Инфекционная болезень - бешенство
Введение
I Литературный обзор
1.1 Возбудитель болезни
1.2 Эпизоотологические данные
1.3 Патогенез
1.4 Течение и симптомы
1.5 Патологоанатомические изменения
1.6 Диагностика бешенства
1.7 Дифференциальный диагноз
1.8 Лечение
1.9 Иммунитет
1.10 Профилактика и меры борьбы
II Собственные исследования
2.1 Исследования, проводимые в областной ветеринарной лаборатории
2.2 Исследования в Шымкентской городской территориальной
инспекции МСХ РК
2.2.1 Исследование последнего выявленного случая бешенства и данные
за последние три года
2.2.2 Санитарно.эпидемиологические и ветеринарно.санитарные правила
по профилактике и борьбе с бешенством
III Результаты собственных исследований
IV Безопасность жизнедеятельности и охрана труда
V Охрана окружающей среды
VI Экономика и менеджмент
VII Бизнес.план
Выводы и предложения
Список использованных источников
Приложение
I Литературный обзор
1.1 Возбудитель болезни
1.2 Эпизоотологические данные
1.3 Патогенез
1.4 Течение и симптомы
1.5 Патологоанатомические изменения
1.6 Диагностика бешенства
1.7 Дифференциальный диагноз
1.8 Лечение
1.9 Иммунитет
1.10 Профилактика и меры борьбы
II Собственные исследования
2.1 Исследования, проводимые в областной ветеринарной лаборатории
2.2 Исследования в Шымкентской городской территориальной
инспекции МСХ РК
2.2.1 Исследование последнего выявленного случая бешенства и данные
за последние три года
2.2.2 Санитарно.эпидемиологические и ветеринарно.санитарные правила
по профилактике и борьбе с бешенством
III Результаты собственных исследований
IV Безопасность жизнедеятельности и охрана труда
V Охрана окружающей среды
VI Экономика и менеджмент
VII Бизнес.план
Выводы и предложения
Список использованных источников
Приложение
Бешенство (Rabies) – остро протекающая инфекционная болезнь, характеризующаяся признаками диссеминированного полиоэнцефаломиелита.
Бешенство известно со времён глубокой древности. Упоминание о нём найдены в кодексе законов Древнего Вавилона (2300 лет до нашей эры), в произведениях учёных и писателей Древней Греции, Древнего Рима. Ещё в ХVI в. Джироламо Фракасторо (Италия) отнёс бешенство к числу болезней, вызываемых живым началом («контагием»). В 1780 г. Д.Самойлович в России высказал твёрдое убеждение в заразности этой болезни. Но бесспорные доказательства её инфекционной природы были получены только в ХIХ в. Цинке во Франции (1804) первым экспериментально доказал заразительность слюны бешеных собак. Его соотечественник Галтье (1879 – 1881) искусственно воспроизвёл бешенство у кроликов и предпринял попытку иммунизации овец путём внутривенного введения слюны больных животных. Результаты исследований, проведённых в этот период, создали предпосылки для открытия Л.Пастера и его учеников (1881 – 1889). Л.Пастер доказал тропизм возбудителя бешенства к ткани мозга и добился его ослабления путём перевивок (пассажей) от кролика к кролику при интрацеребральном введении мозговой суспензии. Полученный вирус, проявлявший патогенность только при внутримозговом заражении и отличавшийся сокращённым и постоянным (6 – 7) дней инкубационным периодом для кроликов, был назван фиксированным (Virus fixe). После дополнительной инактивации путём высушивания над кристаллами едкого кали Л.Пастер использовал спинной мозг заражённого кролика для изготовления антирабической вакцины. В 1885 г. были сделаны первые вынужденные прививки людям. Среди учеников и последователей Л.Пастера выдающуюся роль играли русские учёные И.И.Мечников и Н.Ф.Гамалея. По их инициативе в 1886 г. в Одессе была учреждена первая в России пастеровская станция.
Важным этапом дальнейших научных исследований было открытие специфических протоплазматических включений в нейронах головного мозга (В.Бабеш, 1887, и А.Негри,1903). Микроскопическое исследование головного мозга на наличие телец Бабеша-Негри стало распространённым методом диагностики бешенства. В дореволюционной России большую работу по изучению бешенства животных проводили Х.И.Гельман, Н.Н.Мари, С.С.Евсеенко, И.Н.Ланге, Е.М.Земмер. В первые годы Советской власти значительный вклад в изучение болезней внесли Н.А.Михин, А.В.Дидюлин, С.Н.Муромцев, Е.В.Туревич, А.И.Савватеев, В.Г.Ушаков, П.Г.Орлов, Р.А.Канторович, М.А.Селимов, Н.В.Лихачёв, В.П.Назаров, К.Н.Бучнев, Д.Ф.Осидзе, Н.А.Ковалёв и многие другие представители медицинской и ветеринарной наук.
Бешенство известно со времён глубокой древности. Упоминание о нём найдены в кодексе законов Древнего Вавилона (2300 лет до нашей эры), в произведениях учёных и писателей Древней Греции, Древнего Рима. Ещё в ХVI в. Джироламо Фракасторо (Италия) отнёс бешенство к числу болезней, вызываемых живым началом («контагием»). В 1780 г. Д.Самойлович в России высказал твёрдое убеждение в заразности этой болезни. Но бесспорные доказательства её инфекционной природы были получены только в ХIХ в. Цинке во Франции (1804) первым экспериментально доказал заразительность слюны бешеных собак. Его соотечественник Галтье (1879 – 1881) искусственно воспроизвёл бешенство у кроликов и предпринял попытку иммунизации овец путём внутривенного введения слюны больных животных. Результаты исследований, проведённых в этот период, создали предпосылки для открытия Л.Пастера и его учеников (1881 – 1889). Л.Пастер доказал тропизм возбудителя бешенства к ткани мозга и добился его ослабления путём перевивок (пассажей) от кролика к кролику при интрацеребральном введении мозговой суспензии. Полученный вирус, проявлявший патогенность только при внутримозговом заражении и отличавшийся сокращённым и постоянным (6 – 7) дней инкубационным периодом для кроликов, был назван фиксированным (Virus fixe). После дополнительной инактивации путём высушивания над кристаллами едкого кали Л.Пастер использовал спинной мозг заражённого кролика для изготовления антирабической вакцины. В 1885 г. были сделаны первые вынужденные прививки людям. Среди учеников и последователей Л.Пастера выдающуюся роль играли русские учёные И.И.Мечников и Н.Ф.Гамалея. По их инициативе в 1886 г. в Одессе была учреждена первая в России пастеровская станция.
Важным этапом дальнейших научных исследований было открытие специфических протоплазматических включений в нейронах головного мозга (В.Бабеш, 1887, и А.Негри,1903). Микроскопическое исследование головного мозга на наличие телец Бабеша-Негри стало распространённым методом диагностики бешенства. В дореволюционной России большую работу по изучению бешенства животных проводили Х.И.Гельман, Н.Н.Мари, С.С.Евсеенко, И.Н.Ланге, Е.М.Земмер. В первые годы Советской власти значительный вклад в изучение болезней внесли Н.А.Михин, А.В.Дидюлин, С.Н.Муромцев, Е.В.Туревич, А.И.Савватеев, В.Г.Ушаков, П.Г.Орлов, Р.А.Канторович, М.А.Селимов, Н.В.Лихачёв, В.П.Назаров, К.Н.Бучнев, Д.Ф.Осидзе, Н.А.Ковалёв и многие другие представители медицинской и ветеринарной наук.
