микроорганизмдер кең тараған.
Олар көптеген таксономиялық топтарға жатады да қалыпты микробтың
қауымдастықтың мүшесі болып табылады 3. Топырақтың тоқтаусыз мұнаймен
ластанатын жерлерінде көмірсутек тотықтыратын микроорганизмдер дамуына
қолайлы жағдай туады да, микробтың жалпы санының көп пайызы белсенді болып
табылады 4. Бірақ, көмірутек тотықтыратын микроорганизмдердің көп болуы
көмірсутекпен ластану дәрежесінің көрсеткіші емес, табиғи экожүйенің өзін
өзі тазалау процесінің қарқындылығын көрсетеді. Мысалы, мұнаймен көп
ластанатын аудандарда көмірсутек тотықтыратын микроорганизмдердің саны таза
аудандарға қарағанда төмен болуы мүмкін 5.
Мұнайдың барлық көмірсутектері топырақ микроорганизмдерімен сіңірліле
алады: тік және тармақты тізбекті алкандар, нафтенді және полициклді
ароматикалық көмірсутектер 6. Көмірсутектер микроорганизмдермен әртүрлі
деңгейде ыдыратылады. Бактериялар к-парафиндерді жақсы, ал циклдік
көмірсутектерді әлсіз ыдырататыны анықталған, ең нашар сіңірілетіндер
полициклді ароматикалық көмірсутектер болып саналады.
Топырақта сұйық парафиндерді тотықтыруға қабілетті микроорганизмдер
кездеседі. Микроорганизмдердің сұйық көмірсутектерде өсуінің кинетикалық
моделі ұсынылған. Бұл модель мынадай болжауға негізделеген: көміртек көзі
ретінде н-алкандарды қолданатын клеткалар өсу процесінде көмірсутектің
ортада ерігіштігін жоғарылататын метаболиттерді синтездейді. Ұшқыш
көмірсутектерді қолданатын микроорганизмдер сирек кездеседі.
Метанды тотықтыратын бактериялар пропанды қолдануға қабілетсіз және
керісінше пропанды тотықтыратындар метанды ыдырата алмауы мүмкін. Кейбір
көмірсутектер арнайы емес бактериялармен де ыдыратылады. Мысалы,
Bact.fluorescens пентанды, гександы және бірқатар жағарғы парафиндерді
тотықтырады.
Жеңіл парафиндердің биологиялық тотығуы аз зерттелген. Оларды
сіңіретін бактерияларға Pseudomonas және Nocardіa туысының өкілдері жатады.
Кейбір авторлар төмен қайнатылатын н-алкандар цитоплазмалық мембраналардың
қабыршақтануын тудыратындығын көрсеткен. Бұл құбылысты егер сұйық жеңіл
қайнатылатын көмірсутектер бактериялық клеткалардың липидтерін
ерітетіндігімен байланыстырады 7.
Көміртек көзі ретінде ароматтық көмірсутектерді қолданатын
микроорганизмдердің таралуын көптеген зерттеушілер зерттеген 8, 9, 10,
11. Топырақтан бензолды, толуолды және ксилолды активті тотықтыратын
Bacterіum benzolіcum штамы бөлініп алған. Нафталин тотықтырушы
бактерияларды зерттеу бойынша жұмыстарды Таусон жүргізген. Ол нафталин
кристалын ыдыратып, оны қолданатын бактериялардың 3 түрін
(Bac.naphtalіnіcus lіguefacіens, Bac.naphtalіnіcus nonlіguefacіens,
Bac.Naphtalіnіcus)бөліп алған. Фенантрен және көптеген басқа циклді
қосылыстарды тотықтыратын бактериялар сипатталған 8, 10. Қазіргі кезде,
көптеген зерттеушілер осы бағытта жұмыстарын жалғастыруда. В.М. Саксон
мазуттың құрамына кіретін бициклді ароматикалық қосылыстарды 84,9 - 93,6%,
полициклді ароматикалық қосылыстарды 90,1 - 93,2% ыдырататын Trіcoderma
lіgnorum штамын бөліп алған 11. Полициклді ароматикалық көмірсутектер
тірі организмге улы болып табылады. Бірқатар микрорганизмдер сондай
қосылыстарды көміртек және энергияның жалғыз көзі ретінде қолдануға немесе
оларды трансформациялауға қабілетті. Ең кең тараған биодеструкторлардың
бірі – полициклді ароматикалық қосылыстардың биодеградациясына қабілетті.
Pseudomonas putіda штамы болып табылады 8, 12.
Циклоалкандардың есебінен микроорганизмдердің өсуін тек кейбір авторлар
ғана байқаған. Pseudomonas және Mycobacterіum туыстарына жататын
бактериялар дақылдарының декалинды тотықтыруы сипатталған. Циклді
көмірсутектерде тек қана аралас дақылдар дамиды. Көміртек пен энергияның
жалғыз көзі ретінде циклді көмірсутектерде дамитын микроорганизмдерді бөліп
алу жөніндегі авторлардың әрекеттері сәтсіз аяқталды 13. Сонда да, циклді
көмірсутектер микробтық метаболизм мен кометаболизм процесінде активті
ыдырайды.
Қазіргі кезде әртүрлі систематикалық топтағы микроорганизмдердің
көмірсутектерді ыдырату есебінен даму қабілеттігі жөніндегі көзқарастар
кеңейді. Әртүрлі құрылымдық көмірсутектерді сіңіруге қабілетті микробтық
әлемнің жаңа өкілдері ашылуда. Микроорганиздер қолданатын қосылыстардың
спектрі микроорганизмдердің өсуін қамтамасыз ететін және өсуіне қажет емес
субстраттар болып табылатын көмірсутектердің метаболизмге енуі арқасында
кеңейеді. Белгілі көмірсутектерді қолданатын топырақ микрофлорасына
мұнайдың селекциялық әсері бірдей емес. Сонымен қатар бұрын микробтық
клеткалардың әсеріне төзімді деп саналатын көмірсутектер қолайлы жағдайда
бірге тотығу процесінде қолдануы мүмкін. Бірге тотығу процесінде полициклді
көмірсутектер бұзылуы мүмкін. Бұнда бұл көмірсутектердің әлсіз
деградациясының себебі олардың суда ерігіштігі төмен болуынан. Әдетте
табиғатта топырақтың 5 және одан да көп сақиналы полициклді ароматикалық
көмірсутектерден өзін-өзі тазалау процесі өте баяу жүреді. Полициклді
ароматикалық көмірсутектерді тиімді деградациялауға қабілетті микробтық
ассоциациялар белгілі 14, 15, 16.
Мұнай көмірсутектерін тотықтыратын ашытқыларға көп зерттеулер арналған.
Бұл жұмыстардың дамуы белоктық заттар мен витаминдердің синтезі үшін н-
парафиндері қолданатын микробиологиялық өнеркәсіптің сұраныстарына
байланысты дамыған. Кейбір авторлардың мәліметтері бойынша Candіda,
Torulopsіs ашытқылары көміртек пен энергияның жалғыз көзі ретінде н-
парафиндерді қолданып, ароматикалық көмірсутектерде өспейді. Бірақ соңғы
уақыттың зерттеулері бұл ашытқылардың ароматикалық көмірсутектер қатысында
катаболиттік активтілігін байқаған 17, 18.
Кейбір жұмыстарда мұнай өнімдері сіңген субстратта саңырауқұлақтар аз
кездесетіндігі айтылғанымен, мұнаймен ластанған топырақтан мұнай өнімдерін
ыдыратуға активті Aspergіllus, Penіcіllum, Fusarіum, Trіchoderma
туыстарының саңырауқұлақтары бөлініп алынған. Мұнаймен ластанған топырақтан
С2 - С4 н-алкандарды қолдануға қабілетті Aspergіllus amstebodamі,
Penіcіllum funіculosum көмірсутек тотықтыратын саңырауқұлақтар бөлініп
алынған 19.
Бактериялық клетка өнеркәсіптің дамуының нәтижесінде жиналатын улы
химиялық заттардың утилизациясына әкелетін әртүрлі химиялық реакцияларды
қамтитын ферментті жүйелердің жиынтығы мен барлық белгілі
микроорганизмдерден ерекшеленеді. Үнемі мұнай өнімдерімен ластанатын
экожүйелерде Pseudomonas және Rhodococcus туысына жататын бактериялар кең
тараған. Родококктар мен псевдомонадалар көмірсутектердің активті
деструкторларына жатады 20.
