Иммунокоррекция инфекционного гепатита у собак
Нормативные ссылки 3
Определения 4
Обозначения и сокращения 9
Введение 10
Основная часть 14
1 Обзор литературы 14
1.1 Общие сведения об инфекционном гепатите плотоядных 14
1.2 Клиническое проявление и патогенез инфекционного гепатита 16
1.3 Диагностика инфекционного гепатита 19
1.4 Лечение и иммунокоррекция инфекционного гепатита 26
2 Собственные исследования 28
2. 1 Материал и методика исследования 28
2.2 Определение вирусингибирующего действия антицеллюлярного иммуноглобулина 30
2.3 Применение антицеллюлярного иммуноглобулина для иммунокоррекции собак больных инфекционным гепатитом 53
2.4 Способ получения антительного эритроцитарного диагностикума для выявления инфекционного гепатита у собак 67
2.5 Патологоморфологическое проявление инфекционного гепатита у собак 88
Обсуждение результатов 94
Заключение 103
Практические предложения 104
Список использованных источников 105
Приложение А Положительное решение «Способ получение антицелюлярного иммуноглобулина для профилактики и иммунокоррекции инфекционного гепатита у собак 115
Приложение Б Предпатент «Способ получение эритроцитарного диагностикума для выявления инфекционного гепатита у собак 117
Приложение В Акты внедрения полученные в результате выполнения работ 119
Приложение Г Справка о внедрении в учебный процесс результатов исследований 121
Определения 4
Обозначения и сокращения 9
Введение 10
Основная часть 14
1 Обзор литературы 14
1.1 Общие сведения об инфекционном гепатите плотоядных 14
1.2 Клиническое проявление и патогенез инфекционного гепатита 16
1.3 Диагностика инфекционного гепатита 19
1.4 Лечение и иммунокоррекция инфекционного гепатита 26
2 Собственные исследования 28
2. 1 Материал и методика исследования 28
2.2 Определение вирусингибирующего действия антицеллюлярного иммуноглобулина 30
2.3 Применение антицеллюлярного иммуноглобулина для иммунокоррекции собак больных инфекционным гепатитом 53
2.4 Способ получения антительного эритроцитарного диагностикума для выявления инфекционного гепатита у собак 67
2.5 Патологоморфологическое проявление инфекционного гепатита у собак 88
Обсуждение результатов 94
Заключение 103
Практические предложения 104
Список использованных источников 105
Приложение А Положительное решение «Способ получение антицелюлярного иммуноглобулина для профилактики и иммунокоррекции инфекционного гепатита у собак 115
Приложение Б Предпатент «Способ получение эритроцитарного диагностикума для выявления инфекционного гепатита у собак 117
Приложение В Акты внедрения полученные в результате выполнения работ 119
Приложение Г Справка о внедрении в учебный процесс результатов исследований 121
Актуальность проблемы. Инфекционный гепатит собак — острая контагиозная болезнь, протекающая с лихорадкой, воспалительными процессами слизистых оболочек глаз, катаром дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, а также с поражением печени и ЦНС. Болезнь регистрируется во многих странах мира, в Республике Казахстан инфекционный гепатит регистрируется во всех регионах и проявляется в виде спорадических случаев при частном содержании у населения и энзоотии среди собак в питомниках [1, 2,].
По статистическим данным органов ветеринарного надзора, численность ценных породных собак, которые более подверженных инфекционным болезням в России и Казахстане возросла до миллиона. Одним из актуальных задач ветеринарной науки в области кинологии, которой в Казахстане мало уделено внимания является разработка методов диагностики и создание эффективных лечебно- профилактических мероприятии.
Современная эпизоотическая обстановка по заболеваниям плотоядных животных является весьма сложной. Многочисленные такие инфекций как чума плотоядных, парвовирусный энтерит и аденовирусные инфекции, бартонеллез, инфекционный гепатит собак и др., представляют серьезную угрозу и наносят значительный ущерб собаководству и звероводству [3, 4, 5].
Экономический ущерб, наносимый инфекционным гепатитом в кинологии, определяется высокой летальностью заболевших животных, большим количеством пропустований, массовыми абортами и рождением нежизнеспособного молодняка. В естественных условиях при не осложненном течении болезни гибель среди животных достигает 10 - 15%, а при осложненных формах может составлять 70 - 80% [6, 7].
В настоящее время решением ВОЗ в гуманитарной медицинской практике запрещены специфические противовирусные сыворотки, применение которых вызывает образование иммунных комплексов и развитие тяжелых иммунопатологических осложнении. В ветеринарной практике это явление, описывается как «сывороточная болезнь», но как показали многочисленные исследования, это мнение является ошибочным, т.к. основным фактором развития этой патологии, являются аллергические и аутоиммунные реакции. Вопросы возникновения и развития сывороточной болезни и болезней иммунных комплексов у животных еще мало изучены [8, 9].
Применение специфических гипериммунных сывороток для лечения вирусного гепатита плотоядных животных представляет серьезную угрозу для здоровья и жизни больного животного, следовательно, является не допустимым. Применяемые в настоящее время методы лечения в основном являются викарными и не направлены на устранение этиологического фактора. Исходя из сложившейся ситуации, лечение больных вирусным гепатитом животных становится проблематичным, возникает необходимость разработки новых эффективных методов иммунокоррекции [10, 12].
По статистическим данным органов ветеринарного надзора, численность ценных породных собак, которые более подверженных инфекционным болезням в России и Казахстане возросла до миллиона. Одним из актуальных задач ветеринарной науки в области кинологии, которой в Казахстане мало уделено внимания является разработка методов диагностики и создание эффективных лечебно- профилактических мероприятии.
Современная эпизоотическая обстановка по заболеваниям плотоядных животных является весьма сложной. Многочисленные такие инфекций как чума плотоядных, парвовирусный энтерит и аденовирусные инфекции, бартонеллез, инфекционный гепатит собак и др., представляют серьезную угрозу и наносят значительный ущерб собаководству и звероводству [3, 4, 5].
Экономический ущерб, наносимый инфекционным гепатитом в кинологии, определяется высокой летальностью заболевших животных, большим количеством пропустований, массовыми абортами и рождением нежизнеспособного молодняка. В естественных условиях при не осложненном течении болезни гибель среди животных достигает 10 - 15%, а при осложненных формах может составлять 70 - 80% [6, 7].
В настоящее время решением ВОЗ в гуманитарной медицинской практике запрещены специфические противовирусные сыворотки, применение которых вызывает образование иммунных комплексов и развитие тяжелых иммунопатологических осложнении. В ветеринарной практике это явление, описывается как «сывороточная болезнь», но как показали многочисленные исследования, это мнение является ошибочным, т.к. основным фактором развития этой патологии, являются аллергические и аутоиммунные реакции. Вопросы возникновения и развития сывороточной болезни и болезней иммунных комплексов у животных еще мало изучены [8, 9].
Применение специфических гипериммунных сывороток для лечения вирусного гепатита плотоядных животных представляет серьезную угрозу для здоровья и жизни больного животного, следовательно, является не допустимым. Применяемые в настоящее время методы лечения в основном являются викарными и не направлены на устранение этиологического фактора. Исходя из сложившейся ситуации, лечение больных вирусным гепатитом животных становится проблематичным, возникает необходимость разработки новых эффективных методов иммунокоррекции [10, 12].
1 Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я и др. Вирусные болезни животных. - М., 1998. - С. 808 - 810.
2 Чижов В.А., Данилов Е.П., Докур И.И. Болезни собак. - М.: Колос. - М.1992. С. 282-291.
3 Селиванов А.В., Уласов В.И. Инфекционный гепатит собак. //Ветеринария.- 1989, № 5. - С. 69 - 71.
4 Черняк В.З., Куприте О. Д., Власова Л. П. Об инфекционном гепатите собак. //Ветеринария. – 1955, № 4. – С. 59 - 60.
5 Шуляк Б.Ф. Вирусные болезни собак. - 2004.
6 Урюмцева Т.И. Разработка и совершествование экспресс-методов лабораторной диагностики инфекционного гепатита собак. Дис.канд.вет.наук. 16.00.03. Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока». – 2004. - 104 с..
7 Метелева Р.И., Беспрозванный Б.К., Ананьев В.А. и др. Вирусный гепатит песцов. //Ветеринария. - 1961, №10. - С.51-55.
8 Смородинцев А.А., Лузянина Т.Я. Основы противовирусного иммунитета. – Л.: Медицина, 1975. – 311 с.
9 Чижов В.А. Диагностика инфекционного гепатита пушных зверей. //Звероводство и кролиководство. – 1964. – Т. 4.
10 Климов А.А. Аденовирусы собак. //Ветеринария. – 1991, №3. - С. 64 - 65.
11 Сайтаниди В.Н. Болезни собак. – М.: Агропромиздат, 1990. С. 146-152.
12 Bing D.H., Weyand J.G., Stavitsky A.B. Hemagglutination with aldehyde-fixed erythrocytes for assay of antigens and antibodies. //Proc. Soc. exp. Biol. Med. - 1967, v. 124. - p. 1166.
13 Любашенко С.Я., Ананьев В.Э., Чижов В.А. Получение диагностических сывороток против вирусного гепатита лисиц и песцов //Научные труды НИИ пушного звероводства и кролиководства. – 1971. - Т. IX..
14 Чернышова А.В. Оценка эффективности иммунокоррекции при хроническом вирусном гепатите С. Дисс. мед. наук: 09.17.04. – Алматы, 2005. – 116 С.
15 Kobayashi V., Ochiai K., Itakura C. Dual infection with canine distemper virus and infectiouscaninehepatifis virus (canine adenovirus type 1) in a dog. //J. Vet. Med Sci. – 1993. – vol. 55. – P.1699-701.
16 Gocke D. J , Morris T. Q., Bradley S E. Chronic hepatitis in the dog: The role of immune factors. //J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1970, 1S.6. – P. 1700 - 1705.
17 Чижов В.А., Ананьев В.А. Вирусный гепатит плотоядных. – М., 1973.
18 Rakich P. M et al. Immunohiswchemieal deteclion of canine adenovirus jn paraffin sectionsl of liver. //Vet. Palhol. – 1986. – vol. 23. – P. 478-484.
19 Wright N. G. Experimental infectious canine hepatitis. 4. Histological and immunofluores-cence studies of the kidney //J. Comp. Pathol. – 1967. – vol.77. – P. 153—155.
20 Olson P., Hedhammar A., Canine parvovirus infection, canine distemper and infectious canine hepatitis: Inclination to vaccinate and antibody response in the Swedish dog population /Klingeborn B. // Acta vet. scand.. - 1996. - V. 37, P. 321 - 326
21 Уласов В.И. Инфекционный гепатит собак. – М., 1987.
22 Митин В.Н. Болезни собак. – М.: Агропромиздат, 1990.
23 Панков В.А., Беспрозванный Б.К. Инфекционный гепатит собак. //Ветеринария. - 1957, № 8. - С.39 - 44.
24 Селиванов А.В., Уласов В.И. Инфекционный гепатит собак. //Ветеринария. – 1989, № 5. С. 69-71
25 Фомина Н.В. Аденовирусная инфекция животных. Монография. – М.: Колос, 1995 - Том.1. - С.169 - 175.
26 Баранов А.Е. Некоторые инфекционные болезни собак в условиях экспериментально-биологических клиник (вивариев). //Вестник АМН СССР.- 1983, №9. - С.88-92.
27 Fatemie-Nainie S., Marusyk R. Biophisical and serologic comparison of four equine adenovirus isolates. //Am. J. Veter. Res. - 1979. – Vol. 40. – P. 521-528.
28 Eyguem A. Immunopathologie des hepatites. //Eurobiologiste. – 1995. – Vol. -29. - P. 59 – 61.
29 Rubarth S. Hepatitis contagiosa canis. В кн.: Handbuch der virusinfektionen bei Tiern. – Jena, 1967. - Bd 3. - Ti 2.
30 Сюрин В. Н. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных.: Справочник / В. Н. Сюрин , Р. В. Белоусова , Б. В. Соловьев и др. - М.: Агропромиздат, 1986. – С. 257-258.
31 Shimizu Y., Kunishige T., flirato K. Immunological studies on the infections canine hepatitis virus. II.Hemagglutinin. Jpn. //J. Vet. Res. - I960. – Vol. 8.- P. 271.
32 Sfiahrabadi M.S., Marusyk R.G., Crawford T.B, Electron-microscopic study of the development of an equine adenovirus in .cultured fetal equien kidney cells //Can. J. Microbiol., 1977. - 23. - 497-509.
33 Дрейзин Р. С. Аденовирусные инфекции. /Р. С. Дрейзин , В. М. Жданов - М.: Государственное издательство медицинской литературы, 1962. – С. 257-261.
34 Власова Т. Пушные звери и мелкие домашние животные: актуальные проблемы заболеваемости. //Ветеринарная газета. - 1996, №22. - С. 3.
35 Уласов В.И. Специфическая профилактика и диагностика инфекционных болезней животных. //Сборник научных тр. ВГНКИ. 1986. С. 45- 47.
36 Котард Ж. П. Заболевания печени у собак и кошек //Ветеринария. – 1999, №1. - С. 4 - 8.
37 Митин Н.И. Вирус инфекционного гепатита собак. //Руководство по ветеринарной вирусологии. – 1966. - С.687 -690.
38 Серов В.В., Апросина З.Г. Хронический вирусный гепатит. – М.: Медицина, 2002. – С. 47 – 96.
39 Митин Н.И. Вирус инфекционного гепатита собак. //Руководство по
2 Чижов В.А., Данилов Е.П., Докур И.И. Болезни собак. - М.: Колос. - М.1992. С. 282-291.
3 Селиванов А.В., Уласов В.И. Инфекционный гепатит собак. //Ветеринария.- 1989, № 5. - С. 69 - 71.