1.А.А.Конопаткин «Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных», Москва, «Колос», 1985.
2. В.П.Урбан «Практикум по эпизоотологии и инфекционным болезням ветеринарной санитарией», Москва, «КолосС», 2004.
3.А.А.Конопаткин «Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных», Москва, «Колос», 1993.
4. Е.С. Воронин «Практикум по клинической диагностике болезней животных», Москва, «КолосС», 2004.
5. Л.А. Абрамова «Фармакотерапевтический справочник ветеринарного врача», Ростов-на-Дону, «Феникс», 2003.
6. Л. Дубровина «Болезни и лечение собак» Ветеринарный форум, Москва, «Аквариум», 2005.
7. В.Н. Сюрина «Диагностика вирусных болезней животных», Москва, «Агропромиздат», 1991.
8. В.Н. Сюрина «Лабораторная диагностика вирусных болезней животных», Москва, «Колос», 1972.
9. ГОСТ 26075 – 84 . Методы лабораторной диагностики бешенства.
10. Гуславский И.И., Бияшев К.Б. «Организация ветеринарного дела», Алматы, 1996.
11. Бияшев К.Б., Мынжанов М.Т., Бияшев Б.К. «Организация ветеринарного дела» - Алматы, 2003.
12. Закон РК «О ветеринарии» от 10 июля 20002 г.
13. М.В. Мишина «Если Вы завели собаку…» альбом-справочник, Ташкент, «ШАРК» 1993.
14. Бакулов И.А. «Словарь ветеринарных терминов», Москва, АОЗТ «Эдельвейс», 1995.
15. В.А. Линецкая «Охрана труда, техника безопасности и пожарная профилактика на предприятиях химической промышленности и в лабораториях», Москва, «Химия», 1976.
16. Г.В. Макаров «Охрана труда», Москва, «Химия», 1977.
17. Закон РК «Об охране труда», Алматы, «Каз.правда», 22 января 1993.
18. Закон РК «Об охране окружающей среды», Алматы, «Каз.правда», 15 июля 1997.
19. К.Б. Бердалиев « Основы управления экономикой Казахстана», Алматы, «Экономика», 1998.
20. Г.А.Калиев «Справочник по экономике», Алматы, «Бастау», 1993.
21. А.С. Волков, А.А.Марченко «Бизнес-планирование», Учебное пособие, Москва, 2005.
22. Пособие по составлению бизнес-плана. ERNST&YOUNG; Москва, 1995 г.
2. В.П.Урбан «Практикум по эпизоотологии и инфекционным болезням ветеринарной санитарией», Москва, «КолосС», 2004.
3.А.А.Конопаткин «Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных», Москва, «Колос», 1993.
4. Е.С. Воронин «Практикум по клинической диагностике болезней животных», Москва, «КолосС», 2004.
5. Л.А. Абрамова «Фармакотерапевтический справочник ветеринарного врача», Ростов-на-Дону, «Феникс», 2003.
6. Л. Дубровина «Болезни и лечение собак» Ветеринарный форум, Москва, «Аквариум», 2005.
7. В.Н. Сюрина «Диагностика вирусных болезней животных», Москва, «Агропромиздат», 1991.
8. В.Н. Сюрина «Лабораторная диагностика вирусных болезней животных», Москва, «Колос», 1972.
9. ГОСТ 26075 – 84 . Методы лабораторной диагностики бешенства.
10. Гуславский И.И., Бияшев К.Б. «Организация ветеринарного дела», Алматы, 1996.
11. Бияшев К.Б., Мынжанов М.Т., Бияшев Б.К. «Организация ветеринарного дела» - Алматы, 2003.
12. Закон РК «О ветеринарии» от 10 июля 20002 г.
13. М.В. Мишина «Если Вы завели собаку…» альбом-справочник, Ташкент, «ШАРК» 1993.
14. Бакулов И.А. «Словарь ветеринарных терминов», Москва, АОЗТ «Эдельвейс», 1995.
15. В.А. Линецкая «Охрана труда, техника безопасности и пожарная профилактика на предприятиях химической промышленности и в лабораториях», Москва, «Химия», 1976.
16. Г.В. Макаров «Охрана труда», Москва, «Химия», 1977.
17. Закон РК «Об охране труда», Алматы, «Каз.правда», 22 января 1993.
18. Закон РК «Об охране окружающей среды», Алматы, «Каз.правда», 15 июля 1997.
19. К.Б. Бердалиев « Основы управления экономикой Казахстана», Алматы, «Экономика», 1998.
20. Г.А.Калиев «Справочник по экономике», Алматы, «Бастау», 1993.
21. А.С. Волков, А.А.Марченко «Бизнес-планирование», Учебное пособие, Москва, 2005.
22. Пособие по составлению бизнес-плана. ERNST&YOUNG; Москва, 1995 г.
Дисциплина: Медицина
Тип работы: Дипломная работа
Бесплатно: Антиплагиат
Объем: 66 страниц
В избранное:
Тип работы: Дипломная работа
Бесплатно: Антиплагиат
Объем: 66 страниц
В избранное:
Аннотация
Данная дипломная работа состоит из 70 листов и включает в себя
титульные листы, саму аннотацию, содержание, нормативные ссылки,
определения, обозначения и сокращения, введение, литературный обзор,
собственные исследования, результаты собственных исследований, а также
разделы по безопасности жизнедеятельности и охране труда, охране окружающей
среды, экономике и менеджменту, бизнес-планированию. В конце работы
подводятся итоги и излагаются предложения. В заключении приводится список
использованных источников.
Основную часть дипломной работы составляют литературный обзор и
собственные исследования. В первом описывается исследуемая болезнь
(возбудитель, эпизоотологические данные, патогенез, течение и симптомы,
патологоанатомические изменения, диагностика, лечение и иммунитет,
профилактика и меры борьбы), а в собственных исследованиях проведение
опознавательной и научной работы в областной ветеринарной лаборатории и
Шымкентской городской территориальной инспекции МСХ РК.
В разделе по безопасности жизнедеятельности и охране труда
представлены основные требования по технике безопасности при работе в
лаборатории. Экологические проблемы, связанные с изучаемой болезнью
рассказываются в разделе по охране окружающей среды. В разделах по
экономике и бизнес-плану излагаются методы по планированию и подсчету
финансов при проведение санитарно-эпидемиологических и ветеринарно-
санитарных мероприятий по профилактике и борьбе с бешенством.
Содержание
Введение
I Литературный обзор
1.1 Возбудитель болезни
1.2 Эпизоотологические данные
1.3 Патогенез
1.4 Течение и симптомы
1.5 Патологоанатомические изменения
1.6 Диагностика бешенства
1.7 Дифференциальный диагноз
1.8 Лечение
1.9 Иммунитет
1.10 Профилактика и меры борьбы
II Собственные исследования
2.1 Исследования, проводимые в областной ветеринарной лаборатории
2.2 Исследования в Шымкентской городской территориальной
инспекции МСХ РК
2.2.1 Исследование последнего выявленного случая бешенства и данные
за последние три года
2.2.2 Санитарно-эпидемиологические и ветеринарно-санитарные правила
по профилактике и борьбе с бешенством
III Результаты собственных исследований
IV Безопасность жизнедеятельности и охрана труда
V Охрана окружающей среды
VI Экономика и менеджмент
VII Бизнес-план
Выводы и предложения
Список использованных источников
Приложение
Нормативные ссылки
В настоящей дипломной работе использовались ссылки на следующие
нормативные документы:
ГОСТ 2.102-68 ЕСКД. Виды и комплектность конструкторских документов.