Pseudomonas өкілдері жете зерттелген. Олардың арасында мұнай сіңген
топырақта өмір сүретін әртүрлі түрлері кездеседі, бірақ олардың
кейбіреулері ластанбаған жерлерден бөлінген, олар да мұнайды қолдануға
қабілетті. Квасников Е.И. 21 батыс-украинды мұнайлы кәсіпшіліктің
топырағынан нафталинді активті тотықтыратын Pseudomonas туысының бірнеше
дақылдарын бөліп алған. Басқа зерттеушілер Урал-Поволжье, солтүстік
Предкавказье, Грузия, Литва және Украинаның мұнай-газ қабатты аудандарының
жер асты суларынан нафталин тотықтырушы Pseudomonas centrіfugans және
boreopolіs штамдарын бөліп алған. Метанның Ps. Flurescens, гептанның
Pseudomonas-тың алты түрімен, нафтендердің - Ps. aerugіnosa штамдарымен
тотығулары жөнінде, Pseudomonas туысының өкілдерімен каучук, резеңке,
майлайтын материалдардың ыдырауы жөнінде мәліметтер бар. Pseudomonas
туысының қандай да бір түрінің бактериялармен ыдырамайтын органикалық
қосылыс жер бетінде жоқ 22.
Родококктар көміртек пен энергияның жалғыз көзі ретінде әртүрлі
органикалық заттарды, соның ішінде мұнайдың көмірсутектерін қолданады.
Родококктардың мұнай көмірсутектері бар ортада көбеюі pH пен температураның
кең интервалында жүреді. Су мен топырақты тазалау үшін қолданылатын
көптеген биопрепараттардың құрамына Rhodococcus туысының бактериялары
кіреді. Тазалау аяқталғаннан кейін топыраққа енгізілген микроорганизмдердің
артақ мөлшері тіршілігін жойып, өсімдіктер оңай қабылдайтын органикалық
заттарға айналады. Яғни, родококк негізіндей биопрепараттар мұнай және
мұнай өнімдермен ластанған қоршаған ортаны тазалау үшін тиімді және
экологиялық қауіпсіз болып табылады 23.
Мұнаймен ластанған топырақтан 45-65 0С температурада өсетін термофильді
аэробты спора түзуші Bacіllus subtіlіs, Bas.brevіs, Bas.сoagulans,
бактериялары бөлініп алынған, олар С11 - С22-ге дейінгі н-алкандарды
утилизациялауға қабілетті, С11 – С16 және С6 – С10 н-алкандары болып
табылады. 600С кезінде н-нонан Bac. cіrculans thermophіlu штамдарының
өсуіне кері әсер етеді. Авторлардың айтуынша, бұл температура жоғарылағанда
алкандар буларының қысымының көтерілуіне байланысты. Бірақ кейбір
термофилді бактериялар С6-С10 көмірсутектерді 500С температурасында да
қолдана алады, сондықтан бұндай түсініктемені негізді деп есептеуге
болмайды 7, 24.
Кейбір микрококктар 12 және одан да көп көміртек атомды н-алканы бар
орталарда дамуға қабілетті Mіcrococcus туысының кейбір түрлері С13 – С22 н-
алкандарды активті пайдаланады. Қолайлы жағдайда оларды СО2 және Н2О дейін
трансформациялайды. Көмірсутектерді микроорганизмдер клетка ішінде
пайдаланады. Клетка мұнай көмірсутегін сіңіру үшін қолданатын субстрат пен
микроорганизмдердің клетка қабырғасының арасында тікелей байланыс болуы
керек. Гидрофобтық затты сіңіру үшін клеткада липофилді клетка қабырғасы
болуы керек. Бірқатар мұнай тотықтыратын микроорганизмдердің клетка
қабырғасының гидрофобтық айнағы болады. Гидрофобтық аймақтың құрамына
липидтер, жоғары молекулалы микол қышқылы кіреді. Родококк клеткалары н-
алкандарды пассифті диффузия арқылы сіңіреді. Микол қышқылының ұзын
алифатикалық тізбектері барлық штамдарының липидтерінің негізі құрамы болып
табылады, олар клеткаға н-алкандарды ортадан пассивті диффузия арқылы
сіңіруге мүмкіндік береді. Цитоплазмалық мембрана арқылы клетка ішіне
енетін көмірсутек клеткалық құрылымдармен байланысып, клетка бұзылғанда
ғана жойылады. Мұнайдың активті деструкторлары көмірсутектерді пессивті
диффузия жолымен сіңіретіндіктен, олар тек қана көнмірсутекпен қаныққан
ортада өсе алады. Көмірсутектің төмен концентрациясында көмірсутектің
шектеулі түсуінен бұл микроорганизмдер нашар өседі. Бұндай жағдайда
биодеградацияда көмірсутек қатысында хемотаксиске не қозғалғыш
микроорганизмдер маңызды рол атқарады 25. Бұл жағдайда мұнай өнімдерін
тотықтыруда негізгі рөлді Pseudomonas бактериалары атқарады. Бұл
бактериялардың алифатикалық көмірсутектерді ыдыратуы микробактериялар мен
артробактерияларға қарағанда әлсіздеу. Бірақ, ароматикалық көмірсутектердің
клеткаға түсу механизмдері толық зерттелмеген болса да, оларды ыдыратуда
Pseudomonas рөлі маңызды 5.
Микробактериялармен аралас дақылда Pseudomonas aerugіnosa жақсы өседі.
Бұл былай түсіндіріледі: липофилді беті бар микробактериялар дамыған кезде
ортада көмірсутектін эмульгирленуі жүреді. Липофильді қабырғасы жоқ
псевдомондалар үшін бұл жағдай өте маңызды, себебі гидрофилді субстратпен
байланысуын жеңілдетеді 25 Ps. аerugіnosa клеткалары көмірсутек
молекулаларымен комплекске байланысатын, сыртқы мембрана арқылы, одан кейін
клетка қабырғасы арқылы өтетін пептидогликолипид түзіп, оны сыртқа бөледі.
Псевдомонадалардың клеткасының ішінде көмірсутектің қоры жиналмайды, себебі
сіңірілген көмірсутектің тез тотығуы жүреді 26.
Аралас дақылды таза дақылға қарағанда тотығу дәрежесінің жоғарғы болуы,
әртүрлі қосылыстардың бірге тотығуымен түсіндіріледі. Канетабенизм
процесінің көмегімен тотығатын көмірсутектердің тобы көбейді.
Бірақ мұнайдың көмірсутектерін бірге қолдану табиғи жағдайда
деструкциясын зерттегенде қиындықтар тудырады. Осылайша, топырақта
көмірсутектің деградация процесі бөлек түрлермен емес, компоненттері бір-
бірімен күрделі әрекеттесулерге түсетін микроорганизмдер ассоциациясымен
жүзеге асады. Олардың ішінде ең активтілері күрделі қосылыстарды ыдыратып,
қалғандарына мұнайдың деструкция процесін жалғастыруға мүмкіндік береді.
Мұнай тотықтырушы микроорганизмдердің мұнай өнімдерінің жоғары
концентрациясына бейімделуін жаңа қоректік ортаға жиі егулер арқылы
жүргізіледі. Бұны қоректік ортада улы метаболиттердің жиналуы жүрмеу үшін
және мұнай тотықтырушы микроорганизмдердің төзімділерін алу үшін жүргізеді,
себебі әлсіз клеткалар тіршілігін жояды немесе нашар өседі, тек қана
физиологиялық активті клеткалар қарқынды өсуге ие. Осылайша, активті
клеткалардың іріктеуін жүргізіп, консорциум алады 24.