4 Черняк В.З., Куприте О. Д., Власова Л. П. Об инфекционном гепатите собак. //Ветеринария. – 1955, № 4. – С. 59 - 60.
5 Шуляк Б.Ф. Вирусные болезни собак. - 2004.
6 Урюмцева Т.И. Разработка и совершествование экспресс-методов лабораторной диагностики инфекционного гепатита собак. Дис.канд.вет.наук. 16.00.03. Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока». – 2004. - 104 с..
7 Метелева Р.И., Беспрозванный Б.К., Ананьев В.А. и др. Вирусный гепатит песцов. //Ветеринария. - 1961, №10. - С.51-55.
8 Смородинцев А.А., Лузянина Т.Я. Основы противовирусного иммунитета. – Л.: Медицина, 1975. – 311 с.
9 Чижов В.А. Диагностика инфекционного гепатита пушных зверей. //Звероводство и кролиководство. – 1964. – Т. 4.
10 Климов А.А. Аденовирусы собак. //Ветеринария. – 1991, №3. - С. 64 - 65.
11 Сайтаниди В.Н. Болезни собак. – М.: Агропромиздат, 1990. С. 146-152.
12 Bing D.H., Weyand J.G., Stavitsky A.B. Hemagglutination with aldehyde-fixed erythrocytes for assay of antigens and antibodies. //Proc. Soc. exp. Biol. Med. - 1967, v. 124. - p. 1166.
13 Любашенко С.Я., Ананьев В.Э., Чижов В.А. Получение диагностических сывороток против вирусного гепатита лисиц и песцов //Научные труды НИИ пушного звероводства и кролиководства. – 1971. - Т. IX..
14 Чернышова А.В. Оценка эффективности иммунокоррекции при хроническом вирусном гепатите С. Дисс. мед. наук: 09.17.04. – Алматы, 2005. – 116 С.
15 Kobayashi V., Ochiai K., Itakura C. Dual infection with canine distemper virus and infectiouscaninehepatifis virus (canine adenovirus type 1) in a dog. //J. Vet. Med Sci. – 1993. – vol. 55. – P.1699-701.
16 Gocke D. J , Morris T. Q., Bradley S E. Chronic hepatitis in the dog: The role of immune factors. //J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1970, 1S.6. – P. 1700 - 1705.
17 Чижов В.А., Ананьев В.А. Вирусный гепатит плотоядных. – М., 1973.
18 Rakich P. M et al. Immunohiswchemieal deteclion of canine adenovirus jn paraffin sectionsl of liver. //Vet. Palhol. – 1986. – vol. 23. – P. 478-484.
19 Wright N. G. Experimental infectious canine hepatitis. 4. Histological and immunofluores-cence studies of the kidney //J. Comp. Pathol. – 1967. – vol.77. – P. 153—155.
20 Olson P., Hedhammar A., Canine parvovirus infection, canine distemper and infectious canine hepatitis: Inclination to vaccinate and antibody response in the Swedish dog population /Klingeborn B. // Acta vet. scand.. - 1996. - V. 37, P. 321 - 326
21 Уласов В.И. Инфекционный гепатит собак. – М., 1987.
22 Митин В.Н. Болезни собак. – М.: Агропромиздат, 1990.
23 Панков В.А., Беспрозванный Б.К. Инфекционный гепатит собак. //Ветеринария. - 1957, № 8. - С.39 - 44.
24 Селиванов А.В., Уласов В.И. Инфекционный гепатит собак. //Ветеринария. – 1989, № 5. С. 69-71
25 Фомина Н.В. Аденовирусная инфекция животных. Монография. – М.: Колос, 1995 - Том.1. - С.169 - 175.
26 Баранов А.Е. Некоторые инфекционные болезни собак в условиях экспериментально-биологических клиник (вивариев). //Вестник АМН СССР.- 1983, №9. - С.88-92.
27 Fatemie-Nainie S., Marusyk R. Biophisical and serologic comparison of four equine adenovirus isolates. //Am. J. Veter. Res. - 1979. – Vol. 40. – P. 521-528.
28 Eyguem A. Immunopathologie des hepatites. //Eurobiologiste. – 1995. – Vol. -29. - P. 59 – 61.
29 Rubarth S. Hepatitis contagiosa canis. В кн.: Handbuch der virusinfektionen bei Tiern. – Jena, 1967. - Bd 3. - Ti 2.
30 Сюрин В. Н. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных.: Справочник / В. Н. Сюрин , Р. В. Белоусова , Б. В. Соловьев и др. - М.: Агропромиздат, 1986. – С. 257-258.
31 Shimizu Y., Kunishige T., flirato K. Immunological studies on the infections canine hepatitis virus. II.Hemagglutinin. Jpn. //J. Vet. Res. - I960. – Vol. 8.- P. 271.
32 Sfiahrabadi M.S., Marusyk R.G., Crawford T.B, Electron-microscopic study of the development of an equine adenovirus in .cultured fetal equien kidney cells //Can. J. Microbiol., 1977. - 23. - 497-509.
33 Дрейзин Р. С. Аденовирусные инфекции. /Р. С. Дрейзин , В. М. Жданов - М.: Государственное издательство медицинской литературы, 1962. – С. 257-261.
34 Власова Т. Пушные звери и мелкие домашние животные: актуальные проблемы заболеваемости. //Ветеринарная газета. - 1996, №22. - С. 3.
35 Уласов В.И. Специфическая профилактика и диагностика инфекционных болезней животных. //Сборник научных тр. ВГНКИ. 1986. С. 45- 47.
36 Котард Ж. П. Заболевания печени у собак и кошек //Ветеринария. – 1999, №1. - С. 4 - 8.
37 Митин Н.И. Вирус инфекционного гепатита собак. //Руководство по ветеринарной вирусологии. – 1966. - С.687 -690.
38 Серов В.В., Апросина З.Г. Хронический вирусный гепатит. – М.: Медицина, 2002. – С. 47 – 96.
39 Митин Н.И. Вирус инфекционного гепатита собак. //Руководство по
Дисциплина: Ветеринария
Тип работы: Дипломная работа
Бесплатно: Антиплагиат
Объем: 97 страниц
В избранное:
Тип работы: Дипломная работа
Бесплатно: Антиплагиат
Объем: 97 страниц
В избранное:
Министерство образования и науки Республики Казахстан
Казахский национальный аграрный университет
УДК 619:61:33-002:636.7
На правах рукописи
Амиргалиева Светлана Садуахасовна
ИММУНОКОРРЕКЦИЯ ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА У СОБАК
16.00.02 – Патология, онкология и морфология животных
Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Научный руководитель: Доктор ветеринарных наук,
профессор Муралинов К. К.
Алматы, 2007
СОДЕРЖАНИЕ
Нормативные ссылки 3
Определения 4
Обозначения и сокращения 9
Введение 10
Основная часть 14
1 Обзор литературы 14
1.1 Общие сведения об инфекционном гепатите плотоядных 14
1.2 Клиническое проявление и патогенез инфекционного гепатита 16
1.3 Диагностика инфекционного гепатита 19
1.4 Лечение и иммунокоррекция инфекционного гепатита 26
2 Собственные исследования 28
2. 1 Материал и методика исследования 28
2.2 Определение вирусингибирующего действия антицеллюлярного 30
иммуноглобулина
2.3 Применение антицеллюлярного иммуноглобулина для иммунокоррекции 53
собак больных инфекционным гепатитом
2.4 Способ получения антительного эритроцитарного диагностикума для 67
выявления инфекционного гепатита у собак
2.5 Патологоморфологическое проявление инфекционного гепатита у 88
собак
Обсуждение результатов 94
Заключение 103
Практические предложения 104
Список использованных источников 105
Приложение А Положительное решение Способ получение антицелюлярного115
иммуноглобулина для профилактики и иммунокоррекции инфекционного
гепатита у собак
Приложение Б Предпатент Способ получение эритроцитарного 117
диагностикума для выявления инфекционного гепатита у собак
Приложение В Акты внедрения полученные в результате выполнения работ119
Приложение Г Справка о внедрении в учебный процесс результатов 121
исследований
Нормативные ссылки
В настоящей диссертации используются ссылки на следующие стандарты
МРТУ 6-09 3177-66 Хлорамин х.ч.
ТУ 480-11-10-73 Карандаши по стеклу
ГОСТ 12.1.008-76 ССБТ Биологическая безопасность. Общие требования
ТУ ОСЧ 25-6 Вода дистиллированная или деминерализованная
МРТУ 42-102-63 Ножницы разные
ГОСТ 64-2-485-86 Ампулы стеклянные для лекарственных средств
ГОСТ 64-7-88-81 Быстроукрепляющиеся краски для печатания на стеклянных
изделиях методом глубокой печати
ГОСТ 123-81 Коробки из картона, бумага из комбинированных материалов
ГОСТ 1530-65 Бумага пергаментная
ГОСТ 2918-64 Сода кальцинированная
ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый
ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификат 96%-ный
ГОСТ 6417-72 Фенол
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная
ГОСТ 7852-65 Пробки резиновые №№ от 11 до 45
ГОСТ 9284-75 Стекла предметные
ГОСТ 10551-754 Пробирки стеклянные
ГОСТ 10652-73 Версен (Трилон Б) - динатриевая соль этилен-диамин
тетрауксусной кислоты
ГОСТ 11773-76 Натрий фосфорнокислый двузамещенный
ГОСТ 12026-66 Бумага фильтровальная
ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических
исследований
ГОСТ 16280-70 Агар - агар
ГОСТ 20292-74 Е Пипетки стеклянные
ГОСТ 20292-74 Колбы мерные вместимостью 100, 200 и 1000 мл.
ГОСТ 20730-75 Питательные среды
ГОСТ 22 967 Шприцы инъекционные вместимостью 2 и 5см 3
ГОСТ 25336-821 Посуда и оборудование лабораторная стеклянная пипетки
разномерные
ГОСТ 28085-89 Препараты биологические. Методы бактериологического
контроля стерильности
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
В настоящей диссертации применяют следующие термины с соответствующими
определениями
Авидность – мера прочности связывания антител с антигеном, определяемая
как афинностью взаимодействия между эпитопами и паратопами, так и
валентностью антител и антигена.
Адсорбция (от лат. Ad на, при+sorbeo поглощаю) – поглощение какого-либо
вещества из газовой среды или раствора поверхностным слоем жидкости или
твердого тела. Вещество, на поверхности которого происходит адсорбция,
называют адсорбентом, а поглощаемое из объемной фазы – адсорбатом. В
иммунологии А. применяют для удаления из антисывороток всех антител,
реагирующих с гетерологическими антителами.
Адъюванты (лат. Adiuvans, adiuvantis помогающий, способствующий) –
вещества (ланолин, сапонин, минеральные масла, гидроокись алюминия),
оказывающие неспецифическое стимулирующее влияние на иммуногенез. При
введении их в организм вместе с антигеном они вызывают воспалительную
реакцию, замедление всасывания антигена и повышение синтеза антител. А.
применяют при изготовлении эффективных вакцин и анатоксинов, а также при
гипериммунизации животных.
Адъювант Фрейнда – вводно-масляная эмульсия, которую используют для
повышения иммуногенности вносимого в него антигена. Полный адъювант
Фрейнда, в отличие от неполного, дополнительно содержит убитые клетки
туберкулезных микобактерии.
Антигены – (анти+гр. genes порождающий) – вещества способные при
поступлении в организм вызывать иммунный ответ.
Антитела (иммунные тела, иммуноглобулины) – специфические белки
(иммуноглобулины), синтезируемые плазматическими клетками в ответ на
поступившие в организм антигенов. Антитела являются строго специфичными,
т.е. вступают в реакцию только с антигеном индуцирующим их синтез.
Аллерген – агент, вызывающий опосредованные Ig Е – антителами реакции
гиперчувствительности.
Аллергия – (allos гр. – другой, чужой + ergon – действие) – состояние
повышенной или извращенной реактивности организма по отношению к
определенным веществам (аллергенам), развивающееся при повторном
воздействии этих веществ.
Артюса реакция – воспаление, развивающееся в коже спустя несколько часов
после введение антигена,- реакция гиперчувствительности III типа.
Гаптены – небольшая молекула, которая может действовать как эпитоп, но
сама по себе не способна вызывать образование антител.
Изменение культуры - устойчивое изменение свойств или поведения
культуры, т. е. изменение морфологии, хромосомного состава,
чувствительности к вирусам; пищевых потребностей, пролиферативной
способности, характеристик злокачественности и т. д. Термин всегда должен
быть квалифицирован точным описанием изменения, которое претерпела
культура.
Иммунитет - комплекс реакций, направленных на поддержание гомеостаза при
встрече организма с агентами, которые расцениваются как чужеродные,
независимо от того, образуются ли они в самом организме или поступают в
него извне.
Иммунокоррекция - применение препаратов химической или биологической
природы, способные модулировать (стимулировать или подавлять) реакции
иммунитета в результате воздействия на иммунокомпетентные клетки, на
процессы их миграции или на взаимодействие таких клеток или их продуктов.
Иммунодепрессанты – (лат. immunis, невосприимчивый + depression,
угнетение) химические соединения или физические факторы, тормозящие
процессы иммуногенеза. Образуются в ответ на введение антигена в лимфоидной
ткани организма. Под влиянием иммунодепрессантов, организм теряет
способность различать эндогенно возникающие или экзогенно проникающие
чужеродные для него вещества. Иммунодепрессанты используют в клинике для
лечения некоторых аутоиммунных болезней, а так же для искусственного
создания иммунотолерантности по отношениям к чужеродным трансплантантам.