ГОСТ 2.104-68 ЕСКД. Основные надписи.
ГОСТ 2.201-80 ЕСКД. Обозначение изделий и конструкторских документов.
ГОСТ 2.301-68 ЕСКД. Форматы.
ГОСТ 2.601-95 ЕСКД. Эксплуатационная документация.
ГОСТ 2.304-81 ЕСКД. Шрифты чертёжные.
ФС ЮКГУ 4.6-002-2004 СМК. Правила оформления учебной документации. Общие
требования к графическим документам.
Определения
Иммунизация – создание искусственного иммунитета.
Антиген – вещество, которое при парэнтеральном введении обуславливает
образование антител.
Антитела – специфические реактивные продукты, возникающие в организме
животных в результате парэнтерального введения чужеродных веществ
(антигены).
Эпизоотия – эпидемия среди животных.
Алиментарный – пищевой.
Дегенерация – вырождение; перерождение.
Инкубация – скрытый период инфекционного заболевания, протекающий от
момента заражения до появления явных клинических признаков болезни.
Атрофия – исчезание тканей с уменьшением объёма либо без воспаления
или перерождения (простая атрофия), либо с изменением тканевых элементов
(дегенеративная атрофия).
Парез – неполный паралич.
Паралич – потеря способности активно пользоваться органами движения.
Дезинфекция – обеззараживание, применение средств для уничтожения
возбудителя болезни.
Пастеризация – обеззараживание жидких пищевых продуктов путём
нагревания их до 68°.
Сенсибилизация – возбуждение в организме или клетке чувствительности к
действию какого-либо агента.
Нуклеотиды – соединения нуклеозидов с фосфорной кислотой, составные
части нуклеиновых кислот.
Гастроэнтерит – тяжело протекающие одновременно воспаления желудка и
кишок, захватывающие патологическим процессом слизистый, подслизистый,
нередко мышечный и серозный слои.
Атония преджелудков – расстройство и прекращение моторной деятельности
рубца, сетки и книжки.
Болезнь Ауески – инфекционная болезнь, проявляющаяся симптомами
воспаления лёгких, поражения центральной нервной системы, лихорадкой, а
также сильным зудом и расчёсами у всех животных, кроме свиней, норок и
соболей.
Чума плотоядных – острая контагиозная вирусная болезнь, проявляющаяся
лихорадкой, воспалением слизистой оболочки глаз, дыхательного и
пищеварительного тракта, пневмонией, экзантемой и признаками поражения
центральной нервной системы.
Биопроба - выделение вируса от больных, убитых или павших животных
путём инокулирования патологического материала белым мышам и последующей
его идентификации.
Обозначения и сокращения
нед. – неделя
мин. – минута
ч – час
см – сантиметр
мм – миллиметр
нм – нанометр
км – километр
мкм – микрометр
мкл – микролитр
г – грамм
мг – миллиграмм
л – литр
мл – миллилитр
ед. – единица измерения
ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК – рибонуклеиновая кислота
ВОЗ – Всемирная Организация Здравоохранения
°C – градус
% - процент
Введение
Бешенство (Rabies) – остро протекающая инфекционная болезнь,
характеризующаяся признаками диссеминированного полиоэнцефаломиелита.
Бешенство известно со времён глубокой древности. Упоминание о нём
найдены в кодексе законов Древнего Вавилона (2300 лет до нашей эры), в
произведениях учёных и писателей Древней Греции, Древнего Рима. Ещё в ХVI
в. Джироламо Фракасторо (Италия) отнёс бешенство к числу болезней,
вызываемых живым началом (контагием). В 1780 г. Д.Самойлович в России
высказал твёрдое убеждение в заразности этой болезни. Но бесспорные
доказательства её инфекционной природы были получены только в ХIХ в. Цинке
во Франции (1804) первым экспериментально доказал заразительность слюны
бешеных собак. Его соотечественник Галтье (1879 – 1881) искусственно
воспроизвёл бешенство у кроликов и предпринял попытку иммунизации овец
путём внутривенного введения слюны больных животных. Результаты
исследований, проведённых в этот период, создали предпосылки для открытия
Л.Пастера и его учеников (1881 – 1889). Л.Пастер доказал тропизм
возбудителя бешенства к ткани мозга и добился его ослабления путём
перевивок (пассажей) от кролика к кролику при интрацеребральном введении
мозговой суспензии. Полученный вирус, проявлявший патогенность только при
внутримозговом заражении и отличавшийся сокращённым и постоянным (6 – 7)
дней инкубационным периодом для кроликов, был назван фиксированным (Virus
fixe). После дополнительной инактивации путём высушивания над кристаллами
едкого кали Л.Пастер использовал спинной мозг заражённого кролика для
изготовления антирабической вакцины. В 1885 г. были сделаны первые
вынужденные прививки людям. Среди учеников и последователей Л.Пастера
выдающуюся роль играли русские учёные И.И.Мечников и Н.Ф.Гамалея. По их
инициативе в 1886 г. в Одессе была учреждена первая в России пастеровская
станция.
Важным этапом дальнейших научных исследований было открытие
специфических протоплазматических включений в нейронах головного мозга
(В.Бабеш, 1887, и А.Негри,1903). Микроскопическое исследование головного
мозга на наличие телец Бабеша-Негри стало распространённым методом
диагностики бешенства. В дореволюционной России большую работу по изучению
бешенства животных проводили Х.И.Гельман, Н.Н.Мари, С.С.Евсеенко,
И.Н.Ланге, Е.М.Земмер. В первые годы Советской власти значительный вклад в
изучение болезней внесли Н.А.Михин, А.В.Дидюлин, С.Н.Муромцев, Е.В.Туревич,
А.И.Савватеев, В.Г.Ушаков, П.Г.Орлов, Р.А.Канторович, М.А.Селимов,
Н.В.Лихачёв, В.П.Назаров, К.Н.Бучнев, Д.Ф.Осидзе, Н.А.Ковалёв и многие
другие представители медицинской и ветеринарной наук.
I Литературный обзор
1.1 Возбудитель болезни
Возбудитель болезни – вирус, относящийся к роду лиссавирусов семейства
рабдовирусов. Как и другие рабдовирусы, он имеет пулевидную форму. Длина
вирионов – 180 нм, диаметр – 75 – 80 нм. Вирус удаётся культивировать в
развивающихся куриных и утиных эмбрионах, в культурах некоторых клеток.
Штаммы возбудителя бешенства, циркулирующие в природе (уличный вирус),
патогенны для всех теплокровных животных. В наиболее высоких титрах вирус
накапливается в центральной нервной системе заражённых животных, особенно
аммоновых рогах и коре больших полушарий головного мозга, в мозжечке и
продолговатом мозге. Высокий титр возбудителя бешенства и в слюнных и
слёзных железах.
Вирус обладает двумя основными антигенными компонентами. Растворимый
S-антиген (нуклепротеин капсиды) является общим для всей группы вирусов
бешенства и ответствен за продукцию комплементсвязывающих, преципитирующих
антител и антител, участвующих в реакции иммунофлюоресценции. Инфекционный
V-антиген (гликопротеид наружной оболочки вириона) вызывает образование
вируснейтрализующих антител, антигемагглютининов и обеспечивает
формирование иммунитета. Этот антиген типоспецифичен. На основе различий
гликопротеидного компонента, выявляемых в реакции перекрёстной защиты и
реакции нейтрализации, в группе вирусов бешенства выделяют 4 серотипа.