Адаптация жайлы айтқанда мыңдаған жылдар жүретін эволюциялық адаптация
мен бірнеше күндер, апталар немесе айларға созылатын тәжірибелік
адаптацияны ажыратып айту керек. Микробтық генотипі эволюциялық адаптация
процесінде қалыптасты. Микробтық популяцияның жаңа химиялық затпен бірнеше
байланасы кезінде ортаның өзгеруіне физиологиялық адаптация жүреді – бұл
фенотиптік аккомодация. Ол кейін мутациялық өзгергіштікке алып келіп,
жағымды қасиеті тұқым қуалауы мүмкін. Көптеген зерттеушілер, соның ішінде
Ван-Ниль, адаптацияны тұқым қуалаушылық өзгеріс ретінде қарастырмай, тек
адаптацияға қабілеттілігі ғана тұқым қуалай алатындығын айтқан. Станияр да
физиологиялық адаптация бір тұрақты геномфонында жүреді деген қорытындыға
келген. Оның айтуы бойынша, бұл кезде ядрода өзгерістер жүрмейді. Ал
Бертлайн, керісінше адаптациялық өзгергіштікті мутациялық ретінде
қарастырған. Бұл мәселе қазіргі кезде де пікірленеді. Еске сақтар жәйт,
мұнай құрамында да клеткада мутациялық өзгергіштіктерді тудыратын бірқатар
жоғары токсикалық органикалық заттар болады. Мутацияның сапасы белгілі
мөлшерде қолданылатын мутагендердің сапасымен анықталады, мутагеннің
әсерінен микроорганизмдерде табиғатта кездеспейтін формалары пайда болады.
Бұл бірқатар улы қосылыстарды ыдыратуға қабілетті микроорганимдер штамын
алуға мүмкіндік береді 27.
Микроорганизмдердің әртүрлі химиялық қосылыстарға, өнеркәсіптік және
тұрмыстық химияның қалдықтарына адаптациясы патогенді бактериялардың
дәрілік заттарға адаптациясы сияқты жыл сайын үлкен мәнге ие болып келуде.
Екеуінің айырмашылығы, микробтардың дәрілік препараттарға бейімделуі теріс
құбылыс, ал гетеротрофты сапрофитті микробтардың топырақты ластаушы улы
химиялық қосылыстарды ыдыратуға адаптациясы зор маңызы бар құбылыс.
1.2 Мұнай және мұнай өнімдері көмірсутектерінің биодеструкциясы
Мұнай құрамындағы бөліктердің биодеструкциялық механизмдері бірдей
емес. Мұнай құрамындағы көмірсутектерді келесідей кластарға бөледі:
алифатикалық (алкандар), қаныққан циклды (арендер). Сонымен қатар аралас
көмірсутектер де (гибридті) болады: алканнафтенді, нафтен – ароматикалық.
Алкандар негізінен мұнайдың 25-35-пайыз құйамыз. Еріген күйдегі
көмірсутектерді есепке алғанда алканды құрамы 40-50% жетеді, кейбір
мұнайларда ол 50-70-пайыз болады. Мұнай фракцияларының орташа малекулярлық
массасының жоғарлауымен ондағы алкандардың мөлшері төмендейді. 200(-300(С
аралығында айдалатын мұнайдың орташа фракцияларында олардың мөлшері 55-61%
шамасында, ол 500(С бұл көмірсутектердің мөлшері 19-5% дейін төмендейді.
Бірақ мұндай пайыздық қатынас мұнай түріне байланысты да өзгеруі мүмкін.
Мұнай алкандарының қалыпты және тармақталған құрлысты изомерлері болады.
Тармақталған алкандардың ерекше тобы - мұнай көмірсутектеріне тән С10 - С40
тізбекті, ретті кезектескен метил тобы бар изопреноидты алкандар болып
табылады28.
Ұзын тізбекті алкандарды көптеген бактериялар пайдалана алады. Көпшілік
микроорганиздер аралық өнімдері түзбестен көмірсутектерді толығымен
тотықтырады. Әр микроорганизм түріне көмірсутектердің әртүрлі тотығу
жолдарын іске асыратын ерекше ферменттер жүйесі тән 7.
Қазіргі кезде н- алкандардың үш тотығу жолы келтірілдеді:
монотерминалды, субтерминалды, дитерминалды. Ең кең таралған
көмірсутектерді ассимиляциялау жолы монотерминалды тотығу механизмі болып
табылады. Көмірсутектердің тізбегіне бірінші оттегі әсер етеді. Молекулярлы
оттегісіз парафиннің тотығыуы жүрмейді. Тотығуды монооксигеназа ферменті
катализдейді.
Парафин+О2+NAD(H2 монооксигеназа алифатикалық спирт+ +NAD+H2O
Парафиндердің кейінгі тотығуы ұзын тізбекті май қышқылдардың тотығу
жолымен жүреді. Қалыпты алкандардың малекуласында екіншілік –СН байланыстар
ғана тотығады Тотығудың біріншілік молекулярлы аралық өнімі екіншілік
гидропероксид болып табылады.
R(CH2 CH2(CH2)n CH2 R(( R(CH2 CH(CH2)nCH2 R((
OOH
R(CH2 CH(CH2)nCHR(( R(CH2 CH(CH2)n-1 CH3+ R((COOH
OOH OOH (OOH
Осылайша, алифатикалық спирттермен қатар гидропероксидтер, карбон
қышқылдары, сонымен бірге СО2 және Н2О дейін толық тотығатын кетондар
альдегидтер, дикарбонды қышқылдар т.б. түзілуі мүмкін.
Циклды алкандар (нафтендер) мұнайдың барлық фракцияларында кездеседі.
Олардың мөлшері мұнай фракцияларының ауырлауына байланысты өседі, тек балқу
температурасы жоғары майлы фракцияларда оның мөлшері ароматикалық
құрылымдардың көбейюінен төмендейді. Мұнайда бес және алты көміртек мүшелі
циклдар жоғары және олар тұрақты болып келеді. Пентан және
циклогександардың көптеген гомологтары анықталынды; сонымен қатар мұнай
фракциялары екі ортақ көміртектері бар (СnН2n-2, СnН2n-4) екі циклды және
үш циклды көмісутектерден тұрады. Мұнайда ароматты сақиналы бес және алты
көміртек атомдарынан тұратын циклдардың әртүрлі комбинациялы көмісутектері
табылған.Бүйірлік алкилды тізбекті моноциклды циклоалкондар, екі немесе үш
қысқа радикалдары алмасқандарға қарағанда тұрақсыз келеді. Нафтендерді
көмірсутектердің улылығы жолында мәліметтер өте аз 28.
Циклды көмісутектерде аралас культуралар ғана дамиды 29. н- гептанды
тотықтыратын ферментті препараттар циклогександы гидроксилдеген, ал
нафтенді көмірсутектердің қаныққан байланыс-тары қиын тотығады.
Циклогептанның тотығу кезінде циклдар ажырап, бес көміртекті екі негізгі
қышқылдардың түзілуі мүмкін.
СН2 СН2 СН2-СООН
О2
Н2 С СН2 Н2 С
СН2-СООН
СН2
Циклопентан глутар қышқылы
Ароматты көмірсутектер (арендер) тірі организмдер пайдалана алмайды
немесе қиын тотығады. Олардың мұнайдағы мөлшері 10-20%, кейде 35% дейін
жетеді. Арендер мұнайда бензол және оның гомологтары, сонымен бірге би және
полициклды көмірсутектер ретінде кездеседі. Мұнай құрамында ароматты
циклдар мен тізбекті алкандар, сонымен қатар қаныққан циклдардан тұратын
гибридті көмірсутектер де бар. Бактерияларда ароматты көмірсутектердің
тотығуы ароматты сақинасының ыдырауынан басталатын және зат алмасудың
негізгі қосылыстарының түзілуімен аяқталатын бірқатар аралық процестермен
өтеді. Ароматты көмірсутектердің тотығуы кезінде түзілетін аралық
өнімдерге: пирокатехин, протокатехой және гомопротокатехой қышқылдары,
оксигидрохинон, гентезин және гомогентизин қышқылдары жатады. Осы
қосылыстар немесе олардың туындылары көптеген ароматты қосылыстардың
тотығуы кезінде аралық өнім ретінде міндетті түрде түзіледі.
Пирокатехинге дейін ароматты сақинасында 1 және 2 жағдайдағы бір немесе
екі ауыспалы топтары бар, яғни толуол, фенол, бензой, салицил қышқылы,
фениламин, бензолды қосылыстар ыдырайды.
Н
О2
Диоксигеназа ОН
дегидрогена ОН
ОН Х ОН
ХН2 Х Н
ХН2
Бензол цис-1,2-дигидро-
пирокатехин
Бензол сақинасы диоксигеназ көмегімен цис – 1,2-дигидро 1,2-
дигидроксибензолға дейін гидроксилденеді, кейін дегидрилденіп пирокатехин
түзеледі.