Иммунная система организма. Состоит из дифференцированных лимфоидных
органов (тимус, клоакальная сумка у птиц, лимфоузлы, селезенка),
агрегированных скоплений лимфоидной ткани (пейеровы бляшки, аппендикс и
др.), диффузных лимфоидных скоплений, а также лимфоидных клеток,
циркулирующих и разбросанных по всему организму. Клеточным субстратом всех
иммунных реакций служит лимфоидная ткань. Различают первичные, или
центральные (тимус, клоакальная сумка у птиц), и вторичные, или
периферические (селезенка, лимфоузлы) - лимфоидные органы. Иммунная система
организма состоит из тимусзависимой и тимуснезависимой частей. Клетки
первой части, Т-лимфоциты, происходят из тимуса (отсюда и название),
участвуют в реакциях клеточного типа и играют вспомогательную роль в
реакциях гуморального иммунитета. Клетки второй системы, В-лимфоциты
происходят из костного мозга (англ. bone marrow) и называются по первой
букве этого термина, дифференцируются под воздействием антигена в
антителообразующие плазматические клетки. Кроме Т- и В-лимфоцитов в
иммунных реакциях участвуют еще макрофаги;
Иммунная сыворотка, serum immune (лат. serum, сыворотка + immunis,
невосприимчивый) - сыворотка, содержащая специфические антитела, полученная
от иммунизированного (вакцинированного) или переболевшего животного.
Применяется для лечения или профилактики (пассивная иммунизация) при
определенных инфекционных болезнях;
Иммунные комплексы — комплексы антиген—антитело. Как правило, этот
термин применяют в отношении растворимых комплексов антиген—антитело, а не,
например, к комплексам антител с антигенами клеточной поверхности;
Иммунный ответ — в норме защитная реакция организма в отношении
проникающих из внешней среды патогенов, в первую очередь инфекционных. Эта
реакция заключается в распознавании антигена лимфоцитами, синтезе
лимфоцитами специальных эффекторных молекул и деструкции и элиминации
поврежденных патогеном клеток с привлечением общевоспалительных механизмов,
в первую очередь клеток крови и белков сыворотки кров;.
Иммуноглобулины, immunoglobulin, (Ig) (лат. immunis+globulinum,
глобулин) - антитела, гаммаглобулины, сывороточные белки, глобулины
фракций, которые являются носителями антител. Иммуноглобулины
подразделяются на пять основных классов: IgG, IgM, IgA, IgD и IgE. По
структуре все иммуноглобулины состоят из двух идентичных легких и тяжелых
цепей, соединенных между собой бисульфидными связями. В крови главным
образом содержатся иммуноглобулины класса G, М, А; они находятся как в
сыворотке, так и в секретах (сывороточные и секреторные) и являются важным
защитным фактором при алиментарных инфекциях. IgE-фракция участвует в
реакциях гиперчувствительности немедленного типа. После вакцинации сначала
начинается синтез IgM-фракции иммуноглобулинов, а затем и других.
Иммуноглобулины используют как иммунологические препараты в терапии и
профилактике инфекционных болезней;
Клеточная трансформация - изменения, вызванные в клетках введением
нового генетического материала. Природа и источник генетического материала,
вызвавшего изменения, должны быть определены.
Клон - популяция клеток, происходящая от одной клетки путем митозов.
Клон не обязательно является гомогенным, и поэтому термины клон или
клонирование не должны использоваться для обозначения гомогенности
клеточной популяции.
Клонированный штамм или линия означает их происхождение непосредственно
от клона.
Комплемент – (от лат.complementum – дополнение) дополняет действие
антител, направленное на уничтожение внедрившихся в организм посторонних
клеток.
Культура клеток - клетки, растущие in vitro без образования ткани.
Культура ткани или органов - поддержание или рост тканей или целого
органа, или его кусочков in vitro с обеспечением дифференциации или
сохранением структуры и функции.
Линия клеток - первичная культура со времени получения субкультуры;
состоит из разнотипных клеток, первоначально присутствующих в первичной
культуре.
Линия диплоидных клеток - клеточная линия, в которой, по крайней мере
75% клеток обладают кариотипом нормальных клеток исходного вида. Следует
отметить, что диплоидный набор хромосом необязательно эквивалентен
диплоидному кариотипу, так как существуют ситуации, при которых клетка
может терять один тип хромосом и приобретать другой. Следовательно,
кариотип клетки изменился, а диплоидный набор хромосом сохранился. Такие
клетки следует считать псевдодиплоидными.
При описании диплоидной клеточной линии указывают число исследованных
клеток, процент диплоидных клеток и их кариотип.
Линия гетероплоидных клеток - представляет собой популяцию, в которой
менее 75.% клеток с диплоидным набором хромосом. Этот термин не указывает
на злокачественность клеток и их способность расти до бесконечности in
vitro. Характеризуя гетероплоидную линию клеток, указывают кариотип и
процент клеток с измененным кариотипом.
Моделирование - воспроизведение в лабораторных условиях какого-либо
патологического процесса или болезни.
Митогены – вещества, вызывающие деление клеток, в частности В-
лимфоцитов.
Монослой —клетки, растущие на поверхности в один слой.
Онкогенность - Методы определения онкогенности клеток in vitro
отсутствуют, ее можно определить только по поведению клеток в животном
организме.
Первичная культура — культура, происходящая от клеток тканей или
органов, взятых непосредственно из организма. Культура считается первичной
до тex пор, пока она не субкультивируется. Культуры, происходящие от
эксплантатов опухолей, развившихся в организме животных после введения
культивированных клеток, являются продолжением клеточной линии или штамма.
Плазматическая клетка – антителопродуцирующая В-клетка на конечной
стадии дифференцировки.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) – метод иммунологической
диагностики вирусных и бактериальных инфекции. При этом эритроциты на
которых адсорбированы антигены (антитела), приобретают способность
агглютинироваться в присутствии гомологичных сывороток (антигенов).
Эритроциты выполняют действие носителей антигенов со специфическими
детерминантами, агглютинация которых происходит в результате реакции
антиген-антитело.
Реакция диффузной преципитации – простая, ускоренная серологическая
реакция для выявления антител, отличающаяся высокой специфичностью;
Реакция связывания комплемента - серологическая реакция, основанная на
взаимодействии антител и антигена с обязательным участием комплемента,
который приводит к растворению (лизису) клеток-мишеней, являющихся
антигеном, либо клеточным носителем антигена, либо индикаторами реакции;
Резистентность (лат. resistentia сопротивляемость) – естественная
неспецифическая устойчивость к действию раздражителя, в т.ч. и патогенных
микробов. Р. связывают с защитными реакциями общего характера.
Рецептор – молекула клеточной мембраны, специфически связывающая
определенные внеклеточные молекулы
Сенсибилизация – (лат. sensibilis - чувствительный) – повышение
чувствительности организма животного, включая человека (или отдельных
органов, напр. органов чувств) к воздействию раздражителей при повторном их
действии
Серологические реакции – взаимодействие антигена с гомологичным
антителом в опытах in vitro. Она основана на видимых проявлениях реакции
антиген-антитело.
Стабильная клеточная линия — клетки, способные субкультивироваться in
vitro до бесконечности,
Примечание. На уровне современных знаний о поведении клеток невозможно
определить точку, когда культура становится стабильной, т. е. приобретает
способность, расти до бесконечности. На основании опыта, с
фибробластоподобными клетками человека культура должна субкультивироваться,
по крайней мере, 70 раз с интервалами 3 дня, прежде чем ее следует считать
стабильной.
Субштамм — специфическая популяция клеток, выделенная из штамма путам
изолирования отдельной клетки или групп клеток.
Суспензионная культура - культура, в которой клетки сохраняют
жизнеспособность или размножаются, будучи взвешенными в питательной среде.
Сыворотка крови — жидкая составляющая крови без фибриногенафибрина.
Титр – наименьшее количество компонента реакции, достаточное для
получения ожидаемого феномена.
Тканевая культура - клетки, ткани или органы, эксплантированные из
организма животного, сохраняющие жизнеспособность или растущие in vitro
более чем 24 ч.
Толерантность – отсутствие активации лимфоцитов к продуктивному
иммунному ответу при наличии в доступном им пространстве специфических
антигенов.
Штамм клеток — популяция однородных клеток (по одному или нескольким
маркерам), сохраняющая специфические свойства в процессе последующего
культивирования. Штамм клеток может происходить из первичной культуры или
от линии клеток путем селекции, или клонирования клеток, имеющих
специфические свойства или маркеры. При описании клеточного штамма следует
указать его специфические свойства (набор хромосом, чувствительность или
резистентность к определенному вирусу, наличие специфического антигена и т.
д.).
Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий – размеры
предотвращенного ветеринарной службой ущерба в животноводстве, выраженные
количеством предохраненных от болезней животных и объемом полученной от них
продукции, оцененной в действующих закупочных ценах.
Эксплантат - изолированный кусочек ткани или органа, используемый для
культивирования.
Эффективность посева - процент клеток, дающих начало колониям. При этом
необходимо указывать общее число клеток в инокуляте, тип культурального
сосуда условия (среда, открытая или закрытая система, газовая фаза и т.
д.).
ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ
В настоящей диссертации применяют следующие обозначения и сокращения
АТ – антитела
АГ – антигены
АЦГ – антицеллюлярный иммуноглобулин
ИБН - иммунобиологический надзор
КББ – карбонат-бикарбонатный буфер
ИК - иммунные комплексы
КК – культуры клеток
РГЗТ - реакция гиперчувствительности замедленного типа
РГНТ – реакция гиперчувствительности немедленного типа
РНГА – реакция непрямой гемагглютинации;
РДП – реакция диффузной преципитации
РСК – реакция связывания комплемента
СИ – среда Игла
ТЕ - титровые единицы
ФСБ - фосфорно- солевой буфер
ЦПД – цитопатическое действие
ЦФБ – цитратно-фосфатный буфер
мкг – микрограмм
мкл – микролитр
ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. Инфекционный гепатит собак — острая контагиозная
болезнь, протекающая с лихорадкой, воспалительными процессами слизистых
оболочек глаз, катаром дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, а
также с поражением печени и ЦНС. Болезнь регистрируется во многих странах
мира, в Республике Казахстан инфекционный гепатит регистрируется во всех
регионах и проявляется в виде спорадических случаев при частном содержании
у населения и энзоотии среди собак в питомниках [1, 2,].
По статистическим данным органов ветеринарного надзора, численность
ценных породных собак, которые более подверженных инфекционным болезням в
России и Казахстане возросла до миллиона. Одним из актуальных задач
ветеринарной науки в области кинологии, которой в Казахстане мало уделено
внимания является разработка методов диагностики и создание эффективных
лечебно- профилактических мероприятии.
Современная эпизоотическая обстановка по заболеваниям плотоядных
животных является весьма сложной. Многочисленные такие инфекций как чума
плотоядных, парвовирусный энтерит и аденовирусные инфекции, бартонеллез,
инфекционный гепатит собак и др., представляют серьезную угрозу и наносят
значительный ущерб собаководству и звероводству [3, 4, 5].
Экономический ущерб, наносимый инфекционным гепатитом в кинологии,
определяется высокой летальностью заболевших животных, большим количеством
пропустований, массовыми абортами и рождением нежизнеспособного молодняка.
В естественных условиях при не осложненном течении болезни гибель среди
животных достигает 10 - 15%, а при осложненных формах может составлять 70 -
80% [6, 7].
В настоящее время решением ВОЗ в гуманитарной медицинской практике
запрещены специфические противовирусные сыворотки, применение которых
вызывает образование иммунных комплексов и развитие тяжелых
иммунопатологических осложнении. В ветеринарной практике это явление,
описывается как сывороточная болезнь, но как показали многочисленные
исследования, это мнение является ошибочным, т.к. основным фактором
развития этой патологии, являются аллергические и аутоиммунные реакции.
Вопросы возникновения и развития сывороточной болезни и болезней иммунных
комплексов у животных еще мало изучены [8, 9].
Применение специфических гипериммунных сывороток для лечения вирусного
гепатита плотоядных животных представляет серьезную угрозу для здоровья и
жизни больного животного, следовательно, является не допустимым.
Применяемые в настоящее время методы лечения в основном являются викарными
и не направлены на устранение этиологического фактора. Исходя из
сложившейся ситуации, лечение больных вирусным гепатитом животных
становится проблематичным, возникает необходимость разработки новых
эффективных методов иммунокоррекции [10, 12].
Диагностика аденовирусных инфекций плотоядных затруднена из-за изменчивых
и малохарактерных признаков заболеваний. В практических условиях
предварительный диагноз на инфекционный гепатит ставят на основании
эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.
Предложенные в настоящее время такие методы лабораторной диагностики
инфекционного гепатита собак, как РСК, ИФА и РДП требуют длительного
времени, а также особых условий постановки. Поэтому проблема разработки
новых и совершенствование существующих средств и методов лабораторной
диагностики этого заболевания остаётся актуальной [13, 14].
Одним из важных проблем в борьбе с инфекционным гепатитом является
своевременная достоверная диагностика. С этой целью применяются РДП и РСК.
Для постановки этих реакций необходим вируссодержащий материал, получение
которого на культуре клеток является труднодоступным, весьма трудоемким
процессом и требует больших материальных затрат.
Возникает необходимость изыскания новых более совершенных средств и
методов выявления инфекционного гепатита у животных, доступных по
стоимости, простоте техники постановки в условиях лаборатории и лечебниц и
быстроте получения результатов.
Цель исследований. Целью настоящей работы является изыскание
высокоэффективных средств, обладающих вирусингибирующим и
иммунокоррегирующим действием на больных инфекционным гепатитом собак.
Задачи исследований. Для достижения указанной цели на разрешение
поставлены следующие задачи:
- изучить вирусингибирующее действие антицеллюлярного иммуноглобулина
на культурах клеток;
- изучить иммунокоррегирующее действие антицеллюлярного иммуноглобулина
на больных инфекционным гепатитом собаках;
- разработка эритроцитарного диагностикума для обнаружения
инфекционного гепатита у собак.