Абсолютное большинство полевых и лабораторных штаммов относится к первому
серотипу. Штаммы вирусов остальных серотипов пока выделены только в Африке.
Биологические свойства вируса бешенства, как и других вирусов, подвержены
естественной изменчивости. Установлено несколько биологических вариантов
уличного вируса. Чаще всего выделяют классические штаммы, которые медленно
фиксируются, вызывают типичную картину бешенства. Штаммы уличного вируса,
напротив, быстро фиксируются и после короткого инкубационного периода
вызывают паралитическую форму болезни, при которой не обнаруживают телец
Бабеша-Негри. Имеют определённые особенности штаммы вируса, выделяемые при
арктическом бешенстве (диковании) животных; болезни безумной собаки в
Западной Африке, при бешенстве крупного рогатого скота, распространяемом
летучими мышами-вампирами в Центральной и Южной Америке. Они с трудом
фиксируются и вызывают болезнь с преобладанием паралитических признаков.
Отклоняются от классических и биологические свойства многих штаммов
лисьего бешенства и тем более так называемых бешенствоподобных вирусов,
выделенных от мышевидных грызунов в Центральной Европе и от землеройки,
летучей мыши и насекомых в Африке.
Устойчивость. При 60ºС вирус инактивируется через 10 мин, при 100ºС –
мгновенно. Он устойчив к низким температурам и месяцами сохраняется в
замороженном мозге; в гниющем материале остаются жизнеспособным в течение 2
– 3 нед. Вирус быстро инактивируется при воздействии обычно используемых
дезинфицирующих растворов лизола (1 – 2 %-ный), щелочей, формалина,
хлорамина (2 – 3 %-ные).
1.2 Эпизоотологические данные
К бешенству восприимчивы все виды домашних и диких теплокровных
животных, а также и человек. Повышенной восприимчивостью отличаются дикие
представители семейства собачьих (лисица, волк, шакал, енотовидная собака)
и куньих, летучие мыши, грызуны многих видов, а также домашняя кошка. Менее
восприимчивы человек, собаки, рогатый скот, лошади, очень слабо
восприимчивы птицы. Молодые животные более чувствительны к вирусу, чем
взрослые.
Резервуаром вируса бешенства служат только дикие домашние плотоядные
животные определённых видов, а в некоторых районах мира – и летучие мыши. С
учётом резервуара возбудителя бешенства различают эпизоотии природного и
городского типов. При эпизоотиях городского типа источниками вируса и
распространителями болезни являются бродячие и безнадзорные собаки и кошки;
их численность и определяет масштабы эпизоотий. При возникновении эпизоотий
природного типа болезнь чаще всего распространяют дикие плотоядные. Они,
как указанно выше, очень восприимчивы к возбудителю бешенства, интенсивно
выделяют вирус со слюной, склонны к миграциям и агрессивны. Всё это в
сочетании с большой плотностью популяций некоторых диких плотоядных
(лисица), быстрой сменой их поколений и длительностью инкубационного
периода бешенства обеспечивает непрерывность эпизоотического процесса,
несмотря на сравнительно скорую гибель каждого заболевшего животного.
Решающую роль в поддержании природных эпизоотий в Северной Америке играют
серая и красная лисицы, скунсы, еноты-полоскуны; на юге Азии и севере
Африки - шакалы; в ряде тропических и субтропических районах мира -
виверровые; в Центральной и Западной Европе – красная лисица; в СНГ –
красная лисица, корсак, енотовидная собака, волк, а в районах Арктики –
песец. Бешенство летучих мышей на американском континенте рассматривается
как самостоятельный тип природной эпизоотии.
Для штаммов рабического вируса, поддерживаемых в организме собак или
волков, характерна высокая тропность к центральной нервной системе и низкая
- к висцеральным органам. Поэтому вирус выделяется со слюной, но он
отсутствует в крови, моче, молоке больных животных. Соответственно
естественное распространение бешенства среди собак почти полностью зависит
от классической цепи передачи укус – рана. Алиментарный и аэрогенный пути
заражения в принципе возможны, но имеют очень небольшое значение или вообще
не играют никакой роли. Почти все случаи передачи бешенства от собак и
волков человеку и сельскохозяйственным животным также объясняются
попаданием вируссодержащей слюны в раны, нанесённые при укусах. Однако
возможно заражение и при ослюнении повреждённой кожи.
Вирус обнаруживают в слюнных железах 54 - 90% погибших от бешенства
собак. Выделение вируса обычно происходит после начала проявления
клинических болезней, но поскольку самые первые признаки заметить очень
трудно, то между началом выделения вируса и выявлением типичных симптомов
бешенства происходит несколько дней. В связи с этим подозрительных по
заболеванию (беспричинно нанёсших укусы) собак и кошек следует в течение 10
дней содержать в условиях строгой изоляции под клиническим наблюдением.
Если у них за это время не проявится признаков бешенства, то,
следовательно, их слюна в момент укуса не содержала вирус.
Локализация природных очагов болезни соответствует особенностям
расселения лисиц, корсаков, шакалов, енотовидных собак, песцов.
Интенсивность эпизоотии зависит от плотности поселения этих животных. Если
последняя высока, болезнь распространяется быстро. При средней плотности их
поселения бешенство проявляется единичными случаями в широком ареале, не
вызывая заметного снижения численности диких плотоядных. При незначительной
плотности популяций хищных животных эпизоотия затухает.
С изменениями численности диких животных – переносчиков вируса, с
активностью их передвижений связаны периодические подъёмы эпизоотии, чаще
всего повторяющиеся с интервалами в 2 – 3 г. При большой плотности животных
подъём эпизоотии приводит к гибели большого числа хищников и заметному
сокращению числа случаев бешенства. Но за 2 – 3 г. количество диких
плотоядных восстанавливается, контакты между ними учащаются, что ведёт к
новому подъёму заболеваемости. Эпизоотиям природного бешенства свойственны
и сезонные подъёмы. Число вспышек болезни, как правило, возрастает осенью и
в зимне-весенний период. Это так же связано с биологией диких плотоядных.
На январь – март приходится гон (период спаривания) лисиц с неизбежным
соперничеством между самцами. В конце лета – начале осени подросший
молодняк покидает семейные участки и расселяется, что тоже приводит к
борьбе за участки обитания. Соответственно повышается возможность
перезаражения, что ведёт к подъёму заболеваемости.
Среди лисиц, корсаков, енотовидных собак, песцов бешенство
распространяется так же, как среди собак, - при укусах. Пока нет
убедительных данных, подтверждающих эпизоотологическое значение заражения
через пищеварительный тракт. Поскольку при бешенстве нет продолжительной
виремии, артроподы тоже не могут иметь значения в передаче болезни. В
эпизоотологическую цепь иногда вовлекаются мелкие хищники (куницы, хорьки,
ласки), грызуны, дикие травоядные и всеядные. Но они, как и
сельскохозяйственные животные, не могут активно участвовать в дальнейшем
распространении бешенства в силу особенностей образа жизни и поведения. Эти
животные не обеспечивают непрерывный цикл передачи вируса при отсутствии
бешенства среди диких собачьих и становятся тупиками возбудителя
инфекции.
1.3 Патогенез
При заражении восприимчивого животного вирус непродолжительное время
сохраняется у места внедрения, а затем по центростремительным нервным
волокнам проникает в спинной и головной мозг. Размножение вируса в сером
веществе мозга обуславливает развитие диффузного негнойного энцефалита. Из
мозга по центробежным нервным путям вирус попадает в слюнные железы. Здесь
он репродуцирует в нервных узлах и после дегенерации нервных клеток выходит
в протоки желёз, инфицируя слюну. Из мозга вирус нейрогенным путём
транспортируется также в сетчатку и роговую оболочку глаз, надпочечники,
где, видимо, тоже репродуцируется.