1,3 немесе 1,4 жағдайдағы екі ауыспалы тобы бар немесе алмасу
топтарының саны көп ароматты заттар, мысалы: хинді, ванилді, 4-
гидроксибензолдылар протокатехой қышқылына дейін ыдырайды. Бұл жағдайларда
сақиналарға гидрокситоптары енгізіледі. Тотығу ауадағы оттегінің қатысуымен
жүреді.
О2 + ХН2 Н2 О + Х
ОН
фенол монооксигеназа
пирокатехин
Фенолды ароматты қосылыстар монооксигеназа көмегімен гидрилденеді. Бұл
кезде оттегінің бір атомы сақинаға қосылып, екіншісі суға дейін
тотықсызданады. Сутегінің доноры қызметін пиридиннуклеотидтер атқарады.
Ароматты сақиналардағы ауыспалы топтар, мысалы: хлор, нитротоптар,
сульфотоптар әдетте гидроксилді топтарға ауысады. Алифатикалық бүйірлік
топтар әртүрлі өзгеріп, қысқаруы мүмкін немесе ешқандай өзгеріссіз қалады.
Пирокатехиндегі ароматикалық сақинаның бұзылуы диоксигеназамен жүзеге
асады. Бұл кезде гидроксилденген көміртек пен гидроксилденбеген көміртек
арасындағы байланыстардың үзілуі жүреді. Сақинадағы екі көрші
гидроксилденген атомдардың арасындағы (орто-ыдырау) байланыстардың үзілуі
дикарбон қышқылдарының түзілуіне әкеледі және ол пирокатехаза-пирокатехин-
1,2-диоксигеназамен катализденеді (К.Ф.1.13.11.1).
ОН СООН
СООН
пирокатехаза
О
ОН СООН
С=О
СООН О СООН
О СО-ScoA
О
C=O COOH
COOH
Алдымен О2 молекуласы көміртек атомдарының гидроксилді топтарына
байланысып, циклді сутегінің асқын тотығы түзіледі. Содан соң молекула
ішілік топтасулардың нәтижесінде көміртек араларындағы байланыс үзіледі де
3-оксоадипин қышқылына дейін ыдырайтын цисмукон қышқылы түзіледі. Цисмукон
қышқылы зат алмасудың өнімі болып табылады.
Пирокатехинның мета-ыдырауы гидроксилді топпен және алмаспайтын
көміртегі атомымен байланысқан көміртек атомдарының арасында жүреді. Бұл
процесті метапирокатехаза деп аталатын 2,3-диоксигеназа ферменті
катализдейді (К.Ф.1.13.11.2). Метапирокатехаза Ps.putіda. да жақсы
зерттелінген. Түзілетін өнім а-оксимуконды жартылай альдегид болып
табылады.
Пирокатехин тотығуының соңғы өнімдері сірке қышқылына дейін ыдырайтын
пирожүзім қышқылы немесе ацетальдегид. Бұл екі қосылыс негізгі зат алмасуға
қатысады.
ОН
СООН
метапирокатехаза
СНО
ОН
Пирокатехин (-оксимукан
жартылай альдегиді
Пара - жағдайдағы сутегінің карбоксилмен алмасқан пирокатехинның
туындысы – протокатехой қышқылының ыдырауы пирокатехинның ыдырау жолына
ұқсас келеді; сонымен бірге протокатехой өышөылы мета- жіне орто- ыдырау
жолымен тотыға алады. Оның сақинасындағы орто- ыдырауды протокатехоат-3,4-
диоксигеназа (К.Ф.1.13.11.3) катализдейді. Нәтижесінде 3-карбокси-цис,
цисмукон қышқылдары түзіледі.
НООС НООС
ОН СООН
---------- протокатехоат 3,4
ОН диоксигеназа
СООН
Протокатехой қышқылы 3-карбокси-цис,мукон қышқылы
Протокатехой қышқылының мета- ыдырау жолы әртүрлі микроорганизмдерде
екі түрлі ферментпен катализденеді. Көптеген микроорганизмдерде 2-окси-4-
карбокси-цис-мукон альдегиді түзілетін бұл реакцияны протокатехоат-4,5-
диоксигеназа жүзеге асырады. Кейбір бактерияларда бұл процесс протокатехоат-
2,3-диоксигеназамен катализденеді, нәтижесінде 2-окси-4-карбоксимукон
жартылай альдегиді түзіледі.
Көптеген микроорганизмдерде гомопротокатехой қышқылының бензол
сақинасының ыдырауы 2,3- немесе 4,5-диоксигеназа ферменттерімен
катализденіп, ... жалғасы
Кіріспе 4
1. Әдебиетке шолу 5
1.1 Көмірсутек тотықтыратын микроорганиздер 5
1.2 Мұнай және мұнай өнімдері көмірсутектерінің биодеструкциясы 12
2. МАТЕРИАЛДАР ЖӘНЕ ЗЕРТТЕУ ӘДІСТЕРІ 19
2.1 Зерттеу материалдар 19
2.2 Қоректік орталар 19
2.3 Зерттеу әдістері 21
3. НӘТИЖЕЛЕР МЕН ТАЛДАУЛАР 24
ҚОРЫТЫНДЫ 28
ҚОЛДАНЫЛҒАН ӘДЕБИЕТТЕР ТІЗІМІ 29
Түйіні 33
РЕФЕРАТ
Бітіру жұмысы 29 беттен, 4 кестеден және 34 аталған әдебиеттер тізімін
қосқанда тұрады.
Кілт сөздер: топырақ, микрофлора, мұнай, мұнай өнімдері, бактериялар,
көмірсутек тотықтыратын микроорганиздер, морфология, идентификациялау,
псевдомонадала.
Жұмыстың зерттеу мақсаты мұнаймен ластанған әртүрлі субстраттардан
бөлініп алынған активті микроорганизмдерді іріктеу, зерттеу және
идентификациялау болып табылады.
Бұл жұмыста Жетібай кен орынын ластанған топырақтан бөлініп алынған
микроорганизмдердің морфологиялық-дақылдық физиология-биохимиялық
қасиеттерің зерттеді. Алынған нәтижелерге байланысты бөлініп алынған
микроорганизмдердің индентификациясы жүргізілді.
Осылайша морфологиялық культуралдық және физиологиялық-биохимиялық
белгілерді зерттеуде алынған мұнай диструкторлар бактериялар Pseudomonas
sp. туысына жатқызылады.
Кіріспе
Мұнай мен газ өндірудегі жұмыстардың дамуы экономикалық пайдалылығымен
қатар, қоректік ортаға жағымсыз әсер ететін бірқатар зардаптарға әкеледі.
Апаттық төгінділер кезінде топырақ пен судың жалпы массалық ластануы жүреді
де, мұнай тірі организмдерге улы әсер етеді. Сондықтан табиғаттың мұнай
және мұнай өңдеу өнімдерімен ластануы қоректік ортаның қиын және көп
жоспарлы мәселелерінің бірі болып табылады.
Жылына мұнай және мұнай өнімдерін қолдану және тасымалдау кезінде
шамамен 50 млн. т. жоғалады 1. Ластану себептері бұрғылау, шығару,
тасымалдау және өңдеу кездеріндегі технологиялық процесстердің бұзылуы
болуы мүмкін. Қазақстан үшін мұнай және мұнай өнімдері табиғи ортаның кең
тараған ластаушылары болып табылады, сонымен бірге мұнай шығаруға,
тасымалдауға және өңдеуге байланысты қоршаған ортаға экологиялық зардабы
өсе түседі.
Мұнаймен ластанған экожүйенің қайта қалпына келу процесі ұзақ уақыт
жүреді және бұзылған территорияның рекультивациясының жаңа технологияларын
құру мен енгізу мәселелерін тудырады. Осындай жұмыстардың тиімділігінің
негізгі белгісі аз экономикалық шығынмен ластаудың компоненттерінің ыдырау
жылдамдығы. Негізгі өңдеулер мұнайлы ластануды жоюдың физикалық,
механикалық және биохимиялық әдістерін қолдануға негізделеді.
Топырақты әртүрлі күйдегі, құрамдағы мұнай өнімдерінен тазалаудың
перспективті әдісіжердің рекультивациясы болып табылады, оның негізінде
жерлердің өзін-өзі тазалау қабілеттілігі жатады.