Научная новизна результатов исследований.
- изучено вирусингибирующее действие антицеллюлярного иммуноглобулина;
- изучено иммунокоррегирующее действие антицеллюлярного иммуноглобулина
и определена возможность его применения при инфекционном гепатите собак;
- разработан метод изготовления антительного диагностикума для
выявления антигена, возбудителя инфекционного гепатита у собак.
Практическая значимость результатов исследований. Применение
предложенного нами антицеллюлярного иммуноглобулина позволит более успешно
осуществлять противоэпизоотические мероприятия, направленные на борьбу с
указанным заболеванием плотоядных животных.
Использование в ветеринарной практике РНГА с эритроцитарным
диагностикумом даст возможность обнаруживать возбудителя инфекционного
гепатита в исследуемом материале с целью выявления инфекционного гепатита у
собак;
Результаты научных исследований используются при проведении занятий со
студентами по дисциплинам Патологическая анатомия и Болезни кошек и
собак.
Основные положения, выносимые на защиту:
- результаты вирусингибирующего и иммунокоррегирующего действия
антицеллюлярного иммуноглобулина;
- способ получения эритроцитарного диагностикума для РНГА;
- данные по обнаружению возбудителя инфекционного гепатита собак с
помощью эритроцитарного антительного диагностикума.
Внедрение результатов исследований. Результаты диссертационной работы
применяются для иммунокоррекции инфекционного гепатита у собак в
ветеринарных лечебницах г. Алматы.
Материалы исследований используются при чтении лекций и проведении
лабораторно-практических занятий по дисциплинам Патологическая анатомия и
Болезни кошек и собак в Казахском национальном аграрном университете.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на
Международной научно-практической ветеринарной конференции (г. Алматы,
2005); Международной конференции Актуальные проблемы болезней молодняка в
современных условиях (г. Воронеж, 2006); Международной научно-практической
ветеринарной конференции посвященной 100-летию со дня рождения К.П.
Студенцова (г. Алматы, 2006); Международной научно-практической
ветеринарной конференции посвященная 100 - летию Ермекова М.А (г. Алматы,
2006); Международной научно-практической конференций Валихановские чтения-
12 (Кокшетау 2007).
Связь диссертации с планами НИР Казахского национального аграрного
университета. Диссертация является фрагментом научно-исследовательской
программы Казахского национального аграрного университета “Диагностика и
лечение аутоиммунных болезней животных на 2001 – 2005 годы (№ гос.
регистрации 0101РК00254).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 7
работ, в том числе 2 положительных решении на выдачу предпатента на
изобретение Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления
инфекционного гепатита у собак, заявка № 20060742.1 от и Способ
получение антицеллюлярного иммуноглобулина для иммунокоррекции
инфекционного гепатита у плотоядных животных Комитета по правам
интеллектуальной собственности, Министерства юстиции Республики Казахстан
на заявки за №20060743.1г.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах
компьютерного текста (word) и состоит из введения, обзора литературы,
собственных исследований, анализа результатов собственных исследований,
выводов, списка литературы и приложения.
Материалы диссертации иллюстрированы 45 таблицами и 6 фотоснимками.
Библиография включает 174 наименования источников литературы, в т.ч. 46
источников авторов дальнего зарубежья.
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Общие сведения об инфекционном гепатите плотоядных
Инфекционный гепатит собак (Hepatitis infectiosa) весьма контагиозная
болезнь, протекающая с лихорадкой, воспалительными процессами слизистых
оболочек глаз, катаром дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, а
также с поражением печени [12, 13, 14, 15, 16].
Болезнь регистрируется в США, Англии, Франции, ГДР, ФРГ, Польше,
Венгрии, Румынии, Швеции Швейцарии и в других странах мира. В Советском
Союзе она установлена в 1953 г. и регистрируется в виде спорадических
случаев и небольших энзоотии среди собак в питомниках служебного
собаководства [17, 18].
В Советском Союзе инфекционный гепатит собак в первый раз был
диагностирован гистологический по специфическим включениям. Это же
заболевание в Советском Союзе наблюдали у собак в период энзоотических
вспышек в питомнике служебного собаководства [19, 20, 21].
Экономический ущерб, наносимый инфекционным гепатитом в собаководстве,
определяется высокой летальностью заболевших животных, а также большим
количеством пропустований, массовыми абортами и рождением нежизнеспособного
молодняка. В естественных условиях при не осложненном течении болезни
гибель среди животных достигает 10 - 15%, а при осложненных формах может
составлять 70 - 80%.
В естественных условиях к инфекционному гепатиту восприимчивы собаки
всех возрастов и пород. Болезнь регистрируется также среди лисиц, песцов,
енотов, волков и хорьков. Основным источником инфекции являются больные
собаки. Вирус может выделяться с мочой, носовой слизью, конъюнктивальным
секретом и калом. Характерной эпизоотологической особенностью инфекционного
гепатита собак является длительное вирусоносительство у животных,
продолжающееся в течение ряда лет. Это подтверждается неоднократными
случаями заноса инфекции в благополучные хозяйства при закупке племенных
самцов и самок, в число которых попали хронические больные [22, 23, 24].
Инфекционным гепатитом собаки заражаются чаще всего оральным или
назальным путем, чему во многом способствует рефлекс обнюхивания этими
животными мест выделения мочи и кала другими животными. Источником инфекции
могут являться взрослые собаки, в организме которых вирус сохраняется до 9
месяцев и выделяется с мочой, каловыми массами, а также отделяемыми из
дыхательных путей.
Естественное заражение собак наблюдается через слизистые оболочки
носовой и ротовой полости, через желудочно-кишечный тракт и половые органы.
Установлены случаи распространения болезни при не соблюдении правил
асептики и антисептики, при хирургических операциях, прививках, взятии
крови и др. [25, 26, 27].
Инфекционный гепатит - острое вирусное заболевание, заражение которым
происходит в основном через органы дыхания, алиментарным путем, а также
через поврежденные участки кожи и слизистые оболочки животного; возможна
передача вируса внутриутробное, с молоком матери или через инвентарь.
Диагноз устанавливают на основании учета эпизоотологических данных,
клинических признаков, патологоанатомических изменений и обнаружения
внутриядерных включений (телец Рубарта) в печеночных клетках, а также
данных серологического исследования сыворотки крови [28, 29, 30].
К заболеванию инфекционным гепатитом подвержены собаки всех возрастов и
пород. Основным резервуаром и природным очагом инфекции являются больные и
переболевшие плотоядные животные. Возбудитель длительное время выделяется с
мочой, носовой слизью, конъюнктивальным секретом и калом. При естественном
заражении собак вирусом инфекционного гепатита инкубационный период
продолжается от 3 до 9 дней, но иногда и дольше; при экспериментальном
заражении он составляет 6—8 дней [31, 32, 33, 34, 35].
Инфекционный гепатит распространяется в основном среди собак и пушных
зверей (песцов, лисиц) спорадически или в виде эпизоотии, поражая от 40 до
75 % поголовья. Менее восприимчивы к болезни кошки, хорьки и морские
свинки. Имели место случаи заболевания этой инфекцией и человека.
Инфекционный гепатит нередко возникает на фоне других болезней как чума,
гельминтозы и авитаминозы. При не осложненном течении болезни гибель среди
животных достигает до 10 %, а при осложненных формах до 80%, При остром
течении болезни наблюдается внезапная гибель щенков. При хроническом
течении и переболевшие животные длительное время являются вирусоносителями.
Рождающийся от таких животных приплод нередко болеет без выраженных
признаков болезни. У переболевших животных создается стойкий
продолжительный иммунитет [36, 37].
Энзоотия инфекционного гепатита носит сезонный характер, но чаще
наблюдается весной и летом при появлении молодняка. Спорадические же случаи
заболевания встречаются в любое время года и связаны в основном с
обострением латентного или хронического течения болезни под влиянием каких-
либо неблагоприятных условий [38, 39].
Течение инфекционного гепатита в собаководческих питомниках имеет
определенную последовательность. В первоначальный период проявляются
единичные случаи болезни в острой форме. В последующем при не проведении
экстренных ветеринарно-санитарных карантинных мероприятии, энзоотия широко
распространяется и охватывает в первые недели большое поголовье собак и
постепенно уменьшается до полной остановки на 2 – 3-е месяцы. Развития
энзоотии в таком виде не является непременной и во многом зависит от
состояния эпизоотической обстановки, числа заболевших животных и
длительности сохранения течения энзоотии. Количество заболевших и
летальность исхода могут варьировать в больших пределах и в основном
зависят от состояния упитанности, резистентности организма, условий
содержания и ухода за животными. Переболевшее маточное поголовье являются
вирусоносителями в течение многих лет, заражать нарождающихся от них
щенков, самцов-производителей при контакте с ними и во время вязки. У
переболевших собак независимо от тяжести перенесенного инфекционного
процесса может развиться длительный, почти пожизненный иммунитет. У больных
инфекцией животных антитела могут выявляться на 15—21-й день и достигают
высоких показателей на 30-е сутки [40, 41, 42].
Вероятно, что очагом возникновения вирусного гепатита в собаководческих
питомниках являются в основном переболевшие - вирусоносители. Это факт
подтверждается источника вирусного гепатита собак после поступления в
питомники переболевших животных [43, 44].
Устойчивость вируса инфекционного гепатита к физическим и химическим
факторам почти не изучена. Имеется лишь краткое сообщение, что вирус
инфекционного гепатита сравнительно устойчив к теплу и холоду и может
сохраняться более двух лет в зараженном питомнике, вызывая периодически
отдельные случаи или же массовые вспышки заболевания среди молодых собак.
Восприимчивость разных видов животных к вирусу инфекционного гепатита. К
вирусу инфекционного гепатита более восприимчивы щенки собак в возрасте до
1 года и щенки серебристо-черных лисиц [45, 46].
Вирусом инфекционного гепатита собак в экспериментальных условиях
восприимчивых животных удается заразить различными методами, но наиболее
эффективный из них для щенков конъюнктивальный. В естественных условиях
собаки в основном заражаются через пищеварительный тракт с кормом,
инфицированным мочой или другими секретами и экскретами больных собак.
Через двое - трое суток после заражения в ретикулярных и эндотелиальных
клетках появляются скопления вируса в виде внутриядерных включений которые
образуются в клетках печени, причем сначала в купферовских, затем в
печеночных клетках. В результате нарушения центральной части долек печени
развиваются дистрофические изменения в паренхиме органа, что ведет к
глубокому нарушению обмена веществ и интоксикации организма. Нарастающая
интоксикация приводит к дистрофическим изменениям в почках, в сердечной
мышце и множественным кровоизлияниям в слизистых и серозных оболочках, а
также в паренхиматозных органах, развивается полная картина развития
инфекционного процесса [47, 48, 49].
1.2 Клиническое проявление и патогенез инфекционного гепатита
Инкубационный период продолжается 1—3 недели, а после экспериментального
заражения 2—4 дня.. При острой форме клинические признаки проявляются в
отказе от корма, угнетение, рвота, иногда понос, тонзиллит; температура
тела 40—41°. Наблюдается лихорадка постоянного типа, которая сопровождается
лейкопенией и резко ускоренной реакцией оседания эритроцитов, к концу
болезни развивается лейкоцитоз, у некоторых животных появляется
асептический аваскулезный кератит. У павших больных животных увеличена
печени, яркого охряно-желтого цвета с множественными кровоизлияниями или
синюшная, иногда с фибринозными наложениями или сгустками крови;
студенистый отек стенки и ложа желчного пузыря, гиперемия, кровоизлияния и
студенистый отек клетчатки вилочковой железы, миндалин, шейных и брыжеечных
лимфатических узлов; скопление серозного или кровянистого экссудата в
брюшной полости; инвагинация кишечника [50, 51].
Инфекционный гепатит у собак, как правило в большинстве случаев
протекает остро с высокой температурой, болеют в основной щенки и молодые
собаки в возрасте до 1 года. В дни повышения температуры тела развивается
резко выраженная лейкопения — 3—2 тыс. лейкоцитов, сменяющаяся в период
понижения температуры значительным лейкоцитозом. При вскрытие в основном
гистологические изменения резко выражены в печени в виде очагового или
массивного некроза паренхимы с превращением клеток в круглые эозинофильными
окрашиваемые тельца, похожие на тельца Каунсильмена. Очаги некроза окружены
зонами жирового некробиоза. В паренхиме долек обильный инфильтрат из
пролиферированных клеток Купфера и круглых клеток. В головном мозгу явления
энцефалита: пролиферация эндотелия, интраадвентициальные муфты,
периваскулярный отек [52, 53].
Верификационный патоморфологический диагностический признак
инфекционного гепатита это обнаружение крупных внутриядерных включений
(телец Рубарта) в клетках печени, Купфера, эндотелиях сосудов, в
ретикулярных клетках всех органов, особенно селезенки, почек и
лимфатических узлов. Эти включения после окраски могут быть эозинофильными
или окрашенными в нейтральный цвет. Внутриядерные включения встречаются и в
эндотелии роговицы глаз. Обнаружение включений позволяет быстро и
достоверно определить диагноз [54, 55].
После проникновения вируса в центральную нервную систему возникает
нарушение ее регуляторной функции, сопровождающееся локомоторными
расстройствами и глубокими нарушениями процессов обмена. Тяжесть поражения
головного мозга собак при инфекционном гепатите вариабельна. Основой ее
являются изменения в сосудах, обусловленные эндотелиотропизмом вируса.