1.4 Течение и симптомы
Инкубационный период может варьировать в пределах от нескольких дней
до года и более, но чаще всего составляет 3 – 6 нед. Его продолжительность
зависит от места и силы укусов, количества и вирулентности внесённого в
рану вируса, степени устойчивости покусанного животного. Срок инкубации у
молодняка обычно короче, чем у взрослых животных.
Для бешенства характерно острое течение. Клинические признаки в
принципе сходны у животных всех видов, но лучше всего изучены у собак.
Бешенство у них обычно проявляется в буйной или тихой форме.
При буйном бешенстве различают 3 стадии развития болезни:
продромальную, стадию возбуждения и стадию параличей.
Продромальная (начальная) стадия длится от 12 ч до трёх суток и
характеризуется изменением поведения животных. Собака выглядит скучной,
угнетённой, забивается в тёмные углы или в конуру, неохотно идёт на зов
хозяина. В других случаях она чрезмерно ласкова, не отходит от хозяина,
стареется лизнуть ему руки, лицо (слюна в это время уже содержит вирус).
Постепенно возрастают беспокойство и возбудимость. Собака постоянно
переходит с места на место, пугается шума, прикосновений. Могут появиться
признаки галлюцинаций: животное яростно лает при виде давно знакомых
предметов, как бы кусает что-то в воздухе (ловит мух). Нередко
извращается аппетит. Собака неохотно поедает обычный корм или совсем
отказывается от него и в то же время хватает тряпки, солому, собственный
кал, грызёт деревянные предметы. Иногда возникает сильный зуд в месте
укуса, животное вылизывает, расчёсывает и даже разгрызает это место. К
концу продромальной стадии вследствие пареза мышц глотки затрудняется
глотание. Создаётся впечатление, что собака чем-то подавилась. Появляется
слюнотечение, лай становится хриплым, часто переходит в вой. Нарастает
агрессивность, собака без всякого повода может укусить другое животное или
человека и даже своего хозяина. Эти симптомы свидетельствуют о переходе
болезни в стадию возбуждения, продолжающуюся 3 – 4 дня. У собаки исчезает
чувство страха. Она рвётся с привязи, грызёт цепь, бросается на людей;
характерно стремление убежать. За сутки бешеная собака может пробежать
десятки километров, нападая на встречающихся животных и людей. Нападает она
обычно молча, без лая. Находясь в клетке, собака грызёт пол и железные
прутья стен, иногда ломая себе зубы и повреждая язык. Приступы буйства
продолжаются по несколько часов, сменяются периодами угнетения, когда
обессилевшее животное неподвижно лежит. Но любое раздражение вызывает новый
приступ буйства. Нередки припадки судорог. Постепенно развиваются параличи
мышц (стадия параличей, продолжающаяся 1 – 4 дня), приводящие к полной
потере голоса (афония), отвисанию нижней челюсти, косоглазию. Развивается
паралич мышц задних конечностей (собака передвигается волоча зад), затем –
туловища, передних конечностей. Общая продолжительность болезни – 8 – 11
дней, но нередко смерть наступает уже через 3 – 4 дня.
При тихой (паралитической) форме бешенства, которая часто встречается
при заражении собак от лисиц, возбуждение выражено слабо или вообще
отсутствует. Обычно первыми заметными признаками заболевания являются
затруднение глотания, слюнотечение. Затем отвисает нижняя челюсть, быстро
развиваются параличи мышц конечностей и туловища, и уже через 2 – 4 дня
животное погибает. Признаки начального периода болезни могут вызвать
подозрение на наличие инородного тела в ротовой полости или глотке. Во всех
таких случаях необходимо остерегать заражения при оказании лечебной помощи.
Очень редки атипичные формы бешенства, при которых собаки не проявляют
агрессивности. Болезнь характеризуется подострым течением, прогрессирующим
истощением животного, атрофией мышц, признаками гастроэнтерита, поздним
развитием параличей. Иногда отмечают только прогрессирующее истощение. Ещё
реже регистрируют абортивную форму болезни, заканчивающуюся выздоровлением,
и возвратное бешенство.
Симптомы бешенства у кошек в основном такие же, как у собак.
Преобладает буйная форма. В продромальной стадии болезни кошка временами
выглядит настороженной, пугливой, стремиться спрятать в тёмных укромных
местах. При попытках извлечь её из убежища она может укусить и оцарапать
хозяина, причём часто стремиться вцепиться в лицо. Затрудняется глотание,
заметно слюнотечение, мяукание становится хриплым. В стадии возбуждения
кошка, как и собака, стремиться убежать (но убегает недалеко), становится
очень агрессивной, особенно по отношению к людям и собакам. Затем быстро
прогрессируют параличи глотки, конечностей, мышц туловища. Смерть наступает
через 2 – 5 дней после появления признаков заболевания. При паралитическом
бешенстве агрессивность выражена слабо или отсутствует.
Для бешенства диких плотоядных наиболее характерны потеря страха перед
людьми и агрессивность. Особенно агрессивны бешеные волки и шакалы.
Гидрофобии у диких хищников, как и у животных других видов, не бывает. В
стадии возбуждения они в состоянии переплывать довольно широкие реки.
Заболевшие лисицы и енотовидные собаки среди дня могут появиться в
населённом пункте и вступить в драку с собаками, не убегают и при
приближении людей. Лисицы нередко проникают в скотные дворы и кошары,
забегают в стада и отары на пастбищах, нападают на скот. Когда начинают
развиваться парезы и параличи мышц, больные лисицы, как и енотовидные
собаки, передвигаются вяло, медленно, часто ложатся. Но и в этот период они
могут покусать собаку или неосторожного человека погнавшегося за ними.
Заболевшие куницы, барсуки тоже становятся агрессивными, иногда нападают на
людей.
У крупного рогатого скота преобладает паралитическая форма бешенства,
при которой признаки возбуждения отсутствуют. Животные отстают от стада,
прекращается жвачка, затрудняется глотание (это может стать поводом для
обследования полости рта и глотки), появляются слюнотечение, мычание
становится слабым, хриплым, походка шаткой. Часто отмечают атонию
преджелудков, запор. Затем развиваются параличи конечностей. При буйном
бешенстве животное рвётся с привязи, хрипло ревёт, подняв вверх голову,
роет ногами землю, бросается на стены, ломает изгороди. Агрессивность
особенно выражена по отношению к собакам и кошкам. Отмечают слюнотечение,
потливость, частые позывы к мочеотделению и дефекации, нередко – признаки
полового возбуждения. Обессилев, животное лежит, совершая плавательные
движения конечностями. Последовательно развиваются параличи мышц нижней
челюсти, языка (язык свисает изо рта, непрерывно течёт слюна), задних, а
затем и передних конечностей. На 3 – 6-й день болезни наступает смерть.
У овец и коз при буйной форме бешенства также отмечают агрессивность,
особенно по отношению к собакам. Животные скрежещут зубами, топают ногами,
бодаются. Обычно появляются признаки полового возбуждения. Заметно
слюнотечение. Быстро развиваются параличи. Уже со второго дня болезни
отмечают шаткость зада, внезапные падения. На 3 – 5-й день болезни животное
погибает. Паралитическая форма бешенства протекает без признаков
возбуждения и агрессивности.