Мұнай көмірсутектерінің биодеградация процесін тездету ауаны көбейту
арқылы, минералды және органикалық тыңайтқыштарды енгізу, арнайы іріктелген
астық және бұршақ дақылдар қоспасын топырақты өңдеудің қажетті
агротехникалық тәсілдерімен егу арқылы жүзеге асады. Мұнаймен ластанған
топырақтың рекультивациясы үшін ұсынылатын және қауанылатын бактериялық
препараттардың құрамына монокультуралар немесе микроорганизмдердің арнайы
қосылыстары кіруі мүмкін.
Осыған байланысты қазіргі зерттеулердің мақсаты мұнаймен ластанған
әртүрлі субстраттардан бөлініп алынған активті микроорганизмдерді іріктеу,
зерттеу және идентификациялау болып табылады.
1. Әдебиетке шолу
1.1 Көмірсутек тотықтыратын микроорганиздер
Топырақтың тірі организмдеріне мұнайдың әсері оның концентрациясына
байланысты. Төмен концентрацияда мұнай топырақ биотасына стимулдеуші әсер
етеді, себебі ол көптеген микроорганизмдер тобына энергетикалық субстрет
болып табылады және құрамында өсімдіктің өсуі мен дамуын стимулдеуші заттар
болады 2. Бірақ мұнайдың аппаты төгінділері кезінде топырақтың ластануы,
әсіресе ластанудың алғашқы кезінде тірі органимдерге құртушы әсер етеді.
Көмірсутектерді асимиляциялау қабілеттілігі тек микроорганизмдермен
ғана шектелмейтін табиғи құбылыс. Бірақ көмірсутектердің микробтық
колданылуы көбірек қызығушылық тудырады, себебі микроорганизмдерде зат
алмасу процесі белсенді жүреді, соған сәйкес уақыт бірлігінде қолданған
көмірсутектердің саны көп болады. Көптеген микроорганизмдерге көміртектік
қоректенудің жалғыз көзі ретінде көмірсутектерді қолдану қабілеттілігі тән.
Табиғатта мұнай көмірсутектерін сіңіретін микроорганизмдер кең тараған.
Олар көптеген таксономиялық топтарға жатады да қалыпты микробтың
қауымдастықтың мүшесі болып табылады 3. Топырақтың тоқтаусыз мұнаймен
ластанатын жерлерінде көмірсутек тотықтыратын микроорганизмдер дамуына
қолайлы жағдай туады да, микробтың жалпы санының көп пайызы белсенді болып
табылады 4. Бірақ, көмірутек тотықтыратын микроорганизмдердің көп болуы
көмірсутекпен ластану дәрежесінің көрсеткіші емес, табиғи экожүйенің өзін
өзі тазалау процесінің қарқындылығын көрсетеді. Мысалы, мұнаймен көп
ластанатын аудандарда көмірсутек тотықтыратын микроорганизмдердің саны таза
аудандарға қарағанда төмен болуы мүмкін 5.
Мұнайдың барлық көмірсутектері топырақ микроорганизмдерімен сіңірліле
алады: тік және тармақты тізбекті алкандар, нафтенді және полициклді
ароматикалық көмірсутектер 6. Көмірсутектер микроорганизмдермен әртүрлі
деңгейде ыдыратылады. Бактериялар к-парафиндерді жақсы, ал циклдік
көмірсутектерді әлсіз ыдырататыны анықталған, ең нашар сіңірілетіндер
полициклді ароматикалық көмірсутектер болып саналады.
Топырақта сұйық парафиндерді тотықтыруға қабілетті микроорганизмдер
кездеседі. Микроорганизмдердің сұйық көмірсутектерде өсуінің кинетикалық
моделі ұсынылған. Бұл модель мынадай болжауға негізделеген: көміртек көзі
ретінде н-алкандарды қолданатын клеткалар өсу процесінде көмірсутектің
ортада ерігіштігін жоғарылататын метаболиттерді синтездейді. Ұшқыш
көмірсутектерді қолданатын микроорганизмдер сирек кездеседі.
Метанды тотықтыратын бактериялар пропанды қолдануға қабілетсіз және
керісінше пропанды тотықтыратындар метанды ыдырата алмауы мүмкін. Кейбір
көмірсутектер арнайы емес бактериялармен де ыдыратылады. Мысалы,
Bact.fluorescens пентанды, гександы және бірқатар жағарғы парафиндерді
тотықтырады.
Жеңіл парафиндердің биологиялық тотығуы аз зерттелген. Оларды
сіңіретін бактерияларға Pseudomonas және Nocardіa туысының өкілдері жатады.
Кейбір авторлар төмен қайнатылатын н-алкандар цитоплазмалық мембраналардың
қабыршақтануын тудыратындығын көрсеткен. Бұл құбылысты егер сұйық жеңіл
қайнатылатын көмірсутектер бактериялық клеткалардың липидтерін
ерітетіндігімен байланыстырады 7.
Көміртек көзі ретінде ароматтық көмірсутектерді қолданатын
микроорганизмдердің таралуын көптеген зерттеушілер зерттеген 8, 9, 10,
11. Топырақтан бензолды, толуолды және ксилолды активті тотықтыратын
Bacterіum benzolіcum штамы бөлініп алған. Нафталин тотықтырушы
бактерияларды зерттеу бойынша жұмыстарды Таусон жүргізген. Ол нафталин
кристалын ыдыратып, оны қолданатын бактериялардың 3 түрін
(Bac.naphtalіnіcus lіguefacіens, Bac.naphtalіnіcus nonlіguefacіens,
Bac.Naphtalіnіcus)бөліп алған. Фенантрен және көптеген басқа циклді
қосылыстарды тотықтыратын бактериялар сипатталған 8, 10. Қазіргі кезде,
көптеген зерттеушілер осы бағытта жұмыстарын жалғастыруда. В.М. Саксон
мазуттың құрамына кіретін бициклді ароматикалық қосылыстарды 84,9 - 93,6%,
полициклді ароматикалық қосылыстарды 90,1 - 93,2% ыдырататын Trіcoderma
lіgnorum штамын бөліп алған 11. Полициклді ароматикалық көмірсутектер
тірі организмге улы болып табылады. Бірқатар микрорганизмдер сондай
қосылыстарды көміртек және энергияның жалғыз көзі ретінде қолдануға немесе
оларды трансформациялауға қабілетті. Ең кең тараған биодеструкторлардың
бірі – полициклді ароматикалық қосылыстардың биодеградациясына қабілетті.
Pseudomonas putіda штамы болып табылады 8, 12.
Циклоалкандардың есебінен микроорганизмдердің өсуін тек кейбір авторлар
ғана байқаған. Pseudomonas және Mycobacterіum туыстарына жататын
бактериялар дақылдарының декалинды тотықтыруы сипатталған. Циклді
көмірсутектерде тек қана аралас дақылдар дамиды. Көміртек пен энергияның
жалғыз көзі ретінде циклді көмірсутектерде дамитын микроорганизмдерді бөліп
алу жөніндегі авторлардың әрекеттері сәтсіз аяқталды 13. Сонда да, циклді
көмірсутектер микробтық метаболизм мен кометаболизм процесінде активті
ыдырайды.
Қазіргі кезде әртүрлі систематикалық топтағы микроорганизмдердің
көмірсутектерді ыдырату есебінен даму қабілеттігі жөніндегі көзқарастар
кеңейді. Әртүрлі құрылымдық көмірсутектерді сіңіруге қабілетті микробтық
әлемнің жаңа өкілдері ашылуда. Микроорганиздер қолданатын қосылыстардың
спектрі микроорганизмдердің өсуін қамтамасыз ететін және өсуіне қажет емес
субстраттар болып табылатын көмірсутектердің метаболизмге енуі арқасында
кеңейеді. Белгілі көмірсутектерді қолданатын топырақ микрофлорасына
мұнайдың селекциялық әсері бірдей емес. Сонымен қатар бұрын микробтық
клеткалардың әсеріне төзімді деп саналатын көмірсутектер қолайлы жағдайда
бірге тотығу процесінде қолдануы мүмкін. Бірге тотығу процесінде полициклді
көмірсутектер бұзылуы мүмкін. Бұнда бұл көмірсутектердің әлсіз
деградациясының себебі олардың суда ерігіштігі төмен болуынан. Әдетте
табиғатта топырақтың 5 және одан да көп сақиналы полициклді ароматикалық
көмірсутектерден өзін-өзі тазалау процесі өте баяу жүреді. Полициклді
ароматикалық көмірсутектерді тиімді деградациялауға қабілетті микробтық
ассоциациялар белгілі 14, 15, 16.