Наиболее ранними являются нарушения целости сосудов с некрозом отдельных
клеток. В дальнейшем в стенках сосудов и в периваскулярных пространствах
развивается отек, мононуклеарная инфильтрация, в клетках эндотелия
появляются тельца Рубарта. В наиболее тяжелых случаях наблюдаются различные
формы дистрофических изменений ганглиозных клеток. Поражение нервных
центров головного и спинного мозга обусловливает возникновение
функциональных расстройств, характерных для данного заболевания [56, 57].
Патологоанатомические изменения в органах при инфекционном гепатите
собак чрезвычайно разнообразны и зависят от продолжительности и тяжести
болезненного процесса. При остром течении болезни трупы собак обычно имеют
удовлетворительную упитанность. При вскрытии находят распространенный
(иногда геморрагический) отек подкожной клетчатки зобной и поджелудочной
желез. Характерным для инфекционного гепатита является отек стенки желчного
пузыря и его ложа. Более чем в 40% случаев в брюшной полости встречается
прозрачный желтоватый или кровянистый экссудат, имеющий вид чистой крови.
На висцеральной брюшине кишечника и на печени могут быть фибринозно-
геморрагические наложения.
Печень увеличена, с отчетливым дольчатым рисунком; одних случаях темно-
красная, полнокровная, в других - светлого желтовато-коричневого или яркого
охряного цвета, иногда с мелким неравномерным крапом под капсулой и на
поверхности разреза. Более чем в 90% случаев бросается в глаза значительный
студенистый отек стенки желчного пузыря. Селезенка примерно в 50% случаев
увеличена и полнокровна. В желудке обычно бывает только слизь, нередко
темно-коричневого или почти черного цвета. На слизистой оболочке желудка
возможны геморрагии, иногда эрозии. В кишечнике при вскрытии находят
незначительные изменения в виде утолщения слизистых оболочек тонкого и
толстого отделов, которые могут быть покрыты большим количеством слизи с
множественными кровоизлияниями. Отличительным признаком инфекционного
гепатита является студенистый отек и полнокровие вилочковой железы, в
большинстве случаев с множественными точечными кровоизлияниями в ней.
Вокруг вилочковой железы прилежащие ткани сильно отечные и могут
распространяться на шею, нижнюю поверхность груди и средостение. Селезенка
набухшая, вишнево-красного цвета, кровенаполнена, пульпа на разрезе сочная,
соскоб обильный. Иногда она бывает не увеличена, красновато-серого или
серовато-малинового цвета [58, 59, 60, 61, 62, 63].
При естественном заражении собак вирусом инфекционного гепатита
инкубационный период продолжается от 3 до 9 дней, но иногда и дольше; при
экспериментальном заражении он составляет 6—8 дней. Болезнь обычно
начинается с постепенного нарастания угнетенного состояния, вялости.
Больные собаки менее подвижны, больше лежат, у них отмечают капризный
аппетит. Вскоре животные отказываются от корма, с трудом встают, при
движении походка у них шаткая. Одновременно у заболевших собак появляются
характерные признаки гепатита: рвота с примесью желчи, односторонние или
двусторонние кератиты и тонзиллит.
В дальнейшем больные животные начинают быстро худеть, появляется анемия
слизистых оболочек глаз и ротовой полости, у некоторых провляется
выраженная желтушность склеры. С желтушностью и анемией моча принимает
темно-бурую окраску, что также часто является характерным признаком
гепатита. Животные болезненно реагируют на пальпацию в области печени,
становятся как бы осторожными в своих движениях. При этом они часто
принимают позу сидячей собаки, широко расставив передние лапы.
При инфекционном гепатите собак своеобразно проявляется температурная
реакция. В начальный период болезни температура держится нормальной, а
затем на 4 - 6-е дни быстро повышается до 41 - 41,7° и находится на этом
уровне почти до самой гибели животного. В период лихорадки носовое
зеркальце у собак бывает сухим, и они испытывают повышенную жажду. С
повышением температуры тела наблюдается расстройство со стороны сердечно-
сосудистой системы. Число сердечных ударов возрастает до 90—110 и выше в
минуту. По качеству сердечный толчок усилен, а пульс при тяжелом течении
болезни ослаблен, иногда аритмичный. Дыхание учащенное — до 40—50 в минуту.
При прослушивании легких слышны хрипы. Развивается резко выраженная
лейкопения — 3—2 тыс. лейкоцитов, сменяющаяся в период понижения
температуры значительным лейкоцитозом (до 30—35 тыс.).
Продолжительность болезни у собак бывает различная от нескольких суток
до двух-трех недель. Погибают они, обычно находясь в глубоком коматозном
состоянии, совершенно не реагируя на внешние раздражения. Иногда за
несколько часов до наступления смерти у отдельных животных наблюдается
подергивание отдельных групп мышц, судороги и непроизвольные движения
конечностей.
При хроническом течении гепатита у собак симптомы болезни бывают
выражены, стерто и носят часто неопределенный характер. Иногда они
проявляются снижением или временной потерей аппетита, расстройствами
деятельности желудочно-кишечного тракта в виде диареи, которая может
сменяться запорами, и прогрессирующей кахексией. При хроническом течение
инфекции наблюдаются редкие кратковременные подъемы температуры тела,
различны как по интенсивности, так и по продолжительности обострения.
Наблюдается также и тяжелое генерализованное, септическое течение болезни.
Ремиссии между приступами лихорадки могут не иметь определенной
закономерности, температура повышается с интервалом несколько дней, недель
и даже месяц. Приступы лихорадки сопровождаются проявлением отклонений со
стороны сердечно-сосудистой системы, различной степени анемий слизистых
оболочек, явлением гастроэнтерита. Хронически больные самки чаще всего
абортируют или приносят нежизнеспособных щенят. У родившихся от больных и
переболевших инфекционным гепатитом самок щенков часто происходит
внутриутробное заражение инфекцией. У хронический больных животных
наблюдаются долго не проходящие кератиты одного или обоих глаз с
помутнением роговицы. [64, 65, 66, 67, 68, 69].
1.3 Диагностика инфекционного гепатита
Вирус инфекционного гепатита проходит через фильтры Зейтца ЕК, свечи
Беркефельда и Шамберлана и задерживается коллоидными мембранами. Размеры
его, по данным электронной микроскопии до 55—96 нм. По морфологическим,
антигенным и физико-химическим свойствам вирус инфекционного гепатита собак
отнесен к обширной группе аденовирусов. Генетическую информацию в нем несет
ДНК, вирусная капсула имеет кубическую симметрию и состоит из 252
капсомеров. Каждый капсомер состоит из 5—6 и более мелких субстанций.
Вирусные частицы в культуре ткани клеток часто имеют форму кристаллических
скоплений. В составе вируса не установлено липидов. Вирус содержит
преципитирующий, гемагглютинирующий и комплементфиксирующий антигены.
Биологические свойства вируса подвержены большим изменениям. В частности, в
процессе лабораторных пассажей он способен изменять свою патогенность для
собак. Доказана однородность штаммов вируса инфекционного гепатита,
выделенных от естественно заразившихся гепатитом животных различных видов.
Вирус, выделенный от собак, может вызвать болезнь у песцов, лисиц, енотов,
и, наоборот, вирус, выделенный от зверей, вызывает гепатит у собак с
характерными изменениями в печени и расстройством ее функций.
В зависимости от выраженности тропизма к ткани печени или мозга штаммы
вируса подразделяют на нейротропные и гепатотропные, причем тропизм можно
усилить искусственно. Вирус проявляет цитопатическое действие в культурах
клеток почки и семенника собаки, почки хорька, енота и поросенка, формируя
бляшки в монослое [70, 71].
Возбудитель инфекционного гепатита плотоядных имеет иммунологическое
родство с вирусом инфекционного ларинготрахеита собак, а также
одностороннюю антигенную связь с типом 7 аденовируса человека (сыворотка
крови переболевшего человека реагирует с антигеном гепатита собак, но не
наоборот) [72, 73].
Вирус устойчив к различным физическим факторам. При замораживании,
высушивании в 50 %-ном растворе глицерина при комнатной температуре вирус
остается вирулентным в течение нескольких лет, в природе он может
сохраняться более двух лет. Высокая температура действует губительно на
вирус, при 60—70° он теряет свою вирулентность в течение 40 - 50 мин, при
нагревании до 100° за 1 мин. Вирус неустойчив к формалину, лизолу, фенолу,
свежегашеной извести, которые инактивируют его в течение 30 мин. Проявляет
выраженную устойчивость к эфиру, хлороформу, метанолу, антибиотикам и
ультрафиолетовым лучам [74, 75].
Диагностика аденовирусных инфекций плотоядных затруднена из-за
изменчивых и малохарактерных признаков заболеваний. Исследования ряда
зарубежных и отечественных авторов показали, что в результате перенесения
аденовирусного заболевания наблюдается увеличение нейтрализующих антител к
выделенному типу вируса, а также увеличение комплементсвязывающих антител.
Это увеличение наблюдается с большой регулярностью и имеет диагностическое
значение. Инфекционный гепатит собак имеет немало общих клинических
признаков с чумой, парвовирусным, короновирусным энтеритом и некоторыми
другими болезнями, что следует всегда дифференцировать при диагностических
исследованиях [76, 77].
Диагноз на инфекционный гепатит ставят главным образом на основании
эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных, а также
вирусологических исследований и биопробы. В качестве исследуемого материала
у больных собак в период острого течения болезни берут сыворотку крови, а у
павших животных - асцитическую жидкость или печень. Суспензию из печени
готовят общепринятым методом ... продолжение
Вы можете абсолютно на бесплатной основе полностью просмотреть эту работу через наше приложение.
Казахский национальный аграрный университет
УДК 619:61:33-002:636.7
На правах рукописи
Амиргалиева Светлана Садуахасовна
ИММУНОКОРРЕКЦИЯ ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА У СОБАК
16.00.02 – Патология, онкология и морфология животных
Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Научный руководитель: Доктор ветеринарных наук,
профессор Муралинов К. К.
Алматы, 2007
СОДЕРЖАНИЕ
Нормативные ссылки 3
Определения 4
Обозначения и сокращения 9
Введение 10
Основная часть 14
1 Обзор литературы 14
1.1 Общие сведения об инфекционном гепатите плотоядных 14
1.2 Клиническое проявление и патогенез инфекционного гепатита 16
1.3 Диагностика инфекционного гепатита 19
1.4 Лечение и иммунокоррекция инфекционного гепатита 26
2 Собственные исследования 28
2. 1 Материал и методика исследования 28
2.2 Определение вирусингибирующего действия антицеллюлярного 30
иммуноглобулина
2.3 Применение антицеллюлярного иммуноглобулина для иммунокоррекции 53
собак больных инфекционным гепатитом
2.4 Способ получения антительного эритроцитарного диагностикума для 67
выявления инфекционного гепатита у собак
2.5 Патологоморфологическое проявление инфекционного гепатита у 88
собак
Обсуждение результатов 94
Заключение 103
Практические предложения 104
Список использованных источников 105
Приложение А Положительное решение Способ получение антицелюлярного115
иммуноглобулина для профилактики и иммунокоррекции инфекционного
гепатита у собак
Приложение Б Предпатент Способ получение эритроцитарного 117
диагностикума для выявления инфекционного гепатита у собак
Приложение В Акты внедрения полученные в результате выполнения работ119
Приложение Г Справка о внедрении в учебный процесс результатов 121
исследований
Нормативные ссылки
В настоящей диссертации используются ссылки на следующие стандарты
МРТУ 6-09 3177-66 Хлорамин х.ч.
ТУ 480-11-10-73 Карандаши по стеклу
ГОСТ 12.1.008-76 ССБТ Биологическая безопасность. Общие требования
ТУ ОСЧ 25-6 Вода дистиллированная или деминерализованная
МРТУ 42-102-63 Ножницы разные
ГОСТ 64-2-485-86 Ампулы стеклянные для лекарственных средств
ГОСТ 64-7-88-81 Быстроукрепляющиеся краски для печатания на стеклянных
изделиях методом глубокой печати
ГОСТ 123-81 Коробки из картона, бумага из комбинированных материалов
ГОСТ 1530-65 Бумага пергаментная
ГОСТ 2918-64 Сода кальцинированная
ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый
ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификат 96%-ный
ГОСТ 6417-72 Фенол
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная
ГОСТ 7852-65 Пробки резиновые №№ от 11 до 45
ГОСТ 9284-75 Стекла предметные
ГОСТ 10551-754 Пробирки стеклянные
ГОСТ 10652-73 Версен (Трилон Б) - динатриевая соль этилен-диамин
тетрауксусной кислоты
ГОСТ 11773-76 Натрий фосфорнокислый двузамещенный
ГОСТ 12026-66 Бумага фильтровальная
ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических
исследований
ГОСТ 16280-70 Агар - агар
ГОСТ 20292-74 Е Пипетки стеклянные
ГОСТ 20292-74 Колбы мерные вместимостью 100, 200 и 1000 мл.
ГОСТ 20730-75 Питательные среды
ГОСТ 22 967 Шприцы инъекционные вместимостью 2 и 5см 3
ГОСТ 25336-821 Посуда и оборудование лабораторная стеклянная пипетки
разномерные
ГОСТ 28085-89 Препараты биологические. Методы бактериологического
контроля стерильности
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
В настоящей диссертации применяют следующие термины с соответствующими
определениями
Авидность – мера прочности связывания антител с антигеном, определяемая
как афинностью взаимодействия между эпитопами и паратопами, так и
валентностью антител и антигена.
Адсорбция (от лат. Ad на, при+sorbeo поглощаю) – поглощение какого-либо
вещества из газовой среды или раствора поверхностным слоем жидкости или
твердого тела. Вещество, на поверхности которого происходит адсорбция,
называют адсорбентом, а поглощаемое из объемной фазы – адсорбатом. В
иммунологии А. применяют для удаления из антисывороток всех антител,
реагирующих с гетерологическими антителами.