У лошадей первые признаки буйной формы болезни – пугливость,
беспокойство, иногда – расчёсывание места укуса. Отмечают частые позывы к
мочеиспусканию, сильные тенезмы, возможны приступы колик. Приступы буйства
характеризуются стремлением сорваться с привязи, убежать, агрессивностью;
иногда появляются признаки полового возбуждения. Буйство сменяется
депрессией, оглумоподобным состоянием. Затрудняется глотание, ржание
становится хриплым, появляется слюнотечение. Отмечают спазматические
сокращения лицевых мышц (особенно жевательных). На 2 – 3-й день болезни
становится заметным шаткость зада, а затем развиваются параличи мышц задних
конечностей и всего тела. Смерть обычно наступает на 3 – 4-й день с момента
появления первых признаков заболевания, но иногда через сутки. При
паралитической форме болезни, которая бывает нередко в случаях заражения
лошадей от диких плотоядных, стадия возбуждения выпадает.
Бешенство свиней в большинстве случаев протекает в буйной форме.
Быстро нарастает возбуждение. Свиньи мечутся в станке, хрипло хрюкают,
разбрасывают подстилку, становятся агрессивными (иногда свиноматки
набрасываются на собственных поросят), появляется сильное слюнотечение.
Иногда отмечают рвоту, зуд в местах укусов. Затем развиваются параличи.
Общая продолжительность болезни – 1 – 4, редко – 6 – 7 дней. При
паралитическом бешенстве возбуждения не отмечают. Больные свиньи становятся
вялыми, нарушается координация движений. Вскоре развиваются параличи.
1.5 Патологоанатомические изменения
У павших животных отмечают истощение, цианоз слизистых оболочек.
Желудочно-кишечный тракт часто в состоянии острого серозного воспаления.
Преджелудки жвачных переполнены сухими кормовыми массами (признак атонии).
Слизистая оболочка желудка, а жвачных сычуга гиперемированна, набухшая, по
складкам с полосчатыми, мелкопятнистыми и точечными кровоизлияниями и
отдельными эрозиями. Кровоизлияния встречаются и под серозной оболочкой
сычуга. У павших животных, особенно у собак, в желудке часто находят
различные инородные тела (перья, щепки, тряпки, солому и др.), но он может
быть и пустым. В кишечнике отмечают застойные и катаральные явления. Кожа,
подкожная клетчатка и серозные покровы сухие, кожа у животных, заболевших
после укуса, с зажившей раной, но рубцовая ткань может быть отёчна. Во
внутренних паренхиматозных органах застойные явления. Мочевой пузырь
растянут и переполнен мочой, иногда он пуст. Кровь плохо свёртывается,
тёмно-красного цвета. Головной и спинной мозг с признаками острой
гиперемии, отёка. В мозжечке и продолговатом мозге, кроме того, встречаются
диапедезные кровоизлияния. При исследовании животных, убитых в ранние
стадии болезни, вскрытие даёт отрицательные результаты.
Патогистологические изменения характеризуются развитием
диссеминированного негнойного полиэнцефаломиелита лимфоцитарного типа.
Наряду с дистрофическими и некротическими изменениями ганглиозных клеток, а
также периферических нервов и сосудистыми расстройствами наблюдают
пролиферацию глиальных элементов и лимфоидную инфильтрацию вокруг сосудов с
образованием клеточных муфт. На месте погибших ганглиозных клеток в
головном и спинном мозге, церебральных и вегетативных узлах из клеток-
сателлитов формируются узелки бешенства (истинная нейронофагия), или узелки
Бабеша. В периферических нервах закономерно развиваются воспалительно-
дистрофические процессы и лимфоидные инфильтраты по ходу нервных пучков и
их влагалищ. Осевые цилиндры и миелиновые оболочки нервных стволов обычно
в состоянии белково-жировой дистрофии и распада.
Патогномоничное значение для бешенства имеет образование в цитоплазме
ганглиозных клеток, в перикарионе и дендритах – специфических телец-
включений Бабеша-Негри величиной от 1 до 30 мкм (чаще 3 - 9 мкм), округлой
или овальной формы. В гомогенном ацидофильном белковом веществе их
содержатся базофильные зернистые образования вирусных нуклеокапсидов
различной структуры. Количество и размеры их прямо зависят от длительности
инкубационного периода и продолжительности болезни. При их отсутствии, чаще
в начальной стадии заболевания, в цитоплазме нейронов могут обнаруживаться
мелкие (размером до кокковых микроорганизмов, реже – крупнее) округлые
ацидофильные бесструктурные гранулы. При исследовании других органов
(печени, селезёнки, почек, слюнных и эндокринных желёз, лимфоузлов)
отмечают эндо- и периваскулярные клеточные инфильтраты с преобладанием в
них лимфоцитов и плазмоцитов.
1.6 Диагностика бешенства
Предварительный диагноз ставят с учётом эпизоотологических и
клинических показателей. Принимают во внимание особенности эпизоотической
ситуации в данной местности и в соседних районах, учитывают сезонность
болезни и данные анамнеза, свидетельствующие о нападении (или появлении)
подозрительных по заболеванию диких животных, собак. Из клинических
признаков наиболее важны непровоцируемая агрессивность животных, развитие
парезов и параличей. Клинико-эпизоотологический диагноз даёт основания для
немедленного проведения мероприятий, предупреждающих возможность заражения
людей и животных, но он должен быть уточнён лабораторными исследованиями.
В лабораторию направляют труп (или голову) мелкого животного, а от
крупных – голову или головной мозг. Труп, голову посылают в двойных
полиэтиленовых мешках, в металлическом контейнере или в другой
влагонепроницаемой таре, а мозг (свежий или консервированный 30 – 50%-ным
глицерином) – в плотно закрытых стеклянных банках, помещённых в ящике. При
взятии и упаковке материала обязательно соблюдают меры предосторожности,
работа должна производиться в перчатках, масках, защитных очках, тщательно
моют руки с мылом. Лабораторная диагностика заключается в исследовании
головного мозга животных с целью выявления вирусного антигена в РИФ, РДП,
ИФА, ПЦР, обнаружении телец Бабеша-Негри и биопробе на белых мышах.
При поступлении в лабораторию патологического материала с подозрением
на бешенство берут пробы органов центральной нервной системы: у крупных
животных (рогатый скот, лошади, овцы, свиньи, собаки, дикие звери) после
удаления шерстного покрова, дезинфекции и удаления кожи и мышц делают
распил черепной коробки, снимают твёрдую мозговую оболочку, и обнажённый
головной мозг целиком извлекают в стерильную посуду.
Кролика для извлечения головного мозга фиксируют на станке или
специальном лотке, затем рассекают кожу от носа до шеи, если нужно взять и
спинной мозг – до хвоста и отпрепаровывают. Череп смазывают йодом.
Вскрывают черепную коробку костоломом. Крышку черепной коробки откидывают,
твёрдую мозговую оболочку рассекают и удаляют, спинной мозг пересекают на
уровне foramen occipitale magnum и весь головной мозг извлекают вместе
мозжечком.
У морских свинок, крыс и мышей принцип взятия мозга такой же, как у
кроликов. Для вскрытия черепной коробки морских свинок и крыс применяют
остроконечные хирургические ножницы, для вскрытия черепа мышей – глазные.
Головной мозг не рекомендуется промывать растворами. При извлечении
мозга также необходимо соблюдать все предосторожности (работа в защитной
спецодежде, в резиновых перчатках, защитной маске и очках, быть предельно
аккуратным).