Мұнай көмірсутектерін тотықтыратын ашытқыларға көп зерттеулер арналған.
Бұл жұмыстардың дамуы белоктық заттар мен витаминдердің синтезі үшін н-
парафиндері қолданатын микробиологиялық өнеркәсіптің сұраныстарына
байланысты дамыған. Кейбір авторлардың мәліметтері бойынша Candіda,
Torulopsіs ашытқылары көміртек пен энергияның жалғыз көзі ретінде н-
парафиндерді қолданып, ароматикалық көмірсутектерде өспейді. Бірақ соңғы
уақыттың зерттеулері бұл ашытқылардың ароматикалық көмірсутектер қатысында
катаболиттік активтілігін байқаған 17, 18.
Кейбір жұмыстарда мұнай өнімдері сіңген субстратта саңырауқұлақтар аз
кездесетіндігі айтылғанымен, мұнаймен ластанған топырақтан мұнай өнімдерін
ыдыратуға активті Aspergіllus, Penіcіllum, Fusarіum, Trіchoderma
туыстарының саңырауқұлақтары бөлініп алынған. Мұнаймен ластанған топырақтан
С2 - С4 н-алкандарды қолдануға қабілетті Aspergіllus amstebodamі,
Penіcіllum funіculosum көмірсутек тотықтыратын саңырауқұлақтар бөлініп
алынған 19.
Бактериялық клетка өнеркәсіптің дамуының нәтижесінде жиналатын улы
химиялық заттардың утилизациясына әкелетін әртүрлі химиялық реакцияларды
қамтитын ферментті жүйелердің жиынтығы мен барлық белгілі
микроорганизмдерден ерекшеленеді. Үнемі мұнай өнімдерімен ластанатын
экожүйелерде Pseudomonas және Rhodococcus туысына жататын бактериялар кең
тараған. Родококктар мен псевдомонадалар көмірсутектердің активті
деструкторларына жатады 20.
Pseudomonas өкілдері жете зерттелген. Олардың арасында мұнай сіңген
топырақта өмір сүретін әртүрлі түрлері кездеседі, бірақ олардың
кейбіреулері ластанбаған жерлерден бөлінген, олар да мұнайды қолдануға
қабілетті. Квасников Е.И. 21 батыс-украинды мұнайлы кәсіпшіліктің
топырағынан нафталинді активті тотықтыратын Pseudomonas туысының бірнеше
дақылдарын бөліп алған. Басқа зерттеушілер Урал-Поволжье, солтүстік
Предкавказье, Грузия, Литва және Украинаның мұнай-газ қабатты аудандарының
жер асты суларынан нафталин тотықтырушы Pseudomonas centrіfugans және
boreopolіs штамдарын бөліп алған. Метанның Ps. Flurescens, гептанның
Pseudomonas-тың алты түрімен, нафтендердің - Ps. aerugіnosa штамдарымен
тотығулары жөнінде, Pseudomonas туысының өкілдерімен каучук, резеңке,
майлайтын материалдардың ыдырауы жөнінде мәліметтер бар. Pseudomonas
туысының қандай да бір түрінің бактериялармен ыдырамайтын органикалық
қосылыс жер бетінде жоқ 22.
Родококктар көміртек пен энергияның жалғыз көзі ретінде әртүрлі
органикалық заттарды, соның ішінде мұнайдың көмірсутектерін қолданады.
Родококктардың мұнай көмірсутектері бар ортада көбеюі pH пен температураның
кең интервалында жүреді. Су мен топырақты тазалау үшін қолданылатын
көптеген биопрепараттардың құрамына Rhodococcus туысының бактериялары
кіреді. Тазалау аяқталғаннан кейін топыраққа енгізілген микроорганизмдердің
артақ мөлшері тіршілігін жойып, өсімдіктер оңай қабылдайтын органикалық
заттарға айналады. Яғни, родококк негізіндей биопрепараттар мұнай және
мұнай өнімдермен ластанған қоршаған ортаны тазалау үшін тиімді және
экологиялық қауіпсіз болып табылады 23.
Мұнаймен ластанған топырақтан 45-65 0С температурада өсетін термофильді
аэробты спора түзуші Bacіllus subtіlіs, Bas.brevіs, Bas.сoagulans,
бактериялары бөлініп алынған, олар С11 - С22-ге дейінгі н-алкандарды
утилизациялауға қабілетті, С11 – С16 және С6 – С10 н-алкандары болып
табылады. 600С кезінде н-нонан Bac. cіrculans thermophіlu штамдарының
өсуіне кері әсер етеді. Авторлардың айтуынша, бұл температура жоғарылағанда
алкандар буларының қысымының көтерілуіне байланысты. Бірақ кейбір
термофилді бактериялар С6-С10 көмірсутектерді 500С температурасында да
қолдана алады, сондықтан бұндай түсініктемені негізді деп есептеуге
болмайды 7, 24.
Кейбір микрококктар 12 және одан да көп көміртек атомды н-алканы бар
орталарда дамуға қабілетті Mіcrococcus туысының кейбір түрлері С13 – С22 н-
алкандарды активті пайдаланады. Қолайлы жағдайда оларды СО2 және Н2О дейін
трансформациялайды. Көмірсутектерді микроорганизмдер клетка ішінде
пайдаланады. Клетка мұнай көмірсутегін сіңіру үшін қолданатын субстрат пен
микроорганизмдердің клетка қабырғасының арасында тікелей байланыс болуы
керек. Гидрофобтық затты сіңіру үшін клеткада липофилді клетка қабырғасы
болуы керек. Бірқатар мұнай тотықтыратын микроорганизмдердің клетка
қабырғасының гидрофобтық айнағы болады. Гидрофобтық аймақтың құрамына
липидтер, жоғары молекулалы микол қышқылы кіреді. Родококк клеткалары н-
алкандарды пассифті диффузия арқылы сіңіреді. Микол қышқылының ұзын
алифатикалық тізбектері барлық штамдарының липидтерінің негізі құрамы болып
табылады, олар клеткаға н-алкандарды ортадан пассивті диффузия арқылы
сіңіруге мүмкіндік береді. Цитоплазмалық мембрана арқылы клетка ішіне
енетін көмірсутек клеткалық құрылымдармен байланысып, клетка бұзылғанда
ғана жойылады. Мұнайдың активті деструкторлары көмірсутектерді пессивті
диффузия жолымен сіңіретіндіктен, олар тек қана көнмірсутекпен қаныққан
ортада өсе алады. Көмірсутектің төмен концентрациясында көмірсутектің
шектеулі түсуінен бұл микроорганизмдер нашар өседі. Бұндай жағдайда
биодеградацияда көмірсутек қатысында хемотаксиске не қозғалғыш
микроорганизмдер маңызды рол атқарады 25. Бұл жағдайда мұнай өнімдерін
тотықтыруда негізгі рөлді Pseudomonas бактериалары атқарады. Бұл
бактериялардың алифатикалық көмірсутектерді ыдыратуы микробактериялар мен
артробактерияларға қарағанда әлсіздеу. Бірақ, ароматикалық көмірсутектердің
клеткаға түсу механизмдері толық зерттелмеген болса да, оларды ыдыратуда
Pseudomonas рөлі маңызды 5.
Микробактериялармен аралас дақылда Pseudomonas aerugіnosa жақсы өседі.
Бұл былай түсіндіріледі: липофилді беті бар микробактериялар дамыған кезде
ортада көмірсутектін эмульгирленуі жүреді. Липофильді қабырғасы жоқ
псевдомондалар үшін бұл жағдай өте маңызды, себебі гидрофилді субстратпен
байланысуын жеңілдетеді 25 Ps. аerugіnosa клеткалары көмірсутек
молекулаларымен комплекске байланысатын, сыртқы мембрана арқылы, одан кейін
клетка қабырғасы арқылы өтетін пептидогликолипид түзіп, оны сыртқа бөледі.
Псевдомонадалардың клеткасының ішінде көмірсутектің қоры жиналмайды, себебі
сіңірілген көмірсутектің тез тотығуы жүреді 26.