Адъюванты (лат. Adiuvans, adiuvantis помогающий, способствующий) –
вещества (ланолин, сапонин, минеральные масла, гидроокись алюминия),
оказывающие неспецифическое стимулирующее влияние на иммуногенез. При
введении их в организм вместе с антигеном они вызывают воспалительную
реакцию, замедление всасывания антигена и повышение синтеза антител. А.
применяют при изготовлении эффективных вакцин и анатоксинов, а также при
гипериммунизации животных.
Адъювант Фрейнда – вводно-масляная эмульсия, которую используют для
повышения иммуногенности вносимого в него антигена. Полный адъювант
Фрейнда, в отличие от неполного, дополнительно содержит убитые клетки
туберкулезных микобактерии.
Антигены – (анти+гр. genes порождающий) – вещества способные при
поступлении в организм вызывать иммунный ответ.
Антитела (иммунные тела, иммуноглобулины) – специфические белки
(иммуноглобулины), синтезируемые плазматическими клетками в ответ на
поступившие в организм антигенов. Антитела являются строго специфичными,
т.е. вступают в реакцию только с антигеном индуцирующим их синтез.
Аллерген – агент, вызывающий опосредованные Ig Е – антителами реакции
гиперчувствительности.
Аллергия – (allos гр. – другой, чужой + ergon – действие) – состояние
повышенной или извращенной реактивности организма по отношению к
определенным веществам (аллергенам), развивающееся при повторном
воздействии этих веществ.
Артюса реакция – воспаление, развивающееся в коже спустя несколько часов
после введение антигена,- реакция гиперчувствительности III типа.
Гаптены – небольшая молекула, которая может действовать как эпитоп, но
сама по себе не способна вызывать образование антител.
Изменение культуры - устойчивое изменение свойств или поведения
культуры, т. е. изменение морфологии, хромосомного состава,
чувствительности к вирусам; пищевых потребностей, пролиферативной
способности, характеристик злокачественности и т. д. Термин всегда должен
быть квалифицирован точным описанием изменения, которое претерпела
культура.
Иммунитет - комплекс реакций, направленных на поддержание гомеостаза при
встрече организма с агентами, которые расцениваются как чужеродные,
независимо от того, образуются ли они в самом организме или поступают в
него извне.
Иммунокоррекция - применение препаратов химической или биологической
природы, способные модулировать (стимулировать или подавлять) реакции
иммунитета в результате воздействия на иммунокомпетентные клетки, на
процессы их миграции или на взаимодействие таких клеток или их продуктов.
Иммунодепрессанты – (лат. immunis, невосприимчивый + depression,
угнетение) химические соединения или физические факторы, тормозящие
процессы иммуногенеза. Образуются в ответ на введение антигена в лимфоидной
ткани организма. Под влиянием иммунодепрессантов, организм теряет
способность различать эндогенно возникающие или экзогенно проникающие
чужеродные для него вещества. Иммунодепрессанты используют в клинике для
лечения некоторых аутоиммунных болезней, а так же для искусственного
создания иммунотолерантности по отношениям к чужеродным трансплантантам.
Иммунная система организма. Состоит из дифференцированных лимфоидных
органов (тимус, клоакальная сумка у птиц, лимфоузлы, селезенка),
агрегированных скоплений лимфоидной ткани (пейеровы бляшки, аппендикс и
др.), диффузных лимфоидных скоплений, а также лимфоидных клеток,
циркулирующих и разбросанных по всему организму. Клеточным субстратом всех
иммунных реакций служит лимфоидная ткань. Различают первичные, или
центральные (тимус, клоакальная сумка у птиц), и вторичные, или
периферические (селезенка, лимфоузлы) - лимфоидные органы. Иммунная система
организма состоит из тимусзависимой и тимуснезависимой частей. Клетки
первой части, Т-лимфоциты, происходят из тимуса (отсюда и название),
участвуют в реакциях клеточного типа и играют вспомогательную роль в
реакциях гуморального иммунитета. Клетки второй системы, В-лимфоциты
происходят из костного мозга (англ. bone marrow) и называются по первой
букве этого термина, дифференцируются под воздействием антигена в
антителообразующие плазматические клетки. Кроме Т- и В-лимфоцитов в
иммунных реакциях участвуют еще макрофаги;
Иммунная сыворотка, serum immune (лат. serum, сыворотка + immunis,
невосприимчивый) - сыворотка, содержащая специфические антитела, полученная
от иммунизированного (вакцинированного) или переболевшего животного.
Применяется для лечения или профилактики (пассивная иммунизация) при
определенных инфекционных болезнях;
Иммунные комплексы — комплексы антиген—антитело. Как правило, этот
термин применяют в отношении растворимых комплексов антиген—антитело, а не,
например, к комплексам антител с антигенами клеточной поверхности;
Иммунный ответ — в норме защитная реакция организма в отношении
проникающих из внешней среды патогенов, в первую очередь инфекционных. Эта
реакция заключается в распознавании антигена лимфоцитами, синтезе
лимфоцитами специальных эффекторных молекул и деструкции и элиминации
поврежденных патогеном клеток с привлечением общевоспалительных механизмов,
в первую очередь клеток крови и белков сыворотки кров;.
Иммуноглобулины, immunoglobulin, (Ig) (лат. immunis+globulinum,
глобулин) - антитела, гаммаглобулины, сывороточные белки, глобулины
фракций, которые являются носителями антител. Иммуноглобулины
подразделяются на пять основных классов: IgG, IgM, IgA, IgD и IgE. По
структуре все иммуноглобулины состоят из двух идентичных легких и тяжелых
цепей, соединенных между собой бисульфидными связями. В крови главным
образом содержатся иммуноглобулины класса G, М, А; они находятся как в
сыворотке, так и в секретах (сывороточные и секреторные) и являются важным
защитным фактором при алиментарных инфекциях. IgE-фракция участвует в
реакциях гиперчувствительности немедленного типа. После вакцинации сначала
начинается синтез IgM-фракции иммуноглобулинов, а затем и других.
Иммуноглобулины используют как иммунологические препараты в терапии и
профилактике инфекционных болезней;
Клеточная трансформация - изменения, вызванные в клетках введением
нового генетического материала. Природа и источник генетического материала,
вызвавшего изменения, должны быть определены.
Клон - популяция клеток, происходящая от одной клетки путем митозов.
Клон не обязательно является гомогенным, и поэтому термины клон или
клонирование не должны использоваться для обозначения гомогенности
клеточной популяции.
Клонированный штамм или линия означает их происхождение непосредственно
от клона.
Комплемент – (от лат.complementum – дополнение) дополняет действие
антител, направленное на уничтожение внедрившихся в организм посторонних
клеток.
Культура клеток - клетки, растущие in vitro без образования ткани.
Культура ткани или органов - поддержание или рост тканей или целого
органа, или его кусочков in vitro с обеспечением дифференциации или
сохранением структуры и функции.
Линия клеток - первичная культура со времени получения субкультуры;
состоит из разнотипных клеток, первоначально присутствующих в первичной
культуре.
Линия диплоидных клеток - клеточная линия, в которой, по крайней мере
75% клеток обладают кариотипом нормальных клеток исходного вида. Следует
отметить, что диплоидный набор хромосом необязательно эквивалентен
диплоидному кариотипу, так как существуют ситуации, при которых клетка
может терять один тип хромосом и приобретать другой. Следовательно,
кариотип клетки изменился, а диплоидный набор хромосом сохранился. Такие
клетки следует считать псевдодиплоидными.
При описании диплоидной клеточной линии указывают число исследованных
клеток, процент диплоидных клеток и их кариотип.
Линия гетероплоидных клеток - представляет собой популяцию, в которой
менее 75.% клеток с диплоидным набором хромосом. Этот термин не указывает
на злокачественность клеток и их способность расти до бесконечности in
vitro. Характеризуя гетероплоидную линию клеток, указывают кариотип и
процент клеток с измененным кариотипом.
Моделирование - воспроизведение в лабораторных условиях какого-либо
патологического процесса или болезни.
Митогены – вещества, вызывающие деление клеток, в частности В-
лимфоцитов.
Монослой —клетки, растущие на поверхности в один слой.
Онкогенность - Методы определения онкогенности клеток in vitro
отсутствуют, ее можно определить только по поведению клеток в животном
организме.
Первичная культура — культура, происходящая от клеток тканей или
органов, взятых непосредственно из организма. Культура считается первичной
до тex пор, пока она не субкультивируется. Культуры, происходящие от
эксплантатов опухолей, развившихся в организме животных после введения
культивированных клеток, являются продолжением клеточной линии или штамма.
Плазматическая клетка – антителопродуцирующая В-клетка на конечной
стадии дифференцировки.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) – метод иммунологической
диагностики вирусных и бактериальных инфекции. При этом эритроциты на
которых адсорбированы антигены (антитела), приобретают способность
агглютинироваться в присутствии гомологичных сывороток (антигенов).
Эритроциты выполняют действие носителей антигенов со специфическими
детерминантами, агглютинация которых происходит в результате реакции
антиген-антитело.
Реакция диффузной преципитации – простая, ускоренная серологическая
реакция для выявления антител, отличающаяся высокой специфичностью;
Реакция связывания комплемента - серологическая реакция, основанная на
взаимодействии антител и антигена с обязательным участием комплемента,
который приводит к растворению (лизису) клеток-мишеней, являющихся
антигеном, либо клеточным носителем антигена, либо индикаторами реакции;
Резистентность (лат. resistentia сопротивляемость) – естественная
неспецифическая устойчивость к действию раздражителя, в т.ч. и патогенных
микробов. Р. связывают с защитными реакциями общего характера.
Рецептор – молекула клеточной мембраны, специфически связывающая
определенные внеклеточные молекулы
Сенсибилизация – (лат. sensibilis - чувствительный) – повышение
чувствительности организма животного, включая человека (или отдельных
органов, напр. органов чувств) к воздействию раздражителей при повторном их
действии
Серологические реакции – взаимодействие антигена с гомологичным
антителом в опытах in vitro. Она основана на видимых проявлениях реакции
антиген-антитело.
Стабильная клеточная линия — клетки, способные субкультивироваться in
vitro до бесконечности,
Примечание. На уровне современных знаний о поведении клеток невозможно
определить точку, когда культура становится стабильной, т. е. приобретает
способность, расти до бесконечности. На основании опыта, с
фибробластоподобными клетками человека культура должна субкультивироваться,
по крайней мере, 70 раз с интервалами 3 дня, прежде чем ее следует считать
стабильной.
Субштамм — специфическая популяция клеток, выделенная из штамма путам
изолирования отдельной клетки или групп клеток.
Суспензионная культура - культура, в которой клетки сохраняют
жизнеспособность или размножаются, будучи взвешенными в питательной среде.
Сыворотка крови — жидкая составляющая крови без фибриногенафибрина.
Титр – наименьшее количество компонента реакции, достаточное для
получения ожидаемого феномена.
Тканевая культура - клетки, ткани или органы, эксплантированные из
организма животного, сохраняющие жизнеспособность или растущие in vitro
более чем 24 ч.
Толерантность – отсутствие активации лимфоцитов к продуктивному
иммунному ответу при наличии в доступном им пространстве специфических
антигенов.
Штамм клеток — популяция однородных клеток (по одному или нескольким
маркерам), сохраняющая специфические свойства в процессе последующего
культивирования. Штамм клеток может происходить из первичной культуры или
от линии клеток путем селекции, или клонирования клеток, имеющих
специфические свойства или маркеры. При описании клеточного штамма следует
указать его специфические свойства (набор хромосом, чувствительность или
резистентность к определенному вирусу, наличие специфического антигена и т.
д.).
Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий – размеры
предотвращенного ветеринарной службой ущерба в животноводстве, выраженные
количеством предохраненных от болезней животных и объемом полученной от них
продукции, оцененной в действующих закупочных ценах.
Эксплантат - изолированный кусочек ткани или органа, используемый для
культивирования.
Эффективность посева - процент клеток, дающих начало колониям. При этом
необходимо указывать общее число клеток в инокуляте, тип культурального
сосуда условия (среда, открытая или закрытая система, газовая фаза и т.
д.).
ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ
В настоящей диссертации применяют следующие обозначения и сокращения
АТ – антитела
АГ – антигены
АЦГ – антицеллюлярный иммуноглобулин
ИБН - иммунобиологический надзор
КББ – карбонат-бикарбонатный буфер
ИК - иммунные комплексы
КК – культуры клеток
РГЗТ - реакция гиперчувствительности замедленного типа
РГНТ – реакция гиперчувствительности немедленного типа
РНГА – реакция непрямой гемагглютинации;
РДП – реакция диффузной преципитации
РСК – реакция связывания комплемента
СИ – среда Игла
ТЕ - титровые единицы
ФСБ - фосфорно- солевой буфер
ЦПД – цитопатическое действие
ЦФБ – цитратно-фосфатный буфер
мкг – микрограмм
мкл – микролитр
ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. Инфекционный гепатит собак — острая контагиозная
болезнь, протекающая с лихорадкой, воспалительными процессами слизистых
оболочек глаз, катаром дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, а
также с поражением печени и ЦНС. Болезнь регистрируется во многих странах
мира, в Республике Казахстан инфекционный гепатит регистрируется во всех
регионах и проявляется в виде спорадических случаев при частном содержании
у населения и энзоотии среди собак в питомниках [1, 2,].
По статистическим данным органов ветеринарного надзора, численность
ценных породных собак, которые более подверженных инфекционным болезням в
России и Казахстане возросла до миллиона. Одним из актуальных задач
ветеринарной науки в области кинологии, которой в Казахстане мало уделено
внимания является разработка методов диагностики и создание эффективных
лечебно- профилактических мероприятии.
Современная эпизоотическая обстановка по заболеваниям плотоядных
животных является весьма сложной. Многочисленные такие инфекций как чума
плотоядных, парвовирусный энтерит и аденовирусные инфекции, бартонеллез,
инфекционный гепатит собак и др., представляют серьезную угрозу и наносят
значительный ущерб собаководству и звероводству [3, 4, 5].
Экономический ущерб, наносимый инфекционным гепатитом в кинологии,
определяется высокой летальностью заболевших животных, большим количеством
пропустований, массовыми абортами и рождением нежизнеспособного молодняка.
В естественных условиях при не осложненном течении болезни гибель среди
животных достигает 10 - 15%, а при осложненных формах может составлять 70 -
80% [6, 7].
В настоящее время решением ВОЗ в гуманитарной медицинской практике
запрещены специфические противовирусные сыворотки, применение которых
вызывает образование иммунных комплексов и развитие тяжелых
иммунопатологических осложнении. В ветеринарной практике это явление,
описывается как сывороточная болезнь, но как показали многочисленные
исследования, это мнение является ошибочным, т.к. основным фактором
развития этой патологии, являются аллергические и аутоиммунные реакции.
Вопросы возникновения и развития сывороточной болезни и болезней иммунных
комплексов у животных еще мало изучены [8, 9].
Применение специфических гипериммунных сывороток для лечения вирусного
гепатита плотоядных животных представляет серьезную угрозу для здоровья и
жизни больного животного, следовательно, является не допустимым.
Применяемые в настоящее время методы лечения в основном являются викарными
и не направлены на устранение этиологического фактора. Исходя из
сложившейся ситуации, лечение больных вирусным гепатитом животных
становится проблематичным, возникает необходимость разработки новых
эффективных методов иммунокоррекции [10, 12].
Диагностика аденовирусных инфекций плотоядных затруднена из-за изменчивых
и малохарактерных признаков заболеваний. В практических условиях
предварительный диагноз на инфекционный гепатит ставят на основании
эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.
Предложенные в настоящее время такие методы лабораторной диагностики
инфекционного гепатита собак, как РСК, ИФА и РДП требуют длительного
времени, а также особых условий постановки. Поэтому проблема разработки
новых и совершенствование существующих средств и методов лабораторной
диагностики этого заболевания остаётся актуальной [13, 14].
Одним из важных проблем в борьбе с инфекционным гепатитом является
своевременная достоверная диагностика. С этой целью применяются РДП и РСК.
Для постановки этих реакций необходим вируссодержащий материал, получение
которого на культуре клеток является труднодоступным, весьма трудоемким
процессом и требует больших материальных затрат.
Возникает необходимость изыскания новых более совершенных средств и
методов выявления инфекционного гепатита у животных, доступных по
стоимости, простоте техники постановки в условиях лаборатории и лечебниц и
быстроте получения результатов.
Цель исследований. Целью настоящей работы является изыскание
высокоэффективных средств, обладающих вирусингибирующим и
иммунокоррегирующим действием на больных инфекционным гепатитом собак.
Задачи исследований. Для достижения указанной цели на разрешение
поставлены следующие задачи:
- изучить вирусингибирующее действие антицеллюлярного иммуноглобулина
на культурах клеток;
- изучить иммунокоррегирующее действие антицеллюлярного иммуноглобулина
на больных инфекционным гепатитом собаках;
- разработка эритроцитарного диагностикума для обнаружения
инфекционного гепатита у собак.
Научная новизна результатов исследований.
- изучено вирусингибирующее действие антицеллюлярного иммуноглобулина;
- изучено иммунокоррегирующее действие антицеллюлярного иммуноглобулина
и определена возможность его применения при инфекционном гепатите собак;
- разработан метод изготовления антительного диагностикума для
выявления антигена, возбудителя инфекционного гепатита у собак.
Практическая значимость результатов исследований. Применение
предложенного нами антицеллюлярного иммуноглобулина позволит более успешно
осуществлять противоэпизоотические мероприятия, направленные на борьбу с
указанным заболеванием плотоядных животных.
Использование в ветеринарной практике РНГА с эритроцитарным
диагностикумом даст возможность обнаруживать возбудителя инфекционного
гепатита в исследуемом материале с целью выявления инфекционного гепатита у
собак;
Результаты научных исследований используются при проведении занятий со
студентами по дисциплинам Патологическая анатомия и Болезни кошек и
собак.
Основные положения, выносимые на защиту:
- результаты вирусингибирующего и иммунокоррегирующего действия
антицеллюлярного иммуноглобулина;
- способ получения эритроцитарного диагностикума для РНГА;
- данные по обнаружению возбудителя инфекционного гепатита собак с
помощью эритроцитарного антительного диагностикума.
Внедрение результатов исследований. Результаты диссертационной работы
применяются для иммунокоррекции инфекционного гепатита у собак в
ветеринарных лечебницах г. Алматы.
Материалы исследований используются при чтении лекций и проведении
лабораторно-практических занятий по дисциплинам Патологическая анатомия и
Болезни кошек и собак в Казахском национальном аграрном университете.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на
Международной научно-практической ветеринарной конференции (г. Алматы,
2005); Международной конференции Актуальные проблемы болезней молодняка в
современных условиях (г. Воронеж, 2006); Международной научно-практической
ветеринарной конференции посвященной 100-летию со дня рождения К.П.
Студенцова (г. Алматы, 2006); Международной научно-практической
ветеринарной конференции посвященная 100 - летию Ермекова М.А (г. Алматы,
2006); Международной научно-практической конференций Валихановские чтения-
12 (Кокшетау 2007).
Связь диссертации с планами НИР Казахского национального аграрного
университета. Диссертация является фрагментом научно-исследовательской
программы Казахского национального аграрного университета “Диагностика и
лечение аутоиммунных болезней животных на 2001 – 2005 годы (№ гос.
регистрации 0101РК00254).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 7
работ, в том числе 2 положительных решении на выдачу предпатента на
изобретение Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления
инфекционного гепатита у собак, заявка № 20060742.1 от и Способ
получение антицеллюлярного иммуноглобулина для иммунокоррекции
инфекционного гепатита у плотоядных животных Комитета по правам
интеллектуальной собственности, Министерства юстиции Республики Казахстан
на заявки за №20060743.1г.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах
компьютерного текста (word) и состоит из введения, обзора литературы,
собственных исследований, анализа результатов собственных исследований,
выводов, списка литературы и приложения.
Материалы диссертации иллюстрированы 45 таблицами и 6 фотоснимками.
Библиография включает 174 наименования источников литературы, в т.ч. 46
источников авторов дальнего зарубежья.
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Общие сведения об инфекционном гепатите плотоядных
Инфекционный гепатит собак (Hepatitis infectiosa) весьма контагиозная
болезнь, протекающая с лихорадкой, воспалительными процессами слизистых
оболочек глаз, катаром дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, а
также с поражением печени [12, 13, 14, 15, 16].
Болезнь регистрируется в США, Англии, Франции, ГДР, ФРГ, Польше,
Венгрии, Румынии, Швеции Швейцарии и в других странах мира. В Советском
Союзе она установлена в 1953 г. и регистрируется в виде спорадических
случаев и небольших энзоотии среди собак в питомниках служебного
собаководства [17, 18].
В Советском Союзе инфекционный гепатит собак в первый раз был
диагностирован гистологический по специфическим включениям. Это же
заболевание в Советском Союзе наблюдали у собак в период энзоотических
вспышек в питомнике служебного собаководства [19, 20, 21].
Экономический ущерб, наносимый инфекционным гепатитом в собаководстве,
определяется высокой летальностью заболевших животных, а также большим
количеством пропустований, массовыми абортами и рождением нежизнеспособного
молодняка. В естественных условиях при не осложненном течении болезни
гибель среди животных достигает 10 - 15%, а при осложненных формах может
составлять 70 - 80%.
В естественных условиях к инфекционному гепатиту восприимчивы собаки
всех возрастов и пород. Болезнь регистрируется также среди лисиц, песцов,
енотов, волков и хорьков. Основным источником инфекции являются больные
собаки. Вирус может выделяться с мочой, носовой слизью, конъюнктивальным
секретом и калом. Характерной эпизоотологической особенностью инфекционного
гепатита собак является длительное вирусоносительство у животных,
продолжающееся в течение ряда лет. Это подтверждается неоднократными
случаями заноса инфекции в благополучные хозяйства при закупке племенных
самцов и самок, в число которых попали хронические больные [22, 23, 24].
Инфекционным гепатитом собаки заражаются чаще всего оральным или
назальным путем, чему во многом способствует рефлекс обнюхивания этими
животными мест выделения мочи и кала другими животными. Источником инфекции
могут являться взрослые собаки, в организме которых вирус сохраняется до 9
месяцев и выделяется с мочой, каловыми массами, а также отделяемыми из
дыхательных путей.
Естественное заражение собак наблюдается через слизистые оболочки
носовой и ротовой полости, через желудочно-кишечный тракт и половые органы.
Установлены случаи распространения болезни при не соблюдении правил
асептики и антисептики, при хирургических операциях, прививках, взятии
крови и др. [25, 26, 27].
Инфекционный гепатит - острое вирусное заболевание, заражение которым
происходит в основном через органы дыхания, алиментарным путем, а также
через поврежденные участки кожи и слизистые оболочки животного; возможна
передача вируса внутриутробное, с молоком матери или через инвентарь.
Диагноз устанавливают на основании учета эпизоотологических данных,
клинических признаков, патологоанатомических изменений и обнаружения
внутриядерных включений (телец Рубарта) в печеночных клетках, а также
данных серологического исследования сыворотки крови [28, 29, 30].
К заболеванию инфекционным гепатитом подвержены собаки всех возрастов и
пород. Основным резервуаром и природным очагом инфекции являются больные и
переболевшие плотоядные животные. Возбудитель длительное время выделяется с
мочой, носовой слизью, конъюнктивальным секретом и калом. При естественном
заражении собак вирусом инфекционного гепатита инкубационный период
продолжается от 3 до 9 дней, но иногда и дольше; при экспериментальном
заражении он составляет 6—8 дней [31, 32, 33, 34, 35].
Инфекционный гепатит распространяется в основном среди собак и пушных
зверей (песцов, лисиц) спорадически или в виде эпизоотии, поражая от 40 до
75 % поголовья. Менее восприимчивы к болезни кошки, хорьки и морские
свинки. Имели место случаи заболевания этой инфекцией и человека.
Инфекционный гепатит нередко возникает на фоне других болезней как чума,
гельминтозы и авитаминозы. При не осложненном течении болезни гибель среди
животных достигает до 10 %, а при осложненных формах до 80%, При остром
течении болезни наблюдается внезапная гибель щенков. При хроническом
течении и переболевшие животные длительное время являются вирусоносителями.
Рождающийся от таких животных приплод нередко болеет без выраженных
признаков болезни. У переболевших животных создается стойкий
продолжительный иммунитет [36, 37].
Энзоотия инфекционного гепатита носит сезонный характер, но чаще
наблюдается весной и летом при появлении молодняка. Спорадические же случаи
заболевания встречаются в любое время года и связаны в основном с
обострением латентного или хронического течения болезни под влиянием каких-
либо неблагоприятных условий [38, 39].
Течение инфекционного гепатита в собаководческих питомниках имеет
определенную последовательность. В первоначальный период проявляются
единичные случаи болезни в острой форме. В последующем при не проведении
экстренных ветеринарно-санитарных карантинных мероприятии, энзоотия широко
распространяется и охватывает в первые недели большое поголовье собак и
постепенно уменьшается до полной остановки на 2 – 3-е месяцы. Развития
энзоотии в таком виде не является непременной и во многом зависит от
состояния эпизоотической обстановки, числа заболевших животных и
длительности сохранения течения энзоотии. Количество заболевших и
летальность исхода могут варьировать в больших пределах и в основном
зависят от состояния упитанности, резистентности организма, условий
содержания и ухода за животными. Переболевшее маточное поголовье являются
вирусоносителями в течение многих лет, заражать нарождающихся от них
щенков, самцов-производителей при контакте с ними и во время вязки. У
переболевших собак независимо от тяжести перенесенного инфекционного
процесса может развиться длительный, почти пожизненный иммунитет. У больных
инфекцией животных антитела могут выявляться на 15—21-й день и достигают
высоких показателей на 30-е сутки [40, 41, 42].
Вероятно, что очагом возникновения вирусного гепатита в собаководческих
питомниках являются в основном переболевшие - вирусоносители. Это факт
подтверждается источника вирусного гепатита собак после поступления в
питомники переболевших животных [43, 44].
Устойчивость вируса инфекционного гепатита к физическим и химическим
факторам почти не изучена. Имеется лишь краткое сообщение, что вирус
инфекционного гепатита сравнительно устойчив к теплу и холоду и может
сохраняться более двух лет в зараженном питомнике, вызывая периодически
отдельные случаи или же массовые вспышки заболевания среди молодых собак.
Восприимчивость разных видов животных к вирусу инфекционного гепатита. К
вирусу инфекционного гепатита более восприимчивы щенки собак в возрасте до
1 года и щенки серебристо-черных лисиц [45, 46].
Вирусом инфекционного гепатита собак в экспериментальных условиях
восприимчивых животных удается заразить различными методами, но наиболее
эффективный из них для щенков конъюнктивальный. В естественных условиях
собаки в основном заражаются через пищеварительный тракт с кормом,
инфицированным мочой или другими секретами и экскретами больных собак.
Через двое - трое суток после заражения в ретикулярных и эндотелиальных
клетках появляются скопления вируса в виде внутриядерных включений которые
образуются в клетках печени, причем сначала в купферовских, затем в
печеночных клетках. В результате нарушения центральной части долек печени
развиваются дистрофические изменения в паренхиме органа, что ведет к
глубокому нарушению обмена веществ и интоксикации организма. Нарастающая
интоксикация приводит к дистрофическим изменениям в почках, в сердечной
мышце и множественным кровоизлияниям в слизистых и серозных оболочках, а
также в паренхиматозных органах, развивается полная картина развития
инфекционного процесса [47, 48, 49].
1.2 Клиническое проявление и патогенез инфекционного гепатита
Инкубационный период продолжается 1—3 недели, а после экспериментального
заражения 2—4 дня.. При острой форме клинические признаки проявляются в
отказе от корма, угнетение, рвота, иногда понос, тонзиллит; температура
тела 40—41°. Наблюдается лихорадка постоянного типа, которая сопровождается
лейкопенией и резко ускоренной реакцией оседания эритроцитов, к концу
болезни развивается лейкоцитоз, у некоторых животных появляется
асептический аваскулезный кератит. У павших больных животных увеличена
печени, яркого охряно-желтого цвета с множественными кровоизлияниями или
синюшная, иногда с фибринозными наложениями или сгустками крови;
студенистый отек стенки и ложа желчного пузыря, гиперемия, кровоизлияния и
студенистый отек клетчатки вилочковой железы, миндалин, шейных и брыжеечных
лимфатических узлов; скопление серозного или кровянистого экссудата в
брюшной полости; инвагинация кишечника [50, 51].
Инфекционный гепатит у собак, как правило в большинстве случаев
протекает остро с высокой температурой, болеют в основной щенки и молодые
собаки в возрасте до 1 года. В дни повышения температуры тела развивается
резко выраженная лейкопения — 3—2 тыс. лейкоцитов, сменяющаяся в период
понижения температуры значительным лейкоцитозом. При вскрытие в основном
гистологические изменения резко выражены в печени в виде очагового или
массивного некроза паренхимы с превращением клеток в круглые эозинофильными
окрашиваемые тельца, похожие на тельца Каунсильмена. Очаги некроза окружены
зонами жирового некробиоза. В паренхиме долек обильный инфильтрат из
пролиферированных клеток Купфера и круглых клеток. В головном мозгу явления
энцефалита: пролиферация эндотелия, интраадвентициальные муфты,
периваскулярный отек [52, 53].
Верификационный патоморфологический диагностический признак
инфекционного гепатита это обнаружение крупных внутриядерных включений
(телец Рубарта) в клетках печени, Купфера, эндотелиях сосудов, в
ретикулярных клетках всех органов, особенно селезенки, почек и
лимфатических узлов. Эти включения после окраски могут быть эозинофильными
или окрашенными в нейтральный цвет. Внутриядерные включения встречаются и в
эндотелии роговицы глаз. Обнаружение включений позволяет быстро и
достоверно определить диагноз [54, 55].
После проникновения вируса в центральную нервную систему возникает
нарушение ее регуляторной функции, сопровождающееся локомоторными
расстройствами и глубокими нарушениями процессов обмена. Тяжесть поражения
головного мозга собак при инфекционном гепатите вариабельна. Основой ее
являются изменения в сосудах, обусловленные эндотелиотропизмом вируса.
Наиболее ранними являются нарушения целости сосудов с некрозом отдельных
клеток. В дальнейшем в стенках сосудов и в периваскулярных пространствах
развивается отек, мононуклеарная инфильтрация, в клетках эндотелия
появляются тельца Рубарта. В наиболее тяжелых случаях наблюдаются различные
формы дистрофических изменений ганглиозных клеток. Поражение нервных
центров головного и спинного мозга обусловливает возникновение
функциональных расстройств, характерных для данного заболевания [56, 57].
Патологоанатомические изменения в органах при инфекционном гепатите
собак чрезвычайно разнообразны и зависят от продолжительности и тяжести
болезненного процесса. При остром течении болезни трупы собак обычно имеют
удовлетворительную упитанность. При вскрытии находят распространенный
(иногда геморрагический) отек подкожной клетчатки зобной и поджелудочной
желез. Характерным для инфекционного гепатита является отек стенки желчного
пузыря и его ложа. Более чем в 40% случаев в брюшной полости встречается
прозрачный желтоватый или кровянистый экссудат, имеющий вид чистой крови.
На висцеральной брюшине кишечника и на печени могут быть фибринозно-
геморрагические наложения.
Печень увеличена, с отчетливым дольчатым рисунком; одних случаях темно-
красная, полнокровная, в других - светлого желтовато-коричневого или яркого
охряного цвета, иногда с мелким неравномерным крапом под капсулой и на
поверхности разреза. Более чем в 90% случаев бросается в глаза значительный
студенистый отек стенки желчного пузыря. Селезенка примерно в 50% случаев
увеличена и полнокровна. В желудке обычно бывает только слизь, нередко
темно-коричневого или почти черного цвета. На слизистой оболочке желудка
возможны геморрагии, иногда эрозии. В кишечнике при вскрытии находят
незначительные изменения в виде утолщения слизистых оболочек тонкого и
толстого отделов, которые могут быть покрыты большим количеством слизи с
множественными кровоизлияниями. Отличительным признаком инфекционного
гепатита является студенистый отек и полнокровие вилочковой железы, в
большинстве случаев с множественными точечными кровоизлияниями в ней.
Вокруг вилочковой железы прилежащие ткани сильно отечные и могут
распространяться на шею, нижнюю поверхность груди и средостение. Селезенка
набухшая, вишнево-красного цвета, кровенаполнена, пульпа на разрезе сочная,
соскоб обильный. Иногда она бывает не увеличена, красновато-серого или
серовато-малинового цвета [58, 59, 60, 61, 62, 63].
При естественном заражении собак вирусом инфекционного гепатита
инкубационный период продолжается от 3 до 9 дней, но иногда и дольше; при
экспериментальном заражении он составляет 6—8 дней. Болезнь обычно
начинается с постепенного нарастания угнетенного состояния, вялости.
Больные собаки менее подвижны, больше лежат, у них отмечают капризный
аппетит. Вскоре животные отказываются от корма, с трудом встают, при
движении походка у них шаткая. Одновременно у заболевших собак появляются
характерные признаки гепатита: рвота с примесью желчи, односторонние или
двусторонние кератиты и тонзиллит.
В дальнейшем больные животные начинают быстро худеть, появляется анемия
слизистых оболочек глаз и ротовой полости, у некоторых провляется
выраженная желтушность склеры. С желтушностью и анемией моча принимает
темно-бурую окраску, что также часто является характерным признаком
гепатита. Животные болезненно реагируют на пальпацию в области печени,
становятся как бы осторожными в своих движениях. При этом они часто
принимают позу сидячей собаки, широко расставив передние лапы.
При инфекционном гепатите собак своеобразно проявляется температурная
реакция. В начальный период болезни температура держится нормальной, а
затем на 4 - 6-е дни быстро повышается до 41 - 41,7° и находится на этом
уровне почти до самой гибели животного. В период лихорадки носовое
зеркальце у собак бывает сухим, и они испытывают повышенную жажду. С
повышением температуры тела наблюдается расстройство со стороны сердечно-
сосудистой системы. Число сердечных ударов возрастает до 90—110 и выше в
минуту. По качеству сердечный толчок усилен, а пульс при тяжелом течении
болезни ослаблен, иногда аритмичный. Дыхание учащенное — до 40—50 в минуту.
При прослушивании легких слышны хрипы. Развивается резко выраженная
лейкопения — 3—2 тыс. лейкоцитов, сменяющаяся в период понижения
температуры значительным лейкоцитозом (до 30—35 тыс.).
Продолжительность болезни у собак бывает различная от нескольких суток
до двух-трех недель. Погибают они, обычно находясь в глубоком коматозном
состоянии, совершенно не реагируя на внешние раздражения. Иногда за
несколько часов до наступления смерти у отдельных животных наблюдается
подергивание отдельных групп мышц, судороги и непроизвольные движения
конечностей.
При хроническом течении гепатита у собак симптомы болезни бывают
выражены, стерто и носят часто неопределенный характер. Иногда они
проявляются снижением или временной потерей аппетита, расстройствами
деятельности желудочно-кишечного тракта в виде диареи, которая может
сменяться запорами, и прогрессирующей кахексией. При хроническом течение
инфекции наблюдаются редкие кратковременные подъемы температуры тела,
различны как по интенсивности, так и по продолжительности обострения.
Наблюдается также и тяжелое генерализованное, септическое течение болезни.
Ремиссии между приступами лихорадки могут не иметь определенной
закономерности, температура повышается с интервалом несколько дней, недель
и даже месяц. Приступы лихорадки сопровождаются проявлением отклонений со
стороны сердечно-сосудистой системы, различной степени анемий слизистых
оболочек, явлением гастроэнтерита. Хронически больные самки чаще всего
абортируют или приносят нежизнеспособных щенят. У родившихся от больных и
переболевших инфекционным гепатитом самок щенков часто происходит
внутриутробное заражение инфекцией. У хронический больных животных
наблюдаются долго не проходящие кератиты одного или обоих глаз с
помутнением роговицы. [64, 65, 66, 67, 68, 69].
1.3 Диагностика инфекционного гепатита
Вирус инфекционного гепатита проходит через фильтры Зейтца ЕК, свечи
Беркефельда и Шамберлана и задерживается коллоидными мембранами. Размеры
его, по данным электронной микроскопии до 55—96 нм. По морфологическим,
антигенным и физико-химическим свойствам вирус инфекционного гепатита собак
отнесен к обширной группе аденовирусов. Генетическую информацию в нем несет
ДНК, вирусная капсула имеет кубическую симметрию и состоит из 252
капсомеров. Каждый капсомер состоит из 5—6 и более мелких субстанций.
Вирусные частицы в культуре ткани клеток часто имеют форму кристаллических
скоплений. В составе вируса не установлено липидов. Вирус содержит
преципитирующий, гемагглютинирующий и комплементфиксирующий антигены.
Биологические свойства вируса подвержены большим изменениям. В частности, в
процессе лабораторных пассажей он способен изменять свою патогенность для
собак. Доказана однородность штаммов вируса инфекционного гепатита,
выделенных от естественно заразившихся гепатитом животных различных видов.
Вирус, выделенный от собак, может вызвать болезнь у песцов, лисиц, енотов,
и, наоборот, вирус, выделенный от зверей, вызывает гепатит у собак с
характерными изменениями в печени и расстройством ее функций.
В зависимости от выраженности тропизма к ткани печени или мозга штаммы
вируса подразделяют на нейротропные и гепатотропные, причем тропизм можно
усилить искусственно. Вирус проявляет цитопатическое действие в культурах
клеток почки и семенника собаки, почки хорька, енота и поросенка, формируя
бляшки в монослое [70, 71].
Возбудитель инфекционного гепатита плотоядных имеет иммунологическое
родство с вирусом инфекционного ларинготрахеита собак, а также
одностороннюю антигенную связь с типом 7 аденовируса человека (сыворотка
крови переболевшего человека реагирует с антигеном гепатита собак, но не
наоборот) [72, 73].
Вирус устойчив к различным физическим факторам. При замораживании,
высушивании в 50 %-ном растворе глицерина при комнатной температуре вирус
остается вирулентным в течение нескольких лет, в природе он может
сохраняться более двух лет. Высокая температура действует губительно на
вирус, при 60—70° он теряет свою вирулентность в течение 40 - 50 мин, при
нагревании до 100° за 1 мин. Вирус неустойчив к формалину, лизолу, фенолу,
свежегашеной извести, которые инактивируют его в течение 30 мин. Проявляет
выраженную устойчивость к эфиру, хлороформу, метанолу, антибиотикам и
ультрафиолетовым лучам [74, 75].
Диагностика аденовирусных инфекций плотоядных затруднена из-за
изменчивых и малохарактерных признаков заболеваний. Исследования ряда
зарубежных и отечественных авторов показали, что в результате перенесения
аденовирусного заболевания наблюдается увеличение нейтрализующих антител к
выделенному типу вируса, а также увеличение комплементсвязывающих антител.
Это увеличение наблюдается с большой регулярностью и имеет диагностическое
значение. Инфекционный гепатит собак имеет немало общих клинических
признаков с чумой, парвовирусным, короновирусным энтеритом и некоторыми
другими болезнями, что следует всегда дифференцировать при диагностических
исследованиях [76, 77].
Диагноз на инфекционный гепатит ставят главным образом на основании
эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных, а также
вирусологических исследований и биопробы. В качестве исследуемого материала
у больных собак в период острого течения болезни берут сыворотку крови, а у
павших животных - асцитическую жидкость или печень. Суспензию из печени
готовят общепринятым методом ... продолжение
Вы можете абсолютно на бесплатной основе полностью просмотреть эту работу через наше приложение.
Похожие работы
Дисциплины
- Информатика
- Банковское дело
- Оценка бизнеса
- Бухгалтерское дело
- Валеология
- География
- Геология, Геофизика, Геодезия
- Религия
- Общая история
- Журналистика
- Таможенное дело
- История Казахстана
- Финансы
- Законодательство и Право, Криминалистика
- Маркетинг
- Культурология
- Медицина
- Менеджмент
- Нефть, Газ
- Искуство, музыка
- Педагогика
- Психология
- Страхование
- Налоги
- Политология
- Сертификация, стандартизация
- Социология, Демография
- Статистика
- Туризм
- Физика
- Философия
- Химия
- Делопроизводсто
- Экология, Охрана природы, Природопользование
- Экономика
- Литература
- Биология
- Мясо, молочно, вино-водочные продукты
- Земельный кадастр, Недвижимость
- Математика, Геометрия
- Государственное управление
- Архивное дело
- Полиграфия
- Горное дело
- Языковедение, Филология
- Исторические личности
- Автоматизация, Техника
- Экономическая география
- Международные отношения
- ОБЖ (Основы безопасности жизнедеятельности), Защита труда