Метод реакции иммунофлуоресценции (РИФ)
Сущность метода заключается в соединении меченных антител со
специфическим антигеном и наблюдении светящихся комплексов антитело –
антиген в полях зрения люминесцентного микроскопа.
Аппаратура, материалы, реактивы и растворы:
- микроскоп люминесцентный;
- термостат с температурой нагрева плюс 37°C;
- холодильник;
- стёкла предметные по ГОСТ 9284-75;
- пробирки бактериологические по ГОСТ 25336-82;
- чашки Петри по ГОСТ 25336-82;
- пипетки мерные по ГОСТ 20292-74;
- набор инструментов для вскрытия черепной полости и извлечения головного
мозга животных;
- пинцеты по ГОСТ 21241-77;
- горелка газовая или спиртовая;
- ацетон по ГОСТ 2603-79;
- диагностический иммуноглобулин флуоресцирующий антирабический (ДАФИ);
- масло нефлуоресцирующее иммерсионное по ГОСТ 13739-78;
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72;
- раствор фосфатный буферный, рН 7,4.
Подготовка к исследованию.
Из каждого отдела головного мозга (аммонова рога, мозжечка, коры
больших полушарий и продолговатого мозга) готовят по два препарата – мазка-
отпечатка.
Не допускаются для исследования пробы, консервированные глицерином,
фиксированные этиловым спиртом, формалином и другими средствами,
вызывающими денатурацию и разрушение антигенов или создающими
дополнительный (свой) фон свечения.
Препараты высушивают на воздухе и фиксируют в охлаждённом ацетоне при
температуре плюс 4 или минус 12°C в течении 4 – 12 ч. Затем препараты
извлекают из ацетона, высушивают на воздухе 10 – 15 мин. И помещают их во
влажную камеру (чашки Петри с увлажнённым дном).
Диагностический антирабический флуоресцирующий иммуноглобулин (ДАФИ) в
рабочем разведении наносят равномерно на всю поверхность препарата при
помощи пипетки (примерно 0,1 см на один препарат), закрывают камеру с
препаратами, помещают в термостат и выдерживают 30 мин при температуре плюс
37°C. Затем предметные стёкла с препаратом троекратно промывают погружая их
каждый раз на 10 мин в сосуд, наполненный фосфатным буфером рН 7,4,
промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. На окрашенные
препараты наносят иммерсионное нефлуоресцирующее масло.
Проведение исследования.
Подготовленные препараты просматривают под люминесцентным микроскопом
с иммерсионной системой.
Обработка результатов.
При положительных результатах исследования в препаратах, содержащих
антиген вируса бешенства, обнаруживают разной величины и формы ярко
светящиеся жёлто-зелёным цветом гранулы в нейронах и вне клеток. Размер их
колеблется от едва заметных в виде песчинок образований до 15 – 20 мм.
Не поражённая вирусом бешенства нервная мозговая ткань светится
тусклым серовато-жёлтым или зеленоватым цветом.
Метод реакции диффузной преципитации (РДП).
Сущность метода заключается в свойстве антител-преципитинов и
гомологичных им антигенов диффундировать в агаровом геле и при соединении
образовывать видимые визуально линии преципитатов – комплексов антитело-
антиген.
Этим методом допускается исследование несвежего патологического
материала, контаминированный бактериальной микрофлорой.
Аппаратура, материалы и реактивы:
- термостат;
- баня водяная;
- осветитель для бактериологических работ;
- пипетки мерные и пастеровские по ГОСТ 20292-74;
- чашки Петри по ГОСТ 25336-82;
- трубка металлическая тонкостенная диаметром 4 – 5 мм;
- перо писчее ученическое;
- натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;
- метиловый оранжевый, 1%-ный раствор в 50%-ном этиловом спирте по ГОСТ
5962-67;
- мертиолят
- диагностический иммуноглобулин антирабический;
- антиген отрицательный контрольный;
- антиген положительный контрольный;
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72;
- гель агаровый биофабричного изготовления или приготовленный по рецептуре:
агар-агар Дифко или аналогичный – 15 г, натрий хлористый – 8,5 г, 1%-ный
раствор метилового оранжевого в 50%-ном этиловом спирте – 10 см³³,
мертиолят – 0,01 г, вода дистиллированная – 1000 см.
Агаровый гель с рН 7,2 – 7,4 разливают в стерильную посуду,
автоклавируют при 0,5 атм. в течение 30 мин, хранят в холодильнике при
температуре плюс 4°C.
Проведение исследования.
Реакцию преципитации (РП) ставят на обезжиренных предметных стёклах,
на которые предварительно наносят каплю расплавленного агара, пипеткой
равномерно распределяя её по стеклу, и делают тонкий мазок. На застывший
слой агара наливают сверху 2,5 см³ агарового геля толщиной приблизительно 2
мм.
После застывания агара делают в нём лунки металлической тонкостенной
трубочкой диаметром 4 – 5,6 мм согласно трафарету.
Агаровые столбики осторожно извлекают ученическим пером, не допуская
отслаивания от стекла тонкого слоя агарового геля.
В РП исследуют от крупных животных (лошадей, крупного рогатого скота,
собак, лисиц и др.) следующие части головного мозга – кору полушарий левой
и правой сторон, аммоновы рога – левый и правый, мозжечок и продолговатый
мозг. У мелких животных РП ставят с какими-либо тремя отделами мозга. От
мышей исследуют весь головной мозг, который растирают в ступке или в самой
черепной коробке в массу пастообразной консистенции.
Подготовленные предметные стёкла помещают во влажную камеру (чашки
Петри с увлажнённым дном) и при постановке реакции лунки заполняют
патологическим материалом и диагностическим антирабическим иммуноглобулином
(в соответствии с рисунками 1 – 4).
В центральные лунки, обозначенные на трафарете А, В, С, Д, Е, Ж,
вносят исследуемый патологический материал, в периферические лунки 1, 2, 3,
4, (в соответствии с рисунком 1) – диагностический антирабический
иммуноглобулин (1 – 2 капли) в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 (от
исходного разведения) на физиологическом растворе.
Одновременно ставят контрольные опыты с положительным и отрицательным
антигенами, но каждый на отдельном стекле, используя те же разведения
иммуноглобулина.
После заполнения лунок соответствующими компонентами чашки Петри
(влажные камеры) помещают в термостат при температуре плюс 37°C на 6 ч.
Затем выдерживают чашки при комнатной температуре ещё 42 ч.
Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч после её постановки. Предметные
стёкла просматривают визуально в затемнённой комнате, просвечивая их
осветителем снизу вверх под углом 45°.
Обработка результатов.
Реакцию считают положительной при появлении одной или двух – трёх
линий преципитации любой интенсивности между лунками, содержащими антиген и
иммуноглобулин.
Метод постановки иммуноферментного анализа (ИФА)
Принцип непрямого варианта ИФА для выявления антител основан на
взаимодействии антигена вируса бешенства, адсорбированного на поверхности
полистиролового планшета с антителами в сыворотках крови кур с последующим
выявлением специфического комплекса с помощью антивидовых антител, меченных
ферментов перокидазной хрена, активность которого проявляется хромогенным
субстратом.
Область применения.
Методика может быть использована для определения иммунного фона и
напряжённости иммунитета птице поголовья в учреждениях ветеринарного
профиля.
Аппаратура, материалы и реактивы:
- холодильник бытовой +4°C;
- термостат +37°C;
- рН – метр;
- аналитические весы;
- спектрофотометр;
- полистироловые планшеты 96-луночные;
- пипетки автомические с меняющимся объёмом: 1 – 20 мкл, 20 – 100 мкл, 100
– 1000 мкл, 20 – 200 мкл.