Аралас дақылды таза дақылға қарағанда тотығу дәрежесінің жоғарғы болуы,
әртүрлі қосылыстардың бірге тотығуымен түсіндіріледі. Канетабенизм
процесінің көмегімен тотығатын көмірсутектердің тобы көбейді.
Бірақ мұнайдың көмірсутектерін бірге қолдану табиғи жағдайда
деструкциясын зерттегенде қиындықтар тудырады. Осылайша, топырақта
көмірсутектің деградация процесі бөлек түрлермен емес, компоненттері бір-
бірімен күрделі әрекеттесулерге түсетін микроорганизмдер ассоциациясымен
жүзеге асады. Олардың ішінде ең активтілері күрделі қосылыстарды ыдыратып,
қалғандарына мұнайдың деструкция процесін жалғастыруға мүмкіндік береді.
Мұнай тотықтырушы микроорганизмдердің мұнай өнімдерінің жоғары
концентрациясына бейімделуін жаңа қоректік ортаға жиі егулер арқылы
жүргізіледі. Бұны қоректік ортада улы метаболиттердің жиналуы жүрмеу үшін
және мұнай тотықтырушы микроорганизмдердің төзімділерін алу үшін жүргізеді,
себебі әлсіз клеткалар тіршілігін жояды немесе нашар өседі, тек қана
физиологиялық активті клеткалар қарқынды өсуге ие. Осылайша, активті
клеткалардың іріктеуін жүргізіп, консорциум алады 24.
Адаптация жайлы айтқанда мыңдаған жылдар жүретін эволюциялық адаптация
мен бірнеше күндер, апталар немесе айларға созылатын тәжірибелік
адаптацияны ажыратып айту керек. Микробтық генотипі эволюциялық адаптация
процесінде қалыптасты. Микробтық популяцияның жаңа химиялық затпен бірнеше
байланасы кезінде ортаның өзгеруіне физиологиялық адаптация жүреді – бұл
фенотиптік аккомодация. Ол кейін мутациялық өзгергіштікке алып келіп,
жағымды қасиеті тұқым қуалауы мүмкін. Көптеген зерттеушілер, соның ішінде
Ван-Ниль, адаптацияны тұқым қуалаушылық өзгеріс ретінде қарастырмай, тек
адаптацияға қабілеттілігі ғана тұқым қуалай алатындығын айтқан. Станияр да
физиологиялық адаптация бір тұрақты геномфонында жүреді деген қорытындыға
келген. Оның айтуы бойынша, бұл кезде ядрода өзгерістер жүрмейді. Ал
Бертлайн, керісінше адаптациялық өзгергіштікті мутациялық ретінде
қарастырған. Бұл мәселе қазіргі кезде де пікірленеді. Еске сақтар жәйт,
мұнай құрамында да клеткада мутациялық өзгергіштіктерді тудыратын бірқатар
жоғары токсикалық органикалық заттар болады. Мутацияның сапасы белгілі
мөлшерде қолданылатын мутагендердің сапасымен анықталады, мутагеннің
әсерінен микроорганизмдерде табиғатта кездеспейтін формалары пайда болады.
Бұл бірқатар улы қосылыстарды ыдыратуға қабілетті микроорганимдер штамын
алуға мүмкіндік береді 27.
Микроорганизмдердің әртүрлі химиялық қосылыстарға, өнеркәсіптік және
тұрмыстық химияның қалдықтарына адаптациясы патогенді бактериялардың
дәрілік заттарға адаптациясы сияқты жыл сайын үлкен мәнге ие болып келуде.
Екеуінің айырмашылығы, микробтардың дәрілік препараттарға бейімделуі теріс
құбылыс, ал гетеротрофты сапрофитті микробтардың топырақты ластаушы улы
химиялық қосылыстарды ыдыратуға адаптациясы зор маңызы бар құбылыс.
1.2 Мұнай және мұнай өнімдері көмірсутектерінің биодеструкциясы
Мұнай құрамындағы бөліктердің биодеструкциялық механизмдері бірдей
емес. Мұнай құрамындағы көмірсутектерді келесідей кластарға бөледі:
алифатикалық (алкандар), қаныққан циклды (арендер). Сонымен қатар аралас
көмірсутектер де (гибридті) болады: алканнафтенді, нафтен – ароматикалық.
Алкандар негізінен мұнайдың 25-35-пайыз құйамыз. Еріген күйдегі
көмірсутектерді есепке алғанда алканды құрамы 40-50% жетеді, кейбір
мұнайларда ол 50-70-пайыз болады. Мұнай фракцияларының орташа малекулярлық
массасының жоғарлауымен ондағы алкандардың мөлшері төмендейді. 200(-300(С
аралығында айдалатын мұнайдың орташа фракцияларында олардың мөлшері 55-61%
шамасында, ол 500(С бұл көмірсутектердің мөлшері 19-5% дейін төмендейді.
Бірақ мұндай пайыздық қатынас мұнай түріне байланысты да өзгеруі мүмкін.
Мұнай алкандарының қалыпты және тармақталған құрлысты изомерлері болады.
Тармақталған алкандардың ерекше тобы - мұнай көмірсутектеріне тән С10 - С40
тізбекті, ретті кезектескен метил тобы бар изопреноидты алкандар болып
табылады28.
Ұзын тізбекті алкандарды көптеген бактериялар пайдалана алады. Көпшілік
микроорганиздер аралық өнімдері түзбестен көмірсутектерді толығымен
тотықтырады. Әр микроорганизм түріне көмірсутектердің әртүрлі тотығу
жолдарын іске асыратын ерекше ферменттер жүйесі тән 7.
Қазіргі кезде н- алкандардың үш тотығу жолы келтірілдеді:
монотерминалды, субтерминалды, дитерминалды. Ең кең таралған
көмірсутектерді ассимиляциялау жолы монотерминалды тотығу механизмі болып
табылады. Көмірсутектердің тізбегіне бірінші оттегі әсер етеді. Молекулярлы
оттегісіз парафиннің тотығыуы жүрмейді. Тотығуды монооксигеназа ферменті
катализдейді.
Парафин+О2+NAD(H2 монооксигеназа алифатикалық спирт+ +NAD+H2O
Парафиндердің кейінгі тотығуы ұзын тізбекті май қышқылдардың тотығу
жолымен жүреді. Қалыпты алкандардың малекуласында екіншілік –СН байланыстар
ғана тотығады Тотығудың біріншілік молекулярлы аралық өнімі екіншілік
гидропероксид болып табылады.
R(CH2 CH2(CH2)n CH2 R(( R(CH2 CH(CH2)nCH2 R((
OOH
R(CH2 CH(CH2)nCHR(( R(CH2 CH(CH2)n-1 CH3+ R((COOH
OOH OOH (OOH
Осылайша, алифатикалық спирттермен қатар гидропероксидтер, карбон
қышқылдары, сонымен бірге СО2 және Н2О дейін толық тотығатын кетондар
альдегидтер, дикарбонды қышқылдар т.б. түзілуі мүмкін.
Циклды алкандар (нафтендер) мұнайдың барлық фракцияларында кездеседі.
Олардың мөлшері мұнай фракцияларының ауырлауына байланысты өседі, тек балқу
температурасы жоғары майлы фракцияларда оның мөлшері ароматикалық
құрылымдардың көбейюінен төмендейді. Мұнайда бес және алты көміртек мүшелі
циклдар жоғары және олар тұрақты болып келеді. Пентан және
циклогександардың көптеген гомологтары анықталынды; сонымен қатар мұнай
фракциялары екі ортақ көміртектері бар (СnН2n-2, СnН2n-4) екі циклды және
үш циклды көмісутектерден тұрады. Мұнайда ароматты сақиналы бес және алты
көміртек атомдарынан тұратын циклдардың әртүрлі комбинациялы көмісутектері
табылған.Бүйірлік алкилды тізбекті моноциклды циклоалкондар, екі немесе үш
қысқа радикалдары алмасқандарға қарағанда тұрақсыз келеді. Нафтендерді
көмірсутектердің улылығы жолында мәліметтер өте аз 28.
Циклды көмісутектерде аралас культуралар ғана дамиды 29. н- гептанды
тотықтыратын ферментті препараттар циклогександы гидроксилдеген, ал
нафтенді көмірсутектердің қаныққан байланыс-тары қиын тотығады.
Циклогептанның тотығу кезінде циклдар ажырап, бес көміртекті екі негізгі
қышқылдардың түзілуі мүмкін.
СН2 СН2 СН2-СООН
О2
Н2 С СН2 Н2 С
СН2-СООН
СН2
Циклопентан глутар қышқылы
Ароматты көмірсутектер (арендер) тірі организмдер пайдалана алмайды
немесе қиын тотығады. Олардың мұнайдағы мөлшері 10-20%, кейде 35% дейін
жетеді. Арендер мұнайда бензол және оның гомологтары, сонымен бірге би және
полициклды көмірсутектер ретінде кездеседі. Мұнай құрамында ароматты
циклдар мен тізбекті алкандар, сонымен қатар қаныққан циклдардан тұратын
гибридті көмірсутектер де бар. Бактерияларда ароматты көмірсутектердің
тотығуы ароматты сақинасының ыдырауынан басталатын және зат алмасудың
негізгі қосылыстарының түзілуімен аяқталатын бірқатар аралық процестермен
өтеді. Ароматты көмірсутектердің тотығуы кезінде түзілетін аралық
өнімдерге: пирокатехин, протокатехой және гомопротокатехой қышқылдары,
оксигидрохинон, гентезин және гомогентизин қышқылдары жатады. Осы
қосылыстар немесе олардың туындылары көптеген ароматты қосылыстардың
тотығуы кезінде аралық өнім ретінде міндетті түрде түзіледі.
Пирокатехинге дейін ароматты сақинасында 1 және 2 жағдайдағы бір немесе
екі ауыспалы топтары бар, яғни толуол, фенол, бензой, салицил қышқылы,
фениламин, бензолды қосылыстар ыдырайды.
Н
О2
Диоксигеназа ОН
дегидрогена ОН
ОН Х ОН
ХН2 Х Н
ХН2
Бензол цис-1,2-дигидро-
пирокатехин
Бензол сақинасы диоксигеназ көмегімен цис – 1,2-дигидро 1,2-
дигидроксибензолға дейін гидроксилденеді, кейін дегидрилденіп пирокатехин
түзеледі.
1,3 немесе 1,4 жағдайдағы екі ауыспалы тобы бар немесе алмасу
топтарының саны көп ароматты заттар, мысалы: хинді, ванилді, 4-
гидроксибензолдылар протокатехой қышқылына дейін ыдырайды. Бұл жағдайларда
сақиналарға гидрокситоптары енгізіледі. Тотығу ауадағы оттегінің қатысуымен
жүреді.
О2 + ХН2 Н2 О + Х
ОН
фенол монооксигеназа
пирокатехин
Фенолды ароматты қосылыстар монооксигеназа көмегімен гидрилденеді. Бұл
кезде оттегінің бір атомы сақинаға қосылып, екіншісі суға дейін
тотықсызданады. Сутегінің доноры қызметін пиридиннуклеотидтер атқарады.
Ароматты сақиналардағы ауыспалы топтар, мысалы: хлор, нитротоптар,
сульфотоптар әдетте гидроксилді топтарға ауысады. Алифатикалық бүйірлік
топтар әртүрлі өзгеріп, қысқаруы мүмкін немесе ешқандай өзгеріссіз қалады.
Пирокатехиндегі ароматикалық сақинаның бұзылуы диоксигеназамен жүзеге
асады. Бұл кезде гидроксилденген көміртек пен гидроксилденбеген көміртек
арасындағы байланыстардың үзілуі жүреді. Сақинадағы екі көрші
гидроксилденген атомдардың арасындағы (орто-ыдырау) байланыстардың үзілуі
дикарбон қышқылдарының түзілуіне әкеледі және ол пирокатехаза-пирокатехин-
1,2-диоксигеназамен катализденеді (К.Ф.1.13.11.1).
ОН СООН
СООН
пирокатехаза
О
ОН СООН
С=О
СООН О СООН
О СО-ScoA
О
C=O COOH
COOH
Алдымен О2 молекуласы көміртек атомдарының гидроксилді топтарына
байланысып, циклді сутегінің асқын тотығы түзіледі. Содан соң молекула
ішілік топтасулардың нәтижесінде көміртек араларындағы байланыс үзіледі де
3-оксоадипин қышқылына дейін ыдырайтын цисмукон қышқылы түзіледі. Цисмукон
қышқылы зат алмасудың өнімі болып табылады.
Пирокатехинның мета-ыдырауы гидроксилді топпен және алмаспайтын
көміртегі атомымен байланысқан көміртек атомдарының арасында жүреді. Бұл
процесті метапирокатехаза деп аталатын 2,3-диоксигеназа ферменті
катализдейді (К.Ф.1.13.11.2). Метапирокатехаза Ps.putіda. да жақсы
зерттелінген. Түзілетін өнім а-оксимуконды жартылай альдегид болып
табылады.
Пирокатехин тотығуының соңғы өнімдері сірке қышқылына дейін ыдырайтын
пирожүзім қышқылы немесе ацетальдегид. Бұл екі қосылыс негізгі зат алмасуға
қатысады.
ОН
СООН
метапирокатехаза
СНО
ОН
Пирокатехин (-оксимукан
жартылай альдегиді
Пара - жағдайдағы сутегінің карбоксилмен алмасқан пирокатехинның
туындысы – протокатехой қышқылының ыдырауы пирокатехинның ыдырау жолына
ұқсас келеді; сонымен бірге протокатехой өышөылы мета- жіне орто- ыдырау
жолымен тотыға алады. Оның сақинасындағы орто- ыдырауды протокатехоат-3,4-
диоксигеназа (К.Ф.1.13.11.3) катализдейді. Нәтижесінде 3-карбокси-цис,
цисмукон қышқылдары түзіледі.
НООС НООС
ОН СООН
---------- протокатехоат 3,4
ОН диоксигеназа
СООН
Протокатехой қышқылы 3-карбокси-цис,мукон қышқылы
Протокатехой қышқылының мета- ыдырау жолы әртүрлі микроорганизмдерде
екі түрлі ферментпен катализденеді. Көптеген микроорганизмдерде 2-окси-4-
карбокси-цис-мукон альдегиді түзілетін бұл реакцияны протокатехоат-4,5-
диоксигеназа жүзеге асырады. Кейбір бактерияларда бұл процесс протокатехоат-
2,3-диоксигеназамен катализденеді, нәтижесінде 2-окси-4-карбоксимукон
жартылай альдегиді түзіледі.
Көптеген микроорганизмдерде гомопротокатехой қышқылының бензол
сақинасының ыдырауы 2,3- немесе 4,5-диоксигеназа ферменттерімен
катализденіп, ... жалғасы
Ұқсас жұмыстар
Пәндер
- Іс жүргізу
- Автоматтандыру, Техника
- Алғашқы әскери дайындық
- Астрономия
- Ауыл шаруашылығы
- Банк ісі
- Бизнесті бағалау
- Биология
- Бухгалтерлік іс
- Валеология
- Ветеринария
- География
- Геология, Геофизика, Геодезия
- Дін
- Ет, сүт, шарап өнімдері
- Жалпы тарих
- Жер кадастрі, Жылжымайтын мүлік
- Журналистика
- Информатика
- Кеден ісі
- Маркетинг
- Математика, Геометрия
- Медицина
- Мемлекеттік басқару
- Менеджмент
- Мұнай, Газ
- Мұрағат ісі
- Мәдениеттану
- ОБЖ (Основы безопасности жизнедеятельности)
- Педагогика
- Полиграфия
- Психология
- Салық
- Саясаттану
- Сақтандыру
- Сертификаттау, стандарттау
- Социология, Демография
- Спорт
- Статистика
- Тілтану, Филология
- Тарихи тұлғалар
- Тау-кен ісі
- Транспорт
- Туризм
- Физика
- Философия
- Халықаралық қатынастар
- Химия
- Экология, Қоршаған ортаны қорғау
- Экономика
- Экономикалық география
- Электротехника
- Қазақстан тарихы
- Қаржы
- Құрылыс
- Құқық, Криминалистика
- Әдебиет
- Өнер, музыка
- Өнеркәсіп, Өндіріс
Қазақ тілінде жазылған рефераттар, курстық жұмыстар, дипломдық жұмыстар бойынша біздің қор #1 болып табылады.
Ақпарат
Қосымша
Email: info@stud.kz