Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных
Введение 5
1. Обзор литературы 8
1.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных 8
1.2 Профилактика, диагностика и лечение листериоза сельскохозяйственных животных 15
2. Собственные исследования 22
2.1 Материалы и методы 22
3. Результаты исследования 25
3.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных в хозяйствах алматинской области 25
3.2 Биологические свойства вакцинного штамма Listeria monocytogenes Л.20 28
3.3 Исследования реактогенных свойств вакцинного штамма Listeria monocytogenes Л.20 33
4. Экономика 39
5. Охрана труда 43
Выводы 46
Практические предложения 47
Список использованных источников 48
Приложения 51
1. Обзор литературы 8
1.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных 8
1.2 Профилактика, диагностика и лечение листериоза сельскохозяйственных животных 15
2. Собственные исследования 22
2.1 Материалы и методы 22
3. Результаты исследования 25
3.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных в хозяйствах алматинской области 25
3.2 Биологические свойства вакцинного штамма Listeria monocytogenes Л.20 28
3.3 Исследования реактогенных свойств вакцинного штамма Listeria monocytogenes Л.20 33
4. Экономика 39
5. Охрана труда 43
Выводы 46
Практические предложения 47
Список использованных источников 48
Приложения 51
Актуальность темы. Получение животноводческой продукции высокого качества от сельскохозяйственных животных и эстетическое удовлетворение от контакта с домашними животными возможно только при наличии у них здоровья. И поэтому, для ветеринарных специалистов актуальной задачей является предупреждение и ликвидация инфекционных болезней, которые наносят большой экономический ущерб животноводству, а так же могут передаваться и человеку. К числу таких болезней относится листериоз – заболевание, представляющее актуальную медико – ветеринарную проблему.
Обладая выраженной пластичностью свойств, возбудитель листериоза высокоустойчив во внешней среде и при определенных условиях не только длительно выживает, но и способен размножаться [1,2].
Диагностику болезни затрудняет большое количество серологичесих типов листерий, а так же их способность поражать многие виды животных. Бактерии рода Listeria широко распространены в биотических и абиотических объектах окружающей среды, обнаружены более чем у 100 видов животных, птиц, членистоногих [3].
По данным рабочей группы ВОЗ (1997) для человека наибольшую опасность представляют скрытые листерионосители и получаемые от них продукты питания (молоко, сыры, мясо) и навоз, который, в качестве удобрения вывозят на поля, что приводит к обсеменению внешней среды. По количеству выявленных случаев, листериоз значительно уступает сальмонеллезам и кампилобактериозам, но превосходит их по летальности и тяжести клинического течения. Так, из 2518 больных листериозом, выявленных в США в 1997 году у 20% наступил летальный исход, а госпитализация больных требовалась в 92% случаях [4,5]. Наибольшую опасность листерии представляют для беременных женщин и новорожденных. Регистрация и учет
Обладая выраженной пластичностью свойств, возбудитель листериоза высокоустойчив во внешней среде и при определенных условиях не только длительно выживает, но и способен размножаться [1,2].
Диагностику болезни затрудняет большое количество серологичесих типов листерий, а так же их способность поражать многие виды животных. Бактерии рода Listeria широко распространены в биотических и абиотических объектах окружающей среды, обнаружены более чем у 100 видов животных, птиц, членистоногих [3].
По данным рабочей группы ВОЗ (1997) для человека наибольшую опасность представляют скрытые листерионосители и получаемые от них продукты питания (молоко, сыры, мясо) и навоз, который, в качестве удобрения вывозят на поля, что приводит к обсеменению внешней среды. По количеству выявленных случаев, листериоз значительно уступает сальмонеллезам и кампилобактериозам, но превосходит их по летальности и тяжести клинического течения. Так, из 2518 больных листериозом, выявленных в США в 1997 году у 20% наступил летальный исход, а госпитализация больных требовалась в 92% случаях [4,5]. Наибольшую опасность листерии представляют для беременных женщин и новорожденных. Регистрация и учет
1. Сахаров П. П., Гудкова Е. И. "Листереллезная инфекция". М., Медгиз 1987 г.
2. Туякова Р. К. "Характеристика листерий, выделенных из силоса и фекалий коров в молочных сельскохозяйственных формированиях Кустанайской области". Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана №6, 2003 г., стр. 51 – 52
3. Зайцева Е. А. "Распространение бактерий рода Listeria на территории Приморского края". Ветеринарная патология №4, 2004 г., стр. 28
4. Бакулов И. А. "Листериоз сельскохозяйственных животных". М., Колос 1986 г.
5. Гасанова Л. З. "Пищевые инфекции". М., Медицина 1993 г.
6. Туякова Р. К. "Биологические свойства листерий, выделенных из молока". Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана №1, 2004 г., стр.44
7. Триполитова А. А., Борисова Г. В. "Листериоз". Томск 1968 г.
8. Васильев Д. А. "Анализ факторов, способствующих распространению пищевого листериоза". Реферативный журнал №2, 2005 г., стр.55
9. Зеелигер Х. "Листериоз". М., Сельхозгиз 1987 г.
10. Бакулов И. А., Котляров М. В. "К вопросу таксономии бактерий рода Listeria". Ветеринария №7, 2003 г., стр. 8 – 10
11. "Методические рекомендации по лабораторной диагностике листериоза животных и людей". А., Кайнар, 1986 г.
12. Ганнушкин М. С. "Эпизоотология с микробиологией". М., Колос 1987 г.
13. Аннагиев А. А. "Листериоз сельскохозяйственных животных". Баку 1965 г.
14. Ilchmann G., Worbes H. "Листериоз овец". Tierzucht 1988 г.
15. Гуславский И. И. " Листериоз сельскохозяйственных животных в Павлодарской области". Автореферат 1985 г.
16. Мека – Меченко Т. В. "Биологическая характеристика листериоза в Казахстане и совершенствование его в лабораторной диагностике". Автореферат 1997 г.
17. Джупина С. И. "Листериоз – инфекция классическая". Ветеринария №4, 1992 г., стр. 46 – 48
18. Андреев Г. М., Давыдов В. У. "Справочник ветеринарного врача". С – П., Лань 2001 г.
19. Виноградов В. Л. "Изучение факторов, способствующих проявлению листериоза сельскохозяйственных животных и изыскание метода профилактики". Автореферат 1966 г.
20. Лемешкина Л. П. "Листериоз овец и меры борьбы с ним". А., Кайнар 1982 г.
21. Долгов А. А. "Диагностика инфекционных болезней". М., Колос 1989 г.
22. Жилов А. М. "Сравнительное изучение методов диагностики листериоза плотоядных". Автореферат 1978г.
23. Тартаковский И. С. "Регуляция экспрессии факторов вирулентности у Listeria monocytogenes". Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии №3, 2001 г., стр. 106 – 110
24. Нахмансон В. М. "Дифференциальная диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных". М., Колос 1990 г.
25. Сагдуллаева Г. А. "Выделение листерий из молока". Ветеринария №4, 1986 г., стр. 38 – 39
26. Калашникова Е. П. "Особенности микробиологии и морфологии врожденного листериоза". Проблемы патоморфологии, диагностики болезней в промышленном животноводстве №3, 1987 г., стр. 58
27. Ревина Е. П. "Лечение листериоза". Ветеринария №6, 1990 г., стр. 7
28. Ilic G. "Применение антибиотиков при лечении инфекционных заболеваний". Veter Glasnik 1988 г., стр. 7 – 11
29. Беденашвили Г. Г. "Листериоз сельскохозяйственных животных в Грузинской ССР". Автореферат 1980 г.
30. Юшкова Л. Я. "Влияние внешних факторов на заболеваемость листериозом животных в Алтайском крае". Автореферат 1990 г.
31. Муштоватова Л. С. "Глюкуронат натрия, как новое средство стимуляции функции макрофагов при цитостатической болезни в условиях присоединяющейся болезни". Сборник НИР и ОКД №6, 1996 г.
32. "Листериоз на рубеже тысячелетий". Материалы международного симпозиума. Покров 1999 г.
33. Фомичев В. А. "Изыскание вакцинного штамма листерий для специфической профилактики листериоза живой вакциной". Автореферат 1988 г.
34. Worbes H., Ilchmann G., Achtzehn W. "Иммунопрофилактика листериоза овец. Испытание живой болгарской вакцины". Mh. Veter. – Med. 1989 г.
35. Трошина Т. А. "Усовершенствование технологии промышленного изготовления сухой вакцины из штамма АУФ". Автореферат 1985 г.
2. Туякова Р. К. "Характеристика листерий, выделенных из силоса и фекалий коров в молочных сельскохозяйственных формированиях Кустанайской области". Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана №6, 2003 г., стр. 51 – 52
3. Зайцева Е. А. "Распространение бактерий рода Listeria на территории Приморского края". Ветеринарная патология №4, 2004 г., стр. 28
4. Бакулов И. А. "Листериоз сельскохозяйственных животных". М., Колос 1986 г.
5. Гасанова Л. З. "Пищевые инфекции". М., Медицина 1993 г.
6. Туякова Р. К. "Биологические свойства листерий, выделенных из молока". Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана №1, 2004 г., стр.44
7. Триполитова А. А., Борисова Г. В. "Листериоз". Томск 1968 г.
8. Васильев Д. А. "Анализ факторов, способствующих распространению пищевого листериоза". Реферативный журнал №2, 2005 г., стр.55
9. Зеелигер Х. "Листериоз". М., Сельхозгиз 1987 г.
10. Бакулов И. А., Котляров М. В. "К вопросу таксономии бактерий рода Listeria". Ветеринария №7, 2003 г., стр. 8 – 10
11. "Методические рекомендации по лабораторной диагностике листериоза животных и людей". А., Кайнар, 1986 г.
12. Ганнушкин М. С. "Эпизоотология с микробиологией". М., Колос 1987 г.
13. Аннагиев А. А. "Листериоз сельскохозяйственных животных". Баку 1965 г.
14. Ilchmann G., Worbes H. "Листериоз овец". Tierzucht 1988 г.
15. Гуславский И. И. " Листериоз сельскохозяйственных животных в Павлодарской области". Автореферат 1985 г.
16. Мека – Меченко Т. В. "Биологическая характеристика листериоза в Казахстане и совершенствование его в лабораторной диагностике". Автореферат 1997 г.
17. Джупина С. И. "Листериоз – инфекция классическая". Ветеринария №4, 1992 г., стр. 46 – 48
18. Андреев Г. М., Давыдов В. У. "Справочник ветеринарного врача". С – П., Лань 2001 г.
19. Виноградов В. Л. "Изучение факторов, способствующих проявлению листериоза сельскохозяйственных животных и изыскание метода профилактики". Автореферат 1966 г.
20. Лемешкина Л. П. "Листериоз овец и меры борьбы с ним". А., Кайнар 1982 г.
21. Долгов А. А. "Диагностика инфекционных болезней". М., Колос 1989 г.
22. Жилов А. М. "Сравнительное изучение методов диагностики листериоза плотоядных". Автореферат 1978г.
23. Тартаковский И. С. "Регуляция экспрессии факторов вирулентности у Listeria monocytogenes". Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии №3, 2001 г., стр. 106 – 110
24. Нахмансон В. М. "Дифференциальная диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных". М., Колос 1990 г.
25. Сагдуллаева Г. А. "Выделение листерий из молока". Ветеринария №4, 1986 г., стр. 38 – 39
26. Калашникова Е. П. "Особенности микробиологии и морфологии врожденного листериоза". Проблемы патоморфологии, диагностики болезней в промышленном животноводстве №3, 1987 г., стр. 58
27. Ревина Е. П. "Лечение листериоза". Ветеринария №6, 1990 г., стр. 7
28. Ilic G. "Применение антибиотиков при лечении инфекционных заболеваний". Veter Glasnik 1988 г., стр. 7 – 11
29. Беденашвили Г. Г. "Листериоз сельскохозяйственных животных в Грузинской ССР". Автореферат 1980 г.
30. Юшкова Л. Я. "Влияние внешних факторов на заболеваемость листериозом животных в Алтайском крае". Автореферат 1990 г.
31. Муштоватова Л. С. "Глюкуронат натрия, как новое средство стимуляции функции макрофагов при цитостатической болезни в условиях присоединяющейся болезни". Сборник НИР и ОКД №6, 1996 г.
32. "Листериоз на рубеже тысячелетий". Материалы международного симпозиума. Покров 1999 г.
33. Фомичев В. А. "Изыскание вакцинного штамма листерий для специфической профилактики листериоза живой вакциной". Автореферат 1988 г.
34. Worbes H., Ilchmann G., Achtzehn W. "Иммунопрофилактика листериоза овец. Испытание живой болгарской вакцины". Mh. Veter. – Med. 1989 г.
35. Трошина Т. А. "Усовершенствование технологии промышленного изготовления сухой вакцины из штамма АУФ". Автореферат 1985 г.
Дисциплина: Ветеринария
Тип работы: Дипломная работа
Бесплатно: Антиплагиат
Объем: 44 страниц
В избранное:
Тип работы: Дипломная работа
Бесплатно: Антиплагиат
Объем: 44 страниц
В избранное:
Содержание
Введение 5
1. Обзор литературы 8
1.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных 8
1.2 Профилактика, диагностика и лечение листериоза 15
сельскохозяйственных животных
2. Собственные исследования 22
2.1 Материалы и методы 22
3. Результаты исследования 25
3.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных в 25
хозяйствах алматинской области
3.2 Биологические свойства вакцинного штамма Listeria monocytogenes28
Л-20
3.3 Исследования реактогенных свойств вакцинного штамма Listeria 33
monocytogenes Л-20
4. Экономика 39
5. Охрана труда 43
Выводы 46
Практические предложения 47
Список использованных источников 48
Приложения 51
Нормативные ссылки
В настоящей дипломной работе использованы ссылки на следующие
стандарты:
ГОСТ 1530-65 Бумага пергаментная;
ГОСТ 3164-78 Масло вазелиновое медицинское. Технические
условия;
ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый. Технические условия;
ГОСТ 5962 –67 Спирт этиловый ректификат 96%-ный;
ГОСТ 6038-79 Сахара;
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия;
ГОСТ 12923-82 Алигнин медицинский. Технические условия;
ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для
бактериологических целей. Технические условия;
ГОСТ 16280-88 Агар пищевой. Технические условия;
ГОСТ 17206-84 Агар микробиологический. Технические условия;
ГОСТ 20227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки
градуированные;
ГОСТ 20292-74 Колбы мерные вместимостью 100, 200, 1000 см3;
ГОСТ 20730-89 Бульон мясо-пептонный;
ГОСТ 22967 Шприцы инъекционные 2 см3, 5 см3;
ГОСТ 25336-82 Е Посуда и оборудование лабораторные, стеклянные.
Технические условия;
ГОСТ 28085-89
(от СЭВ 6280-88) Определение на стерильность;
ГОСТ 4.452-86 Микроскоп биологический "Биолам";
ТУ 480-11-10 –73 Карандаши по стеклу;
МРТУ 42-102-63 Ножницы разные;
Определения
В настоящей дипломной работе применяют следующие термины с
соответствующими определениями:
Вакцинный штамм – аттенуированный штамм, имеющий стабильные
иммунобиологические свойства;
Остаточная вирулентность – степень относительной стабильности
патогенности;
Иммуногенность – способность микробных антигенов создавать иммунитет к
инфекционным заболеваниям;
Лабораторная модель – исследования на белых мышах и морских свинках.
Обозначения и сокращения
В настоящей дипломной работе применяют следующие обозначения и
сокращения:
ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения
МПБ - мясопептонный бульон
МПА - мясопептонный агар
ПЖА – полужидкий агар
ЕД - иммунизирующая доза
ЛД50 - 50 % летальная доза
ИФА - иммуноферментный анализ
КОЕ - колониеобразующие единицы
РА – реакция агглютинации
РСК – реакция связывания комплемента
РНФ – реакция нарастания титра фага
ПЦР – полимеразная цепная реакция
Введение
Актуальность темы. Получение животноводческой продукции высокого
качества от сельскохозяйственных животных и эстетическое удовлетворение от
контакта с домашними животными возможно только при наличии у них здоровья.
И поэтому, для ветеринарных специалистов актуальной задачей является
предупреждение и ликвидация инфекционных болезней, которые наносят большой
экономический ущерб животноводству, а так же могут передаваться и человеку.
К числу таких болезней относится листериоз – заболевание, представляющее
актуальную медико – ветеринарную проблему.
Обладая выраженной пластичностью свойств, возбудитель листериоза
высокоустойчив во внешней среде и при определенных условиях не только
длительно выживает, но и способен размножаться [1,2].
Диагностику болезни затрудняет большое количество серологичесих типов
листерий, а так же их способность поражать многие виды животных. Бактерии
рода Listeria широко распространены в биотических и абиотических объектах
окружающей среды, обнаружены более чем у 100 видов животных, птиц,
членистоногих [3].
По данным рабочей группы ВОЗ (1997) для человека наибольшую
опасность представляют скрытые листерионосители и получаемые от них
продукты питания (молоко, сыры, мясо) и навоз, который, в качестве
удобрения вывозят на поля, что приводит к обсеменению внешней среды. По
количеству выявленных случаев, листериоз значительно уступает
сальмонеллезам и кампилобактериозам, но превосходит их по летальности и
тяжести клинического течения. Так, из 2518 больных листериозом, выявленных
в США в 1997 году у 20% наступил летальный исход, а госпитализация больных
требовалась в 92% случаях [4,5]. Наибольшую опасность листерии
представляют для беременных женщин и новорожденных. Регистрация и учет
листериоза у людей, как самостоятельной, нозологической формы введена
Минздравом Республики Казахстан в 1992 году.
Листериоз животных в Казахстане впервые диагностирован в 1953 году
С.А. Аманжуловым. Листериоз у животных протекает в форме септицемии,
поражения центральной нервной системы, абортов, или в форме бессимптомного
носительства. Л.Ф. Зыкин при исследовании 203 проб молока и молочных
продуктов изолировал 4 штамма Listeria monocytogenes. Листерии могут
вызывать маститы у крупного рогатого скота, которые часто не выявляются.
Подобные животные выделяют 25-30 тысяч клеток листерий в 1 мл молока [6].
Исходя из вышеперечисленного, в основе борьбы с бактериями рода
Listeria лежит специфическая профилактика животных, соблюдение
зоогигиенических условий при их содержании, выявления бактерионосителей, а
так же исследование продуктов животного происхождения на обсемененность их
листериями.
Цели и задачи исследований. Основной целью наших исследований было
изучение и сравнение высокоэффективных средств специфической профилактики,
проведение анализа причин распространения листериоза в хозяйствах, а так же
исследование свойств вакцинного штамма против листериоза
сельскохозяйственных животных. Исходя из вышеперечисленного, нами были
выделены следующие задачи:
1. Изучить факторы распространения листериоза
2. Исследовать биологические и реактогенные свойства вакцинного
штамма Listeria monocytogenes Л-20 на лабораторной и производственной
модели.
Научная новизна работы. Были исследованы биологические, реактогенные
свойства нового вакцинного штамма Listeria monocytogenes Л-20. Полученны
экспериментальные данные о свойствах вакцинного штамма Listeria
monocytogenes Л-20 на лабораторной и производственной модели . Результаты
исследования показали, что вакцинный штамм при введении не вызывает
побочных действий, то есть слабореактогенный, обладает генетическими
метками, а так же культуральными и морфологическими признаками,
характерными для бактерий рода Listeria.
1. Обзор литературы
1.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных
Листериоз – Listeriosis (cинонимы: листереллез, болезнь реки Тигр,
невреллез) – инфекционная болезнь животных и человека, характеризующаяся у
животных поражением нервной системы, септическими явлениями, абортами.
Листериоз у человека проявляется как пищевая инфекция. Листериозная
инфекция обусловливает выкидыши, мертворождение, развитие пороков плода, а
также менингиты, сепсис и пневмонию у новорожденных [7].
Можно выделить три основных этапа во взаимоотношениях листерий и
человека. Первый до 50-х годов, когда в мире было выявлено не более 70
случаев листериоза, как правило, у людей, непосредственно контактировавших
с зараженными животными (работники скотобоен, фермеры-животноводы, доярки).
Второй-50-70-е годы. Число случаев листериоза достигает нескольких тысяч.
Эта инфекция рассматривается как весьма опасный зооноз с высокой
летальностью, но большинство случаев по-прежнему связаны с
сельскохозяйственными регионами и употреблением сырого молока, контактом с
больными животными, в том числе грызунами. Третий -80-е годы - по настоящее
время [8].
Листерии давно известны микробиологам и эпидемиологам всего мира. В
1926 г. Мюррей, Уэбб и Сванн в Кембридже при вспышке эпизоотии в питомнике
среди кроликов и морских свинок выделили микроб, которым удавалось
экспериментально заражать кроликов и вызывать у них в процессе болезни
характерные изменения белой крови с выраженным моноцитозом. Годом позже
Пири описал, как это вскоре выяснилось, точно такого же микроба, которого
он выделил в Южной Африке от крысоподобного грызуна Tatera Lobengulae.
Инфекция носила местное название Tiger River disease (болезнь реки Тигр)
[9]. В 1940 г. возбудителя назвали Listeria, в честь английского хирурга Д.
Листера.
Возбудитель листериоза – психрофильная факультативно – анаэробная
маленькая гамположительная бактерия с закругленными концами длиной 0,5-2
мкм и шириной 0,5 мкм. В зависимости от условий культивирования она
способна принимать кокковидную или овоидную форму, в культурах, выращенных
при комнатной температуре преобладают палочковидные формы, а в культурах,
выращенных при температуре 37°С - кокковидные и овоидные формы.
Показательной особенностью листерий является четко выраженная подвижность
клетки. Специфика проявления подвижности у листерий (дифференциальный
признак от рожистых бактерий), связана с наличием жгутиков, спор и капсул
не образуют. Свойство листерий вызывать моноцитоз послужило основанием для
названия вида. В настоящее время в род Listeria входят следующие виды
Listeria monocytogenes, L.ivanovii, L.seeligeri, L. welshimeri, L.innocua,
L.grayi. Бактерии рода Listeria широко распространёны в биотических и
абиотических объектах окружающей среды (почве, воде, растениях, пищевых
продуктах, обнаружены более чем у 100 видов животных, птиц, рыб,
членистоногих). Из шести видов заболевание листериозом у человека и
животных вызывает вид L.monocytogenes. В последнее время в литературе
появились единичные сообщения о заболеваниях, вызванных L.ivanovii [10].
Листерии не относятся к числу микроорганизмов, культивирование
которых представляет какие – либо трудности. Микроб растет на обычных
питательных средах с дольно широким диапазоном рН (5,6 - 9,0). Наиболее
благоприятными следует считать среды с рН 7,2 - 7,4, содержащие глицерин,
глюкозу, сыворотку крови, а так же печеночные среды. Лучшей питательной
средой является мясопептонный печеночный агар и бульон с добавлением 0,5%
глюкозы и 2% глицерина. На МПА в первые сутки роста наблюдаются мелкие,
слизистые, круглые, прозрачные при проходящем или молочно – белые в
падающем свете выпуклые колонии. На МПБ листерии в начале вызывают
равномерное помутнение среды; при встряхивании пробирки заметны муаровые
волны. На 5 - 7 сутки бульон просветляется и на дне образуется слизистый
осадок, который при встряхивании поднимается в виде косички. При посеве
уколом на МПЖ, листерии дают медленный рост в виде узловатой нити или
полоски с небольшими отростками. Культуры листерий издают запах,
напоминающий запах кислого молока, или прогорклого масла. Интенсивность
этого запаха находится в прямой зависимости от пышности роста культуры и
обусловлена продуктами углеводного обмена, образующимися в процессе роста
листерий. Этот признак используется как вспомогательный в практический
работе с культурами листерий [11]. При выделении листерий из загрязненного
патологического материала целесообразно использовать бульонные среды с
роданитом калия и агаровые среды с налидиксовой кислотой [12].
Листерии, по мнению большинства исследований по биохимическо –
ферментативным свойствам принадлежат к малоактивным видам бактерий. Они не
образуют индола, аммиака, не восстанавливают нитраты в нитриты, не
свертывают и не пептонизируют молоко, не гидролизуют мочевину. Постоянным
признаком листерий, который в числе прочих может быть использован для целей
дифференциации их от эризипелотриксов, является каталазная активность.
Листерии способны ферментировать с образование кислоты (без газа) глюкозу,
рамнозу, салицин, левулезу, но не изменяют среду с дульцином, маннитом,
арабинозой, сорбитом [13,14].
По наличию термолабильных жгутиковых (Н) и термостабильных
соматических (О) антигенов листерии подразделяются на подтипы (а, в, с, е).
Хотя известно не менее 16 сероваров L. monocytogenes большая часть всех
случаев листериоза (90%) вызывают возбудители типов 4в, 1в, 1а.
Листерии устойчивы во внешней среде. Они длительно сохраняются в
испражнениях, почве, зерне, во льду, могут размножаться при температуре +4
- +6 ("микроб холодильника"). Листерии способны вести сапрофитный образ
жизни, они встречаются в загрязненной стоками озерной, морской и речной
воде, особенно в прибрежной зоне. Возбудитель листериоза селится на
поверхности тел рыб, и используют в качестве источника питания эскулин
рыбьей слизи. Листерии инактивируются под воздействием солнечных лучей.
Гибель микроорганизмов происходит при температуре 70°С через 20 – 30 мин.,
при 100°С в течении 5-10 мин. Возбудитель неустойчив к обычным
дезинфицирующим веществам в рабочих концентрациях: 0,5-1,0% раствор
формалина, 3-5% раствор хлорамина.
В проявлении листериза большую роль играют предрасполагающие факторы.
По отдельным данным зарубежных исследователей, проявлению листериоза может
способствовать скармливание силоса. В Исландии эту связь считают настолько
очевидной, что называют листериоз силосной болезнью. Источником инфекций
при листериозе являются больные животные и листерионостиели, в частности,
грызуны и птицы, которые выделяют возбудителя во внешнюю среду с мочой,
калом, выделениями из носовой полости, глаз, половых органов, а так же
околоплодной жидкости и молоком. Листерионосительство длится у переболевших
овец не менее 30 дней, у коров – до 300 дней, у некоторых видов грызунов –
до 260 дней, в организмах клещей листерии могут сохранятся свыше 500 дней
[15]. Переносчиками возбудителя у животных могут быть кровососущие
членистоногие (иксодовые клещи), а так же различные виды блох и вшей.
По данным Мека – Меченко Т.В. возбудитель листериоза выявлен у 14
видов грызунов в Кызылординской, Западно-Казахстанской, Алматинской,
Атырауской и Актюбинской областях. Наиболее высокий процент зараженности
среди грызунов отмечен у серой крысы, домовой мыши.
Листериоз зарегистрирован в городе Алматы – 14 культур от грызунов, 4
– от блох. Листериоз у грызунов регистрировался в течение всего года.
Штаммы листерий, выделенные от синантропных грызунов проявляли достаточно
высокую вирулентность [16]. Поэтому, грызунам и другим видам диких животных
отводится важная роль в инфицировании внешней среды и формировании
природных очагов этой инфекции. При листериозе имеет место многообразие
механизмов передачи возбудителя инфекции: алиментарный, контактный,
аспирационный, трансплацентарный.
Эпизоотические данные. К листериозу восприимчивы: мелкий рогатый скот,
крупный рогатый скот, свиньи, лошади, кролики, куры, гуси, утки, индейки.
Отмечена болезнь у пушных зверей, а так же у форелей в рыбопитомниках. В
республике Казахстан листериоз принял широкое распространение среди овец и
собак города Алматы. Болеют листериозом животные всех возрастов, особенно
чувствительны молодняк и беременные животные. Листериоз проявляется
спорадически, реже – в виде эпизоотий. Болезнь носит сезонный характер и
чаще проявляется в зимне-весенний период. Это связано с влиянием ряда
факторов, в частности, в этот период активизируется механизм передачи
возбудителя инфекции, грызуны мигрируют осенью в помещения. Кроме того,
неспецифическая резистентность организма животных к данному времени
снижается.
Для листериоза характерна стационарность – болезнь повторяется в одних
и тех же пунктах, что связано с длительным листерионосительством у
животных, сохраняемостью листерий во внешней среде, существованием
природных очагов листериоза, где болезнь поддерживается в дикой фауне и
различными путями передается сельскохозяйственным животным.
Патогенез. Заражение животных листериозом в естественных
условиях происходит через слизистую оболочку носовой и ротовой полостей,
конъюнктиву, пищеварительный тракт, поврежденную кожу. Внедрение листерий в
организм может привести к развитию сепсиса, поражению отдельных органов и
систем, а также к бессимптомному переболеванию. Возникновение различных
форм болезни зависит от вирулентности микроба, инфицирующей дозы, путей
заражения, а так же от возраста животного, физиологического состояния
(беременность), характера кормления и содержания, наличия сопутствующих
заболеваний.
Распространение листерий по организму происходит нейрогенным (по
периневральным путям), лимфогенным и гематогенным путями. Листерии попадают
в различные органы, в том числе, преодолевая защитный барьер, проникают в
головной мозг. По современным представлениям, листерии в организме в
основном размножаются внутри макрофагов. Инфицированным свободным и
фиксированным макрофагам отводится особая роль в распространении и
сохранении листерий в организме. У взрослых животных чаще поражается
центральная нервная система, а в период беременности — половая система. У
молодняка развивается сепсис, а затем генерализованный гранулематоз. У
взрослых животных болезнь протекает иногда бессимптомно, при этом животные
длительное время остаются носителями листерий. Длительное
листерионосительство обусловлено неспособностью макрофагов полностью
фагоцитировать возбудителя, чему также способствует продолжительный (до
года) срок жизни макрофагов [17,18].
Течение и симптомы. Инкубационный период 7 - 30 дней. Течение болезни
острое, подострое, хроническое. Болезнь проявляется несколькими
клиническими формами: нервной, септической, смешанной, стертой,
бессимптомной, а также с преимущественным поражением половых органов и
молочной железы.
У крупного рогатого скота и овец чаще наблюдают поражение центральной
нервной системы. Заболевание начинается угнетением, вялостью, снижением
аппетита, необычным поведением животного. Через 1 - 7 дней отмечают
некоординированные, нередко круговые движения, потерю равновесия, судороги,
иногда приступы буйства, парезы отдельных групп мышц, искривление шеи,
потерю зрения, конъюнктивит, стоматиты, оглумоподобное состояние.
Температура тела повышена в начале болезни или остается в пределах нормы.
Длительность болезни до 10 суток и в большинстве случаев заканчивается
гибелью больных животных. Другая форма болезни — поражение половой системы,
она проявляется абортами, задержанием последа и воспалительными процессами
в матке. На почве листериоза может возникнуть мастит, сопровождающийся
длительным выделением возбудителя с молоком. Прогноз при этих формах, как
правило, благоприятный. У телят и ягнят листериоз протекает в виде
септицемии (понос, лихорадка), в отдельных случаях сопровождается
поражением центральной нервной системы.
У взрослых свиней обнаруживают исхудание, отмечаются анемия
снижение аппетита, нарушение координации движений, кашель, абсцессы в
различных органах и тканях. У поросят поражается центральная нервная
система: расстройство координации движений, своеобразная ходульная
походка, манежные движения, мышечная дрожь, приступы судорог, возбуждение.
Температура тела в начальный период заболевания обычно повышена, а затем
снижается. При септической форме болезни отмечают угнетение, отказ от
корма, слабость, затрудненное дыхание, посинение кожи в области ушей и
живота, иногда — признаки катарального энтерита. Температура тела повышена.
Длительность болезни до 3 суток. Поросята чаще всего погибают [19].
У птиц листериоз проявляется как септическое заболевание. Болеют
цыплята и молодые куры. Они теряют аппетит, становятся малоподвижными;
наблюдаются конъюнктивиты, учащение дыхания прогрессирующая слабость,
судороги, параличи; через 3 - 5 дней наступает смерть.
Патологоанатомические изменения. При нервной форме ярко выраженных
признаков, патогномичных для этой болезни, установить, как правило, не
удается. Обнаруживают лишь инъекцию сосудов и отек мозга, кровоизлияния в
мозговой ткани и в отдельных внутренних органах. При гистологическом
исследовании серого и белого вещества мозга отмечают различной величины
очаговые и диффузные клеточные инфильтраты, состоящие из полиморфноядерных
лейкоцитов, гистеоцитов, глиальных элементов. В очагах поражения часто
наблюдается дезинтеграция нервной ткани, дистрофические и некробиотические
изменения нервных элементов и клеток инфильтратов, а так же скопление
листерий [20].
При септической форме болезни регистрируют гиперемию или отек легких,
катар слизистых оболочек пищеварительного тракта, кровоизлияния в сердечной
мышце и паренхиматозных органах, увеличение селезенки, дегенеративные
изменения и некротические очажки в печени, селезенке, почках, миокарде;
увеличение лимфоузлов.
При поражении половых органов у самок обнаруживают эндометрит или
метрит.
1.2 Профилактика, диагностика и лечение листериоза
сельскохозяйственных животных
Диагноз на листериоз ставят на основании комплекса клинических,
патологоанатомических, микробиологических и серологических исследований.
Трудности диагностики листериоза заключаются в разнообразии клинических
проявлений болезни. При дифференциальной диагностике необходимо исключить
такие инфекционные заболевания как вибриоз, болезнь Ауески, бешенство,
колибактериоз (отечная болезнь).
При подозрении на листериоз в ветеринарную лабораторию направляют
головной мозг, кусочки печени и селезенки, почки, трубчатую кость,
абортированный плод, истечения из половых органов абортировавших животных
[21]. Бактериологическое исследование включает микроскопирование
патологического материала, посев его на питательные среды, постановку
биологической пробы, выделение штаммов листерий и изучение их
морфологических, культуральных, биохимических и серологических (антигенных)
свойств.
При просмотре мазков-отпечатков обращают внимание на палочки, которые
располагаются одиночно, в виде римской цифры V, или палисадом.
Для культивирования листерий готовят суспензию из головного мозга и
других органов, затем пастеровской пипеткой проводят обильные посевы на
питательные среды. Для этого можно использовать широкий спектр питательных
сред: МПБ, МПА, бульон Хоттингера, картофельный агар, мозговой агар,
кровяной агар, сердечно- мозговой бульон, триптически-соевую среду [22].
Биологическая идентификация выделенных культур основана на постановке
конъюнктивальной пробы и заражении белых мышей. Классический метод проверки
патогенности листерий - глазная проба Антона. Этот тест открыт в 1934 году.
Суть его в следующем: после введения капли молодой бульонной культуры, или
взвеси листерий в конъюнктивальный мешок развивается через 24 – 48 часа
гнойный конъюнктивит, завершающийся кератитом. Это воспаление является
обычно скоро проходящим и оставляет после себя местный иммунитет. Наряду с
конъюнктивальной пробой вирулентность листерий изучают на белых мышах.
Суточную бульонную культуру (0,2 мл) вводят интраперитонеально. На 2 - 5
день животные, как правило, погибают, на вскрытии отмечаются типичные
патологоанатомические изменения: мелкие, множественные некротические очажки
в печени, селезёнке, почках.
Одним из отличительных признаков листерий является их подвижность,
которую проводят методом висячей или раздавленной капли, а так же посевом в
полужидкий МПА. На подвижность исследуют 6-18 часовую бульонную культуру,
выращенную при комнатной температуре (22ºС). Листерии, выращенные при
данной температуре, обладают активной подвижностью [23]. Е.А. Зайцева
рекомендует использовать 0,3% полужидкий агар с добавлением к нему 2, 3, 5-
фенилтетрамизолия хлористого. Подвижные при 22°С листерии в 0,3% полужидком
агаре вызывают помутнение среды с окрашиванием зоны помутнения в малиново-
розовый цвет.
Для исследования сывороток крови животных с целью обнаружения
листериозных агглютинирующих макроглобулиновых и микроглобулиновых антител
используют классическую (пробирочную) реакцию агглютинации. Для РА
применяют два антигена (первой и второй серогруппы), представляющие собой
взвесь листерий, инактивированных кипячением. РА признаётся положительной с
оценкой не менее чем на два креста в разведениях сыворотки 1:200 для овец,
коз, и свиней, 1:400 для лошадей и крупного рогатого скота [24].
Несмотря на имеющиеся методы диагностики листериоза исследователи
Центра по листериям Института гигиены и эпидемиологии Бельгии (Брюссель)
предлагают применять для ускоренного выявления возбудителя
иммунофлюоресценцию, иммуноферментный анализ, ПЦР. Однако их использование
в бактериологической практике пока ограничено. Основная область
использования экспресс – методов – выявление листерий в продуктах питания.
Так, для обнаружения листерий в молоке применяют ПЦР. Этот метод
высокоспецифичный и чувствительный [25]. Для постановки ПЦР применяют
праймеры О - листериолизина. Для обнаружения возбудителя листериоза в
организме животных, кормах и объектах внешней среды используют реакцию
нарастания титра фага (РНФ). РНФ быстрый специфический метод обнаружения
листерий, обеспечивающий выявление возбудителя без выделения его культуры.
РНФ основана на свойстве так называемого индикаторного бактериофага строго
специфично размножаться только в клетках гомологичного микроба [26].
Реакция связывания комплемента (РСК) с листериозным антигеном применяется
для исследования на листериоз сывороток крови всех видов животных и
человека. Ценность этой реакции состоит в том, что она ускоряет постановку
диагноза и позволяет выявлять больных животных, не имеющих выраженных
клинических признаков болезни (листерионосителей).
Лечение. Для лечения подозреваемых в заражении животных применяют
биомицин в дозе 20 мг, террамицин в дозе 25 мг, биоветин в дозе 100 мг на 1
кг веса животного 1 - 2 раза в день в течение 5 - 7 дней. Биомицин и
террамицин вводят внутримышечно, биоветин - внутрь. При необходимости курс
обработки повторяют через 5 - 6 дней. Для лечения поросят-отъемышей можно
применять стрептомицин по 150000-200000 ЕД внутримышечно 2 раза в день в
течение 2-3 дней. Применяют также сульфантрол внутрь овцам 1-3 г, свиньям 1
- 2 г 3 - 4 раза в день или внутримышечно (в 5% растворе) в дозе 0,01 г
препарата на 1 кг веса животного [27, 28]. Например, в Грузии для лечения
крупного рогатого скота применяли новарсенол в дозе 0,015 на кг веса
животного внутривенно. Двукратная инъекция новарсенола с промежутками в 48
часов оказалась достаточной для их выздоровления. Хорошее лечебное действие
оказывает бициллин - 1 и бициллин - 3. Его применяют в дозах по 300000 ЕД 1
раз в день. Улучшение в состоянии больных наблюдают через 4-6 дней. При
рецидивах препарат вводят повторно в тех же дозах [29].
Успех лечения зависит от стадии болезни и формы ее течения. Чем раньше
применено лечебное средство, тем больше надежды на благополучный исход.
Для профилактики листериоза в неблагополучных хозяйствах следует
рекомендовать применение йодистого калия путём введения в организм животных
методами подкожной инъекции или групповой дачи с кормом, а также с водой
[30]. Муштоватова Л. С. установила, что практическое и терапевтическое
введение глюкуроната натрия приводит к увеличению функциональной активности
клеток макрофагальной системы при листериозной инфекции [31].
Переболевшие животные приобретают относительный иммунитет, так как
возбудитель листериоза является внутриклеточным паразитом. Исследования
последних лет показали, что в процессе переболевания листериозом в
организме накапливаются различные антитела. Однако гипериммунные сыворотки,
несмотря на наличие антител в высоких титрах, не обладают ни
профилактическими, ни лечебными свойствами.
В целях профилактики листериоза необходимо строго соблюдать
ветеринарно-санитарные и зоогигиенические правила, постоянно контролировать
качество кормов, вести борьбу с грызунами.
Немаловажным значением в профилактике листериоза играет вакцинация
животных. На втором международном симпозиуме по листериозной инфекции было
отмечено, что убитые вакцины не создают иммунитета. Так, Ивелет (США)
показал, что убитые формалином деповакцины не обладают защитным действием.
Асахи (Япония) также не наблюдал иммунитета при испытании на мышах вакцин,
убитых нагреванием, формалином и алкоголем. Следовательно, при
использовании убитых вакцин нельзя рассчитывать на возникновение
невосприимчивости [32].
Иммунологическая перестройка, ведущая к невосприимчивости может быть
решена лишь с помощью живых вакцин из слабо вирулентных штаммов, с прочно
фиксированными свойствами, которые вызывали бы переболевание организма, а
следовательно, его невосприимчивость к последующему заражению. Первым, из
исследователей пытавшимся получить активную вакцину по борьбе с
листериозом, был Олафсон (1940). Однако его результаты вряд ли могут
свидетельствовать о том, что изготовленная им вакцина обладала какими-то
иммуногенными свойствами [33]. В Германии, в условиях овцеводческих
хозяйств испытывали живую вакцину, разработанную в Болгарии. Эта вакцина
значительно снизила отход животных, однако она не создавала иммунитета у
суягных маток [34]. Фомичев В.А. также пытался разработать вакцину. Он в
результате ряда опытов пришёл к выводу, что с помощью 1 % новокаина и
температуры в 25°С и 36°С можно ослабить вирулентные свойства листериозной
клетки. Отобранную культуру 537 - 25 - 5 он испытывал на овцах как
вакцинный штамм, но, к сожалению, эта вакцина не зарекомендовала себя из-за
низких иммуногенных свойств. Следующими в попытке создать вакцину были
ученые Азербайджанского НИВИ А. А. Аннагиев и М. К. Ганиев. Они в
результате ряда исследований подобрали спонтанно - слабовирулентную
культуру (штамм "А"), которая вызывала у животных заболевание, подобное
естественной инфекции, но протекающее в более легкой форме. Штамм "А" был
выделен от пастбищных клещей. У подобранного листериозного штамма детально
изучались морфологические, культурально - биохимические, вирулентные и
иммуногенные свойства, а также стабильность культуры [35].
Исходя из выше перечисленного, следует, что в настоящее время
ухудшение ситуации в области распространенности и иммунопрофилактики
листериоза сельскохозяйственных животных связано с рядом причин:
• первое – широкая распространенность листерий в природе, их
убиквитарность;
• второе – многообразие клинических проявлений инфекции, делающих
диагностику очень сложной, а также отсутствие подготовленной лабораторной
базы.
Необходимо совершенствовать санитарно – эпидемиологический надзор за
распространением листериозной инфекции, разрабатывать более современные
средства специфической профилактики доступных для применения в практических
целях.
Обзор литературных данных, а так же анализ научных исследований
показал, что существует необходимость выполнения исследований по разработке
средств для специфической профилактики листериоза не только среди
сельскохозяйственных животных, но и среди домашних (в частности собак). Эти
данные обусловили выбор направления и обоснование наших исследований.
2. Собственные исследования
2.1 Материалы и методы исследований
Работа выполнена в период с 2005 по 2007 год в лаборатории
противобактериозной биотехнологии Казахского Национального Аграрного
Университета (КазНАУ), в лаборатории генетики вирулентности бактерий
Всероссийского научно – исследовательского института эпидемиологии и
микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи (г. Москва), в хозяйствах Алматинской
области Республики Казахстан.
Для проведения исследований по распространенности листериоза
сельскохозяйственных животных материалом для бактериологических
исследований служили различные органы от 16 голов абортированных ягнят. Для
выделения культуры возбудителя листериоза делали высевы из крови сердца,
печени, костного мозга абортированных ягнят.
Для получения первичных культур листерий проводили посевы на мясо –
пептоном агаре (МПА), мясо – пептоном бульоне (МПБ). Первичный отбор
культур и определение видовой принадлежности проводили на основании
характерных морфологических, тинкториальных, культурально-биохимических
свойств.
Идентификацию выделенных культур по биохимическим свойствам проводили
по определителю Берджи (1994). Ферментацию углеводов определяли на 0, 075%
полужидком агаре (ПЖА) с индикатором Андредэ, с различными сахарами и
многоатомными спиртами. Учёт ферментативной активности культур проводили в
течение 10 суток.
Вирулентность культур листерий изучали на беспородных белых мышах,
которые заражались суточной культурой подкожно в дозах -104, -105, 2x105,
5x105, 106 колониеобразующих единиц (КОЕ).
Выделенные листерии проверяли на чувствительность к антимикробным
агентам с помощью классического метода Кирби и Бауэра. Чашки Петри
заполнялись МПА слоем 4 – 5 мм. После застывания агар подсушивали в
термостате при 37ºС в течение 20 мин, после чего наслаивали микробную
взвесь в концентрации 105 КОЕ на один мл физиологического раствора. После
посева исследуемой культуры на агар наносили диски, пропитанные
левомицитином, ампицилином, неомицином, мономицином, стрептомицином,
пенициллином, полимиксином и эритромицином.
В работе использовали аттенуированный штамм Listeria monocytogenes Л-
20, полученный в результате совместной работы с сотрудниками лаборатории
генетики вирулентности бактерий Научно – исследовательского института
эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи под руководством профессора
Бияшева К. Б.
Штамм Listeria monocytogenes Л-20 получен в результате трансдукции
вирулентных штаммов Listeria monocytogenes и на основе метода отбора
мутантных клонов вирулентного штамма ему были приданы мутанты, связанные со
снижением вирулентности.
Полученный штамм L. monocytogenes Л-20 депонирован в музее культур
микроорганизмов Научно - исследовательского института проблем биологической
безопасности Министерства образования и науки Республики Казахстан.
Изучение аттенуированного вакцинного штамма проводилось в сравнении с
вирулентной культурой L. monocytogenes.
Морфология и культуральные свойства вакцинного штамма изучались при
многократных пересевах на твердых, полужидких и жидких питательных средах.
Основное внимание обращалось на возможность диссоциации, что
контролировалось по характеру роста на средах и стабильности нативных и
гретых суспензий культур.
Остаточная вирулентность исследована на 30 беспородных белых мышах
живой массой 14 – 16 г, 20 морских свинках живой массой 250 – 300 г с
учетом их реакции на введение вакцинного штамма, высеваемости и
диссеминации вакцинной культуры при различных дозах.
Всего при выполнении исследований на лабораторной модели было
использовано 125 белых мышей, морских свинок 60, овец 30. В
производственных условиях для изучения эффективности разработанной вакцины
было иммунизировано вакцинным штаммом L. monocytogenes Л-20 - 610 овец.
Для проведения научно – исследовательских работ использована следующая
аппаратура: термостаты Е - 2, автоклавы, дистилляторы, сушильные шкафы,
весы АТМ 39А - 1000, микроскоп бинокулярный "Биолам", центрифуга MPW – 310,
центрифуга MPW – 314, центрифуга ЦПР 5 – 01, рН- метры 5170, ЭВ – 74,
пипетки, микродозаторы на 50 – 250, 250 – 1000 мкл, колбы Тартаковского,
чашки Петри, микробиологические пробирки, посуда лабораторная стеклянная,
пипетки градуированные (ГОСТ 20227-91), МПА, МПБ с применением пептона
сухого ферментативного для бактериологических целей (ГОСТ 13805-76), натрия
хлористого (ГОСТ 4233-77), воды дистиллированной (ГОСТ 6709-72), агара
пищевого (ГОСТ 16280-88), агара микробиологического (ГОСТ 17206-84).
3. Результаты исследования
3.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных в
хозяйствах Алматинской области
Листериями могут быть инфицированы домашние и дикие животные
различных видов, в том числе мыши, крысы, кролики, куры, кошки, собаки,
свиньи, коровы и овцы. У животных листериоз может протекать латентно, но
возбудитель выделяется в больших количествах с мочой, испражнениями,
носовой слизью, молоком, околоплодной жидкостью. Человек заражается при
употреблении мяса и молока больных животных, а также загрязненной пищи и
воды. Заражение возможно при контакте с больными животными; при вдыхании
пыли, содержащей листерии (при обработке шкур, шерсти, уходе за животными).
Распространены листерии повсеместно, во всех природных зонах,
поскольку листерии передаются человеку прямо или косвенно от больного
животного, есть основание считать листериоз зооантропонозом [35].
Исходя из вышеизложенного, целью нашей работы являлось исследование
распространения листериоза в крестьянских хозяйствах "Топар" Балхашского
района и "Мұра" Енбекшиказахского района Алматинской области, а так же
изучение распространенности листериоза ... продолжение
Вы можете абсолютно на бесплатной основе полностью просмотреть эту работу через наше приложение.
Введение 5
1. Обзор литературы 8
1.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных 8
1.2 Профилактика, диагностика и лечение листериоза 15
сельскохозяйственных животных
2. Собственные исследования 22
2.1 Материалы и методы 22
3. Результаты исследования 25
3.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных в 25
хозяйствах алматинской области
3.2 Биологические свойства вакцинного штамма Listeria monocytogenes28
Л-20
3.3 Исследования реактогенных свойств вакцинного штамма Listeria 33
monocytogenes Л-20
4. Экономика 39
5. Охрана труда 43
Выводы 46
Практические предложения 47
Список использованных источников 48
Приложения 51
Нормативные ссылки
В настоящей дипломной работе использованы ссылки на следующие
стандарты:
ГОСТ 1530-65 Бумага пергаментная;
ГОСТ 3164-78 Масло вазелиновое медицинское. Технические
условия;
ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый. Технические условия;
ГОСТ 5962 –67 Спирт этиловый ректификат 96%-ный;
ГОСТ 6038-79 Сахара;
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия;
ГОСТ 12923-82 Алигнин медицинский. Технические условия;
ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для
бактериологических целей. Технические условия;
ГОСТ 16280-88 Агар пищевой. Технические условия;
ГОСТ 17206-84 Агар микробиологический. Технические условия;
ГОСТ 20227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки
градуированные;
ГОСТ 20292-74 Колбы мерные вместимостью 100, 200, 1000 см3;
ГОСТ 20730-89 Бульон мясо-пептонный;
ГОСТ 22967 Шприцы инъекционные 2 см3, 5 см3;
ГОСТ 25336-82 Е Посуда и оборудование лабораторные, стеклянные.
Технические условия;
ГОСТ 28085-89
(от СЭВ 6280-88) Определение на стерильность;
ГОСТ 4.452-86 Микроскоп биологический "Биолам";
ТУ 480-11-10 –73 Карандаши по стеклу;
МРТУ 42-102-63 Ножницы разные;
Определения
В настоящей дипломной работе применяют следующие термины с
соответствующими определениями:
Вакцинный штамм – аттенуированный штамм, имеющий стабильные
иммунобиологические свойства;
Остаточная вирулентность – степень относительной стабильности
патогенности;
Иммуногенность – способность микробных антигенов создавать иммунитет к
инфекционным заболеваниям;
Лабораторная модель – исследования на белых мышах и морских свинках.
Обозначения и сокращения
В настоящей дипломной работе применяют следующие обозначения и
сокращения:
ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения
МПБ - мясопептонный бульон
МПА - мясопептонный агар
ПЖА – полужидкий агар
ЕД - иммунизирующая доза
ЛД50 - 50 % летальная доза
ИФА - иммуноферментный анализ
КОЕ - колониеобразующие единицы
РА – реакция агглютинации
РСК – реакция связывания комплемента
РНФ – реакция нарастания титра фага
ПЦР – полимеразная цепная реакция
Введение
Актуальность темы. Получение животноводческой продукции высокого
качества от сельскохозяйственных животных и эстетическое удовлетворение от
контакта с домашними животными возможно только при наличии у них здоровья.
И поэтому, для ветеринарных специалистов актуальной задачей является
предупреждение и ликвидация инфекционных болезней, которые наносят большой
экономический ущерб животноводству, а так же могут передаваться и человеку.
К числу таких болезней относится листериоз – заболевание, представляющее
актуальную медико – ветеринарную проблему.
Обладая выраженной пластичностью свойств, возбудитель листериоза
высокоустойчив во внешней среде и при определенных условиях не только
длительно выживает, но и способен размножаться [1,2].
Диагностику болезни затрудняет большое количество серологичесих типов
листерий, а так же их способность поражать многие виды животных. Бактерии
рода Listeria широко распространены в биотических и абиотических объектах
окружающей среды, обнаружены более чем у 100 видов животных, птиц,
членистоногих [3].
По данным рабочей группы ВОЗ (1997) для человека наибольшую
опасность представляют скрытые листерионосители и получаемые от них
продукты питания (молоко, сыры, мясо) и навоз, который, в качестве
удобрения вывозят на поля, что приводит к обсеменению внешней среды. По
количеству выявленных случаев, листериоз значительно уступает
сальмонеллезам и кампилобактериозам, но превосходит их по летальности и
тяжести клинического течения. Так, из 2518 больных листериозом, выявленных
в США в 1997 году у 20% наступил летальный исход, а госпитализация больных
требовалась в 92% случаях [4,5]. Наибольшую опасность листерии
представляют для беременных женщин и новорожденных. Регистрация и учет
листериоза у людей, как самостоятельной, нозологической формы введена
Минздравом Республики Казахстан в 1992 году.
Листериоз животных в Казахстане впервые диагностирован в 1953 году
С.А. Аманжуловым. Листериоз у животных протекает в форме септицемии,
поражения центральной нервной системы, абортов, или в форме бессимптомного
носительства. Л.Ф. Зыкин при исследовании 203 проб молока и молочных
продуктов изолировал 4 штамма Listeria monocytogenes. Листерии могут
вызывать маститы у крупного рогатого скота, которые часто не выявляются.
Подобные животные выделяют 25-30 тысяч клеток листерий в 1 мл молока [6].
Исходя из вышеперечисленного, в основе борьбы с бактериями рода
Listeria лежит специфическая профилактика животных, соблюдение
зоогигиенических условий при их содержании, выявления бактерионосителей, а
так же исследование продуктов животного происхождения на обсемененность их
листериями.
Цели и задачи исследований. Основной целью наших исследований было
изучение и сравнение высокоэффективных средств специфической профилактики,
проведение анализа причин распространения листериоза в хозяйствах, а так же
исследование свойств вакцинного штамма против листериоза
сельскохозяйственных животных. Исходя из вышеперечисленного, нами были
выделены следующие задачи:
1. Изучить факторы распространения листериоза
2. Исследовать биологические и реактогенные свойства вакцинного
штамма Listeria monocytogenes Л-20 на лабораторной и производственной
модели.
Научная новизна работы. Были исследованы биологические, реактогенные
свойства нового вакцинного штамма Listeria monocytogenes Л-20. Полученны
экспериментальные данные о свойствах вакцинного штамма Listeria
monocytogenes Л-20 на лабораторной и производственной модели . Результаты
исследования показали, что вакцинный штамм при введении не вызывает
побочных действий, то есть слабореактогенный, обладает генетическими
метками, а так же культуральными и морфологическими признаками,
характерными для бактерий рода Listeria.
1. Обзор литературы
1.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных
Листериоз – Listeriosis (cинонимы: листереллез, болезнь реки Тигр,
невреллез) – инфекционная болезнь животных и человека, характеризующаяся у
животных поражением нервной системы, септическими явлениями, абортами.
Листериоз у человека проявляется как пищевая инфекция. Листериозная
инфекция обусловливает выкидыши, мертворождение, развитие пороков плода, а
также менингиты, сепсис и пневмонию у новорожденных [7].
Можно выделить три основных этапа во взаимоотношениях листерий и
человека. Первый до 50-х годов, когда в мире было выявлено не более 70
случаев листериоза, как правило, у людей, непосредственно контактировавших
с зараженными животными (работники скотобоен, фермеры-животноводы, доярки).
Второй-50-70-е годы. Число случаев листериоза достигает нескольких тысяч.
Эта инфекция рассматривается как весьма опасный зооноз с высокой
летальностью, но большинство случаев по-прежнему связаны с
сельскохозяйственными регионами и употреблением сырого молока, контактом с
больными животными, в том числе грызунами. Третий -80-е годы - по настоящее
время [8].
Листерии давно известны микробиологам и эпидемиологам всего мира. В
1926 г. Мюррей, Уэбб и Сванн в Кембридже при вспышке эпизоотии в питомнике
среди кроликов и морских свинок выделили микроб, которым удавалось
экспериментально заражать кроликов и вызывать у них в процессе болезни
характерные изменения белой крови с выраженным моноцитозом. Годом позже
Пири описал, как это вскоре выяснилось, точно такого же микроба, которого
он выделил в Южной Африке от крысоподобного грызуна Tatera Lobengulae.
Инфекция носила местное название Tiger River disease (болезнь реки Тигр)
[9]. В 1940 г. возбудителя назвали Listeria, в честь английского хирурга Д.
Листера.
Возбудитель листериоза – психрофильная факультативно – анаэробная
маленькая гамположительная бактерия с закругленными концами длиной 0,5-2
мкм и шириной 0,5 мкм. В зависимости от условий культивирования она
способна принимать кокковидную или овоидную форму, в культурах, выращенных
при комнатной температуре преобладают палочковидные формы, а в культурах,
выращенных при температуре 37°С - кокковидные и овоидные формы.
Показательной особенностью листерий является четко выраженная подвижность
клетки. Специфика проявления подвижности у листерий (дифференциальный
признак от рожистых бактерий), связана с наличием жгутиков, спор и капсул
не образуют. Свойство листерий вызывать моноцитоз послужило основанием для
названия вида. В настоящее время в род Listeria входят следующие виды
Listeria monocytogenes, L.ivanovii, L.seeligeri, L. welshimeri, L.innocua,
L.grayi. Бактерии рода Listeria широко распространёны в биотических и
абиотических объектах окружающей среды (почве, воде, растениях, пищевых
продуктах, обнаружены более чем у 100 видов животных, птиц, рыб,
членистоногих). Из шести видов заболевание листериозом у человека и
животных вызывает вид L.monocytogenes. В последнее время в литературе
появились единичные сообщения о заболеваниях, вызванных L.ivanovii [10].
Листерии не относятся к числу микроорганизмов, культивирование
которых представляет какие – либо трудности. Микроб растет на обычных
питательных средах с дольно широким диапазоном рН (5,6 - 9,0). Наиболее
благоприятными следует считать среды с рН 7,2 - 7,4, содержащие глицерин,
глюкозу, сыворотку крови, а так же печеночные среды. Лучшей питательной
средой является мясопептонный печеночный агар и бульон с добавлением 0,5%
глюкозы и 2% глицерина. На МПА в первые сутки роста наблюдаются мелкие,
слизистые, круглые, прозрачные при проходящем или молочно – белые в
падающем свете выпуклые колонии. На МПБ листерии в начале вызывают
равномерное помутнение среды; при встряхивании пробирки заметны муаровые
волны. На 5 - 7 сутки бульон просветляется и на дне образуется слизистый
осадок, который при встряхивании поднимается в виде косички. При посеве
уколом на МПЖ, листерии дают медленный рост в виде узловатой нити или
полоски с небольшими отростками. Культуры листерий издают запах,
напоминающий запах кислого молока, или прогорклого масла. Интенсивность
этого запаха находится в прямой зависимости от пышности роста культуры и
обусловлена продуктами углеводного обмена, образующимися в процессе роста
листерий. Этот признак используется как вспомогательный в практический
работе с культурами листерий [11]. При выделении листерий из загрязненного
патологического материала целесообразно использовать бульонные среды с
роданитом калия и агаровые среды с налидиксовой кислотой [12].
Листерии, по мнению большинства исследований по биохимическо –
ферментативным свойствам принадлежат к малоактивным видам бактерий. Они не
образуют индола, аммиака, не восстанавливают нитраты в нитриты, не
свертывают и не пептонизируют молоко, не гидролизуют мочевину. Постоянным
признаком листерий, который в числе прочих может быть использован для целей
дифференциации их от эризипелотриксов, является каталазная активность.
Листерии способны ферментировать с образование кислоты (без газа) глюкозу,
рамнозу, салицин, левулезу, но не изменяют среду с дульцином, маннитом,
арабинозой, сорбитом [13,14].
По наличию термолабильных жгутиковых (Н) и термостабильных
соматических (О) антигенов листерии подразделяются на подтипы (а, в, с, е).
Хотя известно не менее 16 сероваров L. monocytogenes большая часть всех
случаев листериоза (90%) вызывают возбудители типов 4в, 1в, 1а.
Листерии устойчивы во внешней среде. Они длительно сохраняются в
испражнениях, почве, зерне, во льду, могут размножаться при температуре +4
- +6 ("микроб холодильника"). Листерии способны вести сапрофитный образ
жизни, они встречаются в загрязненной стоками озерной, морской и речной
воде, особенно в прибрежной зоне. Возбудитель листериоза селится на
поверхности тел рыб, и используют в качестве источника питания эскулин
рыбьей слизи. Листерии инактивируются под воздействием солнечных лучей.
Гибель микроорганизмов происходит при температуре 70°С через 20 – 30 мин.,
при 100°С в течении 5-10 мин. Возбудитель неустойчив к обычным
дезинфицирующим веществам в рабочих концентрациях: 0,5-1,0% раствор
формалина, 3-5% раствор хлорамина.
В проявлении листериза большую роль играют предрасполагающие факторы.
По отдельным данным зарубежных исследователей, проявлению листериоза может
способствовать скармливание силоса. В Исландии эту связь считают настолько
очевидной, что называют листериоз силосной болезнью. Источником инфекций
при листериозе являются больные животные и листерионостиели, в частности,
грызуны и птицы, которые выделяют возбудителя во внешнюю среду с мочой,
калом, выделениями из носовой полости, глаз, половых органов, а так же
околоплодной жидкости и молоком. Листерионосительство длится у переболевших
овец не менее 30 дней, у коров – до 300 дней, у некоторых видов грызунов –
до 260 дней, в организмах клещей листерии могут сохранятся свыше 500 дней
[15]. Переносчиками возбудителя у животных могут быть кровососущие
членистоногие (иксодовые клещи), а так же различные виды блох и вшей.
По данным Мека – Меченко Т.В. возбудитель листериоза выявлен у 14
видов грызунов в Кызылординской, Западно-Казахстанской, Алматинской,
Атырауской и Актюбинской областях. Наиболее высокий процент зараженности
среди грызунов отмечен у серой крысы, домовой мыши.
Листериоз зарегистрирован в городе Алматы – 14 культур от грызунов, 4
– от блох. Листериоз у грызунов регистрировался в течение всего года.
Штаммы листерий, выделенные от синантропных грызунов проявляли достаточно
высокую вирулентность [16]. Поэтому, грызунам и другим видам диких животных
отводится важная роль в инфицировании внешней среды и формировании
природных очагов этой инфекции. При листериозе имеет место многообразие
механизмов передачи возбудителя инфекции: алиментарный, контактный,
аспирационный, трансплацентарный.
Эпизоотические данные. К листериозу восприимчивы: мелкий рогатый скот,
крупный рогатый скот, свиньи, лошади, кролики, куры, гуси, утки, индейки.
Отмечена болезнь у пушных зверей, а так же у форелей в рыбопитомниках. В
республике Казахстан листериоз принял широкое распространение среди овец и
собак города Алматы. Болеют листериозом животные всех возрастов, особенно
чувствительны молодняк и беременные животные. Листериоз проявляется
спорадически, реже – в виде эпизоотий. Болезнь носит сезонный характер и
чаще проявляется в зимне-весенний период. Это связано с влиянием ряда
факторов, в частности, в этот период активизируется механизм передачи
возбудителя инфекции, грызуны мигрируют осенью в помещения. Кроме того,
неспецифическая резистентность организма животных к данному времени
снижается.
Для листериоза характерна стационарность – болезнь повторяется в одних
и тех же пунктах, что связано с длительным листерионосительством у
животных, сохраняемостью листерий во внешней среде, существованием
природных очагов листериоза, где болезнь поддерживается в дикой фауне и
различными путями передается сельскохозяйственным животным.
Патогенез. Заражение животных листериозом в естественных
условиях происходит через слизистую оболочку носовой и ротовой полостей,
конъюнктиву, пищеварительный тракт, поврежденную кожу. Внедрение листерий в
организм может привести к развитию сепсиса, поражению отдельных органов и
систем, а также к бессимптомному переболеванию. Возникновение различных
форм болезни зависит от вирулентности микроба, инфицирующей дозы, путей
заражения, а так же от возраста животного, физиологического состояния
(беременность), характера кормления и содержания, наличия сопутствующих
заболеваний.
Распространение листерий по организму происходит нейрогенным (по
периневральным путям), лимфогенным и гематогенным путями. Листерии попадают
в различные органы, в том числе, преодолевая защитный барьер, проникают в
головной мозг. По современным представлениям, листерии в организме в
основном размножаются внутри макрофагов. Инфицированным свободным и
фиксированным макрофагам отводится особая роль в распространении и
сохранении листерий в организме. У взрослых животных чаще поражается
центральная нервная система, а в период беременности — половая система. У
молодняка развивается сепсис, а затем генерализованный гранулематоз. У
взрослых животных болезнь протекает иногда бессимптомно, при этом животные
длительное время остаются носителями листерий. Длительное
листерионосительство обусловлено неспособностью макрофагов полностью
фагоцитировать возбудителя, чему также способствует продолжительный (до
года) срок жизни макрофагов [17,18].
Течение и симптомы. Инкубационный период 7 - 30 дней. Течение болезни
острое, подострое, хроническое. Болезнь проявляется несколькими
клиническими формами: нервной, септической, смешанной, стертой,
бессимптомной, а также с преимущественным поражением половых органов и
молочной железы.
У крупного рогатого скота и овец чаще наблюдают поражение центральной
нервной системы. Заболевание начинается угнетением, вялостью, снижением
аппетита, необычным поведением животного. Через 1 - 7 дней отмечают
некоординированные, нередко круговые движения, потерю равновесия, судороги,
иногда приступы буйства, парезы отдельных групп мышц, искривление шеи,
потерю зрения, конъюнктивит, стоматиты, оглумоподобное состояние.
Температура тела повышена в начале болезни или остается в пределах нормы.
Длительность болезни до 10 суток и в большинстве случаев заканчивается
гибелью больных животных. Другая форма болезни — поражение половой системы,
она проявляется абортами, задержанием последа и воспалительными процессами
в матке. На почве листериоза может возникнуть мастит, сопровождающийся
длительным выделением возбудителя с молоком. Прогноз при этих формах, как
правило, благоприятный. У телят и ягнят листериоз протекает в виде
септицемии (понос, лихорадка), в отдельных случаях сопровождается
поражением центральной нервной системы.
У взрослых свиней обнаруживают исхудание, отмечаются анемия
снижение аппетита, нарушение координации движений, кашель, абсцессы в
различных органах и тканях. У поросят поражается центральная нервная
система: расстройство координации движений, своеобразная ходульная
походка, манежные движения, мышечная дрожь, приступы судорог, возбуждение.
Температура тела в начальный период заболевания обычно повышена, а затем
снижается. При септической форме болезни отмечают угнетение, отказ от
корма, слабость, затрудненное дыхание, посинение кожи в области ушей и
живота, иногда — признаки катарального энтерита. Температура тела повышена.
Длительность болезни до 3 суток. Поросята чаще всего погибают [19].
У птиц листериоз проявляется как септическое заболевание. Болеют
цыплята и молодые куры. Они теряют аппетит, становятся малоподвижными;
наблюдаются конъюнктивиты, учащение дыхания прогрессирующая слабость,
судороги, параличи; через 3 - 5 дней наступает смерть.
Патологоанатомические изменения. При нервной форме ярко выраженных
признаков, патогномичных для этой болезни, установить, как правило, не
удается. Обнаруживают лишь инъекцию сосудов и отек мозга, кровоизлияния в
мозговой ткани и в отдельных внутренних органах. При гистологическом
исследовании серого и белого вещества мозга отмечают различной величины
очаговые и диффузные клеточные инфильтраты, состоящие из полиморфноядерных
лейкоцитов, гистеоцитов, глиальных элементов. В очагах поражения часто
наблюдается дезинтеграция нервной ткани, дистрофические и некробиотические
изменения нервных элементов и клеток инфильтратов, а так же скопление
листерий [20].
При септической форме болезни регистрируют гиперемию или отек легких,
катар слизистых оболочек пищеварительного тракта, кровоизлияния в сердечной
мышце и паренхиматозных органах, увеличение селезенки, дегенеративные
изменения и некротические очажки в печени, селезенке, почках, миокарде;
увеличение лимфоузлов.
При поражении половых органов у самок обнаруживают эндометрит или
метрит.
1.2 Профилактика, диагностика и лечение листериоза
сельскохозяйственных животных
Диагноз на листериоз ставят на основании комплекса клинических,
патологоанатомических, микробиологических и серологических исследований.
Трудности диагностики листериоза заключаются в разнообразии клинических
проявлений болезни. При дифференциальной диагностике необходимо исключить
такие инфекционные заболевания как вибриоз, болезнь Ауески, бешенство,
колибактериоз (отечная болезнь).
При подозрении на листериоз в ветеринарную лабораторию направляют
головной мозг, кусочки печени и селезенки, почки, трубчатую кость,
абортированный плод, истечения из половых органов абортировавших животных
[21]. Бактериологическое исследование включает микроскопирование
патологического материала, посев его на питательные среды, постановку
биологической пробы, выделение штаммов листерий и изучение их
морфологических, культуральных, биохимических и серологических (антигенных)
свойств.
При просмотре мазков-отпечатков обращают внимание на палочки, которые
располагаются одиночно, в виде римской цифры V, или палисадом.
Для культивирования листерий готовят суспензию из головного мозга и
других органов, затем пастеровской пипеткой проводят обильные посевы на
питательные среды. Для этого можно использовать широкий спектр питательных
сред: МПБ, МПА, бульон Хоттингера, картофельный агар, мозговой агар,
кровяной агар, сердечно- мозговой бульон, триптически-соевую среду [22].
Биологическая идентификация выделенных культур основана на постановке
конъюнктивальной пробы и заражении белых мышей. Классический метод проверки
патогенности листерий - глазная проба Антона. Этот тест открыт в 1934 году.
Суть его в следующем: после введения капли молодой бульонной культуры, или
взвеси листерий в конъюнктивальный мешок развивается через 24 – 48 часа
гнойный конъюнктивит, завершающийся кератитом. Это воспаление является
обычно скоро проходящим и оставляет после себя местный иммунитет. Наряду с
конъюнктивальной пробой вирулентность листерий изучают на белых мышах.
Суточную бульонную культуру (0,2 мл) вводят интраперитонеально. На 2 - 5
день животные, как правило, погибают, на вскрытии отмечаются типичные
патологоанатомические изменения: мелкие, множественные некротические очажки
в печени, селезёнке, почках.
Одним из отличительных признаков листерий является их подвижность,
которую проводят методом висячей или раздавленной капли, а так же посевом в
полужидкий МПА. На подвижность исследуют 6-18 часовую бульонную культуру,
выращенную при комнатной температуре (22ºС). Листерии, выращенные при
данной температуре, обладают активной подвижностью [23]. Е.А. Зайцева
рекомендует использовать 0,3% полужидкий агар с добавлением к нему 2, 3, 5-
фенилтетрамизолия хлористого. Подвижные при 22°С листерии в 0,3% полужидком
агаре вызывают помутнение среды с окрашиванием зоны помутнения в малиново-
розовый цвет.
Для исследования сывороток крови животных с целью обнаружения
листериозных агглютинирующих макроглобулиновых и микроглобулиновых антител
используют классическую (пробирочную) реакцию агглютинации. Для РА
применяют два антигена (первой и второй серогруппы), представляющие собой
взвесь листерий, инактивированных кипячением. РА признаётся положительной с
оценкой не менее чем на два креста в разведениях сыворотки 1:200 для овец,
коз, и свиней, 1:400 для лошадей и крупного рогатого скота [24].
Несмотря на имеющиеся методы диагностики листериоза исследователи
Центра по листериям Института гигиены и эпидемиологии Бельгии (Брюссель)
предлагают применять для ускоренного выявления возбудителя
иммунофлюоресценцию, иммуноферментный анализ, ПЦР. Однако их использование
в бактериологической практике пока ограничено. Основная область
использования экспресс – методов – выявление листерий в продуктах питания.
Так, для обнаружения листерий в молоке применяют ПЦР. Этот метод
высокоспецифичный и чувствительный [25]. Для постановки ПЦР применяют
праймеры О - листериолизина. Для обнаружения возбудителя листериоза в
организме животных, кормах и объектах внешней среды используют реакцию
нарастания титра фага (РНФ). РНФ быстрый специфический метод обнаружения
листерий, обеспечивающий выявление возбудителя без выделения его культуры.
РНФ основана на свойстве так называемого индикаторного бактериофага строго
специфично размножаться только в клетках гомологичного микроба [26].
Реакция связывания комплемента (РСК) с листериозным антигеном применяется
для исследования на листериоз сывороток крови всех видов животных и
человека. Ценность этой реакции состоит в том, что она ускоряет постановку
диагноза и позволяет выявлять больных животных, не имеющих выраженных
клинических признаков болезни (листерионосителей).
Лечение. Для лечения подозреваемых в заражении животных применяют
биомицин в дозе 20 мг, террамицин в дозе 25 мг, биоветин в дозе 100 мг на 1
кг веса животного 1 - 2 раза в день в течение 5 - 7 дней. Биомицин и
террамицин вводят внутримышечно, биоветин - внутрь. При необходимости курс
обработки повторяют через 5 - 6 дней. Для лечения поросят-отъемышей можно
применять стрептомицин по 150000-200000 ЕД внутримышечно 2 раза в день в
течение 2-3 дней. Применяют также сульфантрол внутрь овцам 1-3 г, свиньям 1
- 2 г 3 - 4 раза в день или внутримышечно (в 5% растворе) в дозе 0,01 г
препарата на 1 кг веса животного [27, 28]. Например, в Грузии для лечения
крупного рогатого скота применяли новарсенол в дозе 0,015 на кг веса
животного внутривенно. Двукратная инъекция новарсенола с промежутками в 48
часов оказалась достаточной для их выздоровления. Хорошее лечебное действие
оказывает бициллин - 1 и бициллин - 3. Его применяют в дозах по 300000 ЕД 1
раз в день. Улучшение в состоянии больных наблюдают через 4-6 дней. При
рецидивах препарат вводят повторно в тех же дозах [29].
Успех лечения зависит от стадии болезни и формы ее течения. Чем раньше
применено лечебное средство, тем больше надежды на благополучный исход.
Для профилактики листериоза в неблагополучных хозяйствах следует
рекомендовать применение йодистого калия путём введения в организм животных
методами подкожной инъекции или групповой дачи с кормом, а также с водой
[30]. Муштоватова Л. С. установила, что практическое и терапевтическое
введение глюкуроната натрия приводит к увеличению функциональной активности
клеток макрофагальной системы при листериозной инфекции [31].
Переболевшие животные приобретают относительный иммунитет, так как
возбудитель листериоза является внутриклеточным паразитом. Исследования
последних лет показали, что в процессе переболевания листериозом в
организме накапливаются различные антитела. Однако гипериммунные сыворотки,
несмотря на наличие антител в высоких титрах, не обладают ни
профилактическими, ни лечебными свойствами.
В целях профилактики листериоза необходимо строго соблюдать
ветеринарно-санитарные и зоогигиенические правила, постоянно контролировать
качество кормов, вести борьбу с грызунами.
Немаловажным значением в профилактике листериоза играет вакцинация
животных. На втором международном симпозиуме по листериозной инфекции было
отмечено, что убитые вакцины не создают иммунитета. Так, Ивелет (США)
показал, что убитые формалином деповакцины не обладают защитным действием.
Асахи (Япония) также не наблюдал иммунитета при испытании на мышах вакцин,
убитых нагреванием, формалином и алкоголем. Следовательно, при
использовании убитых вакцин нельзя рассчитывать на возникновение
невосприимчивости [32].
Иммунологическая перестройка, ведущая к невосприимчивости может быть
решена лишь с помощью живых вакцин из слабо вирулентных штаммов, с прочно
фиксированными свойствами, которые вызывали бы переболевание организма, а
следовательно, его невосприимчивость к последующему заражению. Первым, из
исследователей пытавшимся получить активную вакцину по борьбе с
листериозом, был Олафсон (1940). Однако его результаты вряд ли могут
свидетельствовать о том, что изготовленная им вакцина обладала какими-то
иммуногенными свойствами [33]. В Германии, в условиях овцеводческих
хозяйств испытывали живую вакцину, разработанную в Болгарии. Эта вакцина
значительно снизила отход животных, однако она не создавала иммунитета у
суягных маток [34]. Фомичев В.А. также пытался разработать вакцину. Он в
результате ряда опытов пришёл к выводу, что с помощью 1 % новокаина и
температуры в 25°С и 36°С можно ослабить вирулентные свойства листериозной
клетки. Отобранную культуру 537 - 25 - 5 он испытывал на овцах как
вакцинный штамм, но, к сожалению, эта вакцина не зарекомендовала себя из-за
низких иммуногенных свойств. Следующими в попытке создать вакцину были
ученые Азербайджанского НИВИ А. А. Аннагиев и М. К. Ганиев. Они в
результате ряда исследований подобрали спонтанно - слабовирулентную
культуру (штамм "А"), которая вызывала у животных заболевание, подобное
естественной инфекции, но протекающее в более легкой форме. Штамм "А" был
выделен от пастбищных клещей. У подобранного листериозного штамма детально
изучались морфологические, культурально - биохимические, вирулентные и
иммуногенные свойства, а также стабильность культуры [35].
Исходя из выше перечисленного, следует, что в настоящее время
ухудшение ситуации в области распространенности и иммунопрофилактики
листериоза сельскохозяйственных животных связано с рядом причин:
• первое – широкая распространенность листерий в природе, их
убиквитарность;
• второе – многообразие клинических проявлений инфекции, делающих
диагностику очень сложной, а также отсутствие подготовленной лабораторной
базы.
Необходимо совершенствовать санитарно – эпидемиологический надзор за
распространением листериозной инфекции, разрабатывать более современные
средства специфической профилактики доступных для применения в практических
целях.
Обзор литературных данных, а так же анализ научных исследований
показал, что существует необходимость выполнения исследований по разработке
средств для специфической профилактики листериоза не только среди
сельскохозяйственных животных, но и среди домашних (в частности собак). Эти
данные обусловили выбор направления и обоснование наших исследований.
2. Собственные исследования
2.1 Материалы и методы исследований
Работа выполнена в период с 2005 по 2007 год в лаборатории
противобактериозной биотехнологии Казахского Национального Аграрного
Университета (КазНАУ), в лаборатории генетики вирулентности бактерий
Всероссийского научно – исследовательского института эпидемиологии и
микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи (г. Москва), в хозяйствах Алматинской
области Республики Казахстан.
Для проведения исследований по распространенности листериоза
сельскохозяйственных животных материалом для бактериологических
исследований служили различные органы от 16 голов абортированных ягнят. Для
выделения культуры возбудителя листериоза делали высевы из крови сердца,
печени, костного мозга абортированных ягнят.
Для получения первичных культур листерий проводили посевы на мясо –
пептоном агаре (МПА), мясо – пептоном бульоне (МПБ). Первичный отбор
культур и определение видовой принадлежности проводили на основании
характерных морфологических, тинкториальных, культурально-биохимических
свойств.
Идентификацию выделенных культур по биохимическим свойствам проводили
по определителю Берджи (1994). Ферментацию углеводов определяли на 0, 075%
полужидком агаре (ПЖА) с индикатором Андредэ, с различными сахарами и
многоатомными спиртами. Учёт ферментативной активности культур проводили в
течение 10 суток.
Вирулентность культур листерий изучали на беспородных белых мышах,
которые заражались суточной культурой подкожно в дозах -104, -105, 2x105,
5x105, 106 колониеобразующих единиц (КОЕ).
Выделенные листерии проверяли на чувствительность к антимикробным
агентам с помощью классического метода Кирби и Бауэра. Чашки Петри
заполнялись МПА слоем 4 – 5 мм. После застывания агар подсушивали в
термостате при 37ºС в течение 20 мин, после чего наслаивали микробную
взвесь в концентрации 105 КОЕ на один мл физиологического раствора. После
посева исследуемой культуры на агар наносили диски, пропитанные
левомицитином, ампицилином, неомицином, мономицином, стрептомицином,
пенициллином, полимиксином и эритромицином.
В работе использовали аттенуированный штамм Listeria monocytogenes Л-
20, полученный в результате совместной работы с сотрудниками лаборатории
генетики вирулентности бактерий Научно – исследовательского института
эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи под руководством профессора
Бияшева К. Б.
Штамм Listeria monocytogenes Л-20 получен в результате трансдукции
вирулентных штаммов Listeria monocytogenes и на основе метода отбора
мутантных клонов вирулентного штамма ему были приданы мутанты, связанные со
снижением вирулентности.
Полученный штамм L. monocytogenes Л-20 депонирован в музее культур
микроорганизмов Научно - исследовательского института проблем биологической
безопасности Министерства образования и науки Республики Казахстан.
Изучение аттенуированного вакцинного штамма проводилось в сравнении с
вирулентной культурой L. monocytogenes.
Морфология и культуральные свойства вакцинного штамма изучались при
многократных пересевах на твердых, полужидких и жидких питательных средах.
Основное внимание обращалось на возможность диссоциации, что
контролировалось по характеру роста на средах и стабильности нативных и
гретых суспензий культур.
Остаточная вирулентность исследована на 30 беспородных белых мышах
живой массой 14 – 16 г, 20 морских свинках живой массой 250 – 300 г с
учетом их реакции на введение вакцинного штамма, высеваемости и
диссеминации вакцинной культуры при различных дозах.
Всего при выполнении исследований на лабораторной модели было
использовано 125 белых мышей, морских свинок 60, овец 30. В
производственных условиях для изучения эффективности разработанной вакцины
было иммунизировано вакцинным штаммом L. monocytogenes Л-20 - 610 овец.
Для проведения научно – исследовательских работ использована следующая
аппаратура: термостаты Е - 2, автоклавы, дистилляторы, сушильные шкафы,
весы АТМ 39А - 1000, микроскоп бинокулярный "Биолам", центрифуга MPW – 310,
центрифуга MPW – 314, центрифуга ЦПР 5 – 01, рН- метры 5170, ЭВ – 74,
пипетки, микродозаторы на 50 – 250, 250 – 1000 мкл, колбы Тартаковского,
чашки Петри, микробиологические пробирки, посуда лабораторная стеклянная,
пипетки градуированные (ГОСТ 20227-91), МПА, МПБ с применением пептона
сухого ферментативного для бактериологических целей (ГОСТ 13805-76), натрия
хлористого (ГОСТ 4233-77), воды дистиллированной (ГОСТ 6709-72), агара
пищевого (ГОСТ 16280-88), агара микробиологического (ГОСТ 17206-84).
3. Результаты исследования
3.1 Распространенность листериоза сельскохозяйственных животных в
хозяйствах Алматинской области
Листериями могут быть инфицированы домашние и дикие животные
различных видов, в том числе мыши, крысы, кролики, куры, кошки, собаки,
свиньи, коровы и овцы. У животных листериоз может протекать латентно, но
возбудитель выделяется в больших количествах с мочой, испражнениями,
носовой слизью, молоком, околоплодной жидкостью. Человек заражается при
употреблении мяса и молока больных животных, а также загрязненной пищи и
воды. Заражение возможно при контакте с больными животными; при вдыхании
пыли, содержащей листерии (при обработке шкур, шерсти, уходе за животными).
Распространены листерии повсеместно, во всех природных зонах,
поскольку листерии передаются человеку прямо или косвенно от больного
животного, есть основание считать листериоз зооантропонозом [35].
Исходя из вышеизложенного, целью нашей работы являлось исследование
распространения листериоза в крестьянских хозяйствах "Топар" Балхашского
района и "Мұра" Енбекшиказахского района Алматинской области, а так же
изучение распространенности листериоза ... продолжение
Вы можете абсолютно на бесплатной основе полностью просмотреть эту работу через наше приложение.
Похожие работы
Дисциплины
- Информатика
- Банковское дело
- Оценка бизнеса
- Бухгалтерское дело
- Валеология
- География
- Геология, Геофизика, Геодезия
- Религия
- Общая история
- Журналистика
- Таможенное дело
- История Казахстана
- Финансы
- Законодательство и Право, Криминалистика
- Маркетинг
- Культурология
- Медицина
- Менеджмент
- Нефть, Газ
- Искуство, музыка
- Педагогика
- Психология
- Страхование
- Налоги
- Политология
- Сертификация, стандартизация
- Социология, Демография
- Статистика
- Туризм
- Физика
- Философия
- Химия
- Делопроизводсто
- Экология, Охрана природы, Природопользование
- Экономика
- Литература
- Биология
- Мясо, молочно, вино-водочные продукты
- Земельный кадастр, Недвижимость
- Математика, Геометрия
- Государственное управление
- Архивное дело
- Полиграфия
- Горное дело
- Языковедение, Филология
- Исторические личности
- Автоматизация, Техника
- Экономическая география
- Международные отношения
- ОБЖ (Основы безопасности жизнедеятельности), Защита труда