- стаканы, колбы мерные, пробирки, наконечники для автоматических пипеток;
- натрий хлористый;
- натрий фосфорнокислый двузамещённый, 12 – водн.;
- натрий углекислый;
- натрий углекислый кислый;
- вода дистиллированная;
- кислота соляная;
- кислота серная;
- кислота лимонная;
- ортофенилендиамин, перекись водорода, твин-20;
- трисоксиметиламинометан;
- нормальная сыворотка лошадей, конъюгат антивидовых антител с
пероксидазой, гипериммунная сыворотка кур, нормальная сыворотка кур.
Подготовка к исследованию.
0,1 М карбонатно-бикарбонатный буфер, рН 9,5 – 9,6 для разведения
антигена:
- натрия углекислого – 3,18 г, натрия углекислого кислого – 5,88 г, воды до
1000 мл. Хранить при +4°C.
- 0,05 М трис – HCI с 0,2 M NaCI рН 7,4 – 7,6
Сначала готовят два раствора: 1а – натрия хлористого 293 г, воды до
2000 мл (2,5 М), 1б – трис (оксиметил) аминометан 121,0 г, воды до 1000 мл
(1 М), добавить концентрированной соляной кислоты до рН 7,4 – 7,6. Затем
смешивать 40 мл раствора 1 и 25 мл раствора 2, и воды до 500 мл. Хранить
при +4°C.
Испытуемые сыворотки. Препараты антител (положительный и отрицательный
контроль), конъюгата антивидовых антител с пероксидазой разводят до
требуемой концентрации в растворе 0,05 М трис–HCI с 0,2 М NaCI, 0,01% твин-
20 рН 7,4 – 7,6.
Для заполнения свободных мест на твёрдофазном сорбенте (блокировка)
применяют раствор 0,05 М трис- HCI с 0,2 М NaCI, 0,01% твин-20, 10%
лошадиной сыворотки.
Отмывку сорбента от несвязавшихся компонентов проводят раствором из
п.п. 41. В качестве субстрата пероксидазы хрена используют 0,04% раствор
ортофенилдиамина в фосфатно-цитратном буфере, рН 4,9 и 0,4 Н2О2. Раствор
готовят непосредственно перед употреблением
Фосфатно-цитратный буфер готовят смешиванием 24,3 мл раствора А и 25,7
мл раствора Б. рН доводят до 4,9. Раствор А – 0,1 М лимонная кислота (19,2
г кислоты на 1000 мл воды), хранится при +4°C. Раствор Б – 0,2 М Naq HPO4
Н2О (71,6 г соли на 1000 мл воды) хранится при комнатной температуре.
Проведение исследования.
Сенсибилизация планшетов. В лунки планшетов вносят по 100 мкл антигена
вируса НБ, разведённого в 0,1 М карбанатно-бикарбонатном буфере, рН 9,5 до
концентрации 1 – 5 мкгмл. Инкубируют при +40°C 18 часов. После удаления
несвязывающего антигена в лунки вносят по 100 мкл 10% раствора лошадиной
сыворотки. Инкубируют 1 час при комнатной температуре. После этого лунки
промывают 3 – 4 раза раствором из п.н. 23.
Внесение исследуемых сывороток и антивидового конъюгата
В первый горизонтальный ряд вносят по 200 мкл исследуемых и
контрольных сывороток в разведении 1:100. Разведения сывороток готовят с 2-
х кратным шагом с 1:100 до 1:12800, используя раствор п. 23. В качестве
отрицательного контроля используют нормальную сыворотку кур, в качестве
положительного контроля сыворотку с известным титром антител, не ниже
1:1600. После инкубации в течении 1,5 – 2 часов при 37° и 3 – 4-кратной
промывки лунок планшетов буфером для промывания, в каждую лунку вносят по
100 мкл рабочего разведения конъюгата антивидовых антител с пероксидазой в
буфере п. 23 и инкубируют 1 час при 37°C. Лунки промывают трёхкратно.
Обработка результатов.
Внесение субстрата и учёт реакции.
Приготавливают субстратно-индикаторную смесь и в каждую лунку вносят
по 100 мкл раствора субстрата, инкубируют 10 – 15 минут при комнатной
температуре. Реакцию устанавливают внесением в каждую лунку по 50 мкл 10%-
ного раствора серной кислоты. Учёт реакции проводят визуально по
интенсивности окраски или спектрофотометрически при 492 нм. В последнем
случае титром сыворотки считают её максимальное разведение, величина
оптической плотности в котором в 2 раза превосходит оптическую плотность в
лунках с контрольной отрицательной сывороткой. Положительными будут
считаться пробы сывороток крови, титры которых 1:400 и выше.
Метод индикации вируса бешенства методом полимеразной цепной реакции
(ПЦР).
Сущность метода заключается в выявлении вируса бешенства в мозге с
помощью ПЦР, позволяющий всего за несколько часов получать миллионы копий
выбранного фрагмента ДНК.
Для амплификации специфического ДНК-фрагмента методом ПЦР достаточно
знать нуклеотидную последовательность двух коротких участков ДНК,
окаймляющих фрагмент-мишень. На основе этих последовательностей химически
синтезируют два олигонуклеотида (праймера), которые необходимы для
инициации полимеризации ДНК в каждом цикле ПЦР. Длина праймеров (обычно 20
– 30 нуклеотидов) должна быть такой, чтобы их последовательность была
статистически уникальна и не встречалась в других участках ДНК,
присутствующей в реакционной смеси. ПЦР включает серию повторяющихся
циклов, каждый из которых начинается со стадии денатурации молекулы ДНК.
На первой стадии при нагревании реакционной ... продолжение
Вы можете абсолютно на бесплатной основе полностью просмотреть эту работу через наше приложение.
Данная дипломная работа состоит из 70 листов и включает в себя
титульные листы, саму аннотацию, содержание, нормативные ссылки,
определения, обозначения и сокращения, введение, литературный обзор,
собственные исследования, результаты собственных исследований, а также
разделы по безопасности жизнедеятельности и охране труда, охране окружающей
среды, экономике и менеджменту, бизнес-планированию. В конце работы
подводятся итоги и излагаются предложения. В заключении приводится список
использованных источников.
Основную часть дипломной работы составляют литературный обзор и
собственные исследования. В первом описывается исследуемая болезнь
(возбудитель, эпизоотологические данные, патогенез, течение и симптомы,
патологоанатомические изменения, диагностика, лечение и иммунитет,
профилактика и меры борьбы), а в собственных исследованиях проведение
опознавательной и научной работы в областной ветеринарной лаборатории и
Шымкентской городской территориальной инспекции МСХ РК.
В разделе по безопасности жизнедеятельности и охране труда
представлены основные требования по технике безопасности при работе в
лаборатории. Экологические проблемы, связанные с изучаемой болезнью
рассказываются в разделе по охране окружающей среды. В разделах по
экономике и бизнес-плану излагаются методы по планированию и подсчету
финансов при проведение санитарно-эпидемиологических и ветеринарно-
санитарных мероприятий по профилактике и борьбе с бешенством.
Содержание
Введение
I Литературный обзор
1.1 Возбудитель болезни
1.2 Эпизоотологические данные
1.3 Патогенез
1.4 Течение и симптомы
1.5 Патологоанатомические изменения
1.6 Диагностика бешенства
1.7 Дифференциальный диагноз
1.8 Лечение
1.9 Иммунитет
1.10 Профилактика и меры борьбы
II Собственные исследования
2.1 Исследования, проводимые в областной ветеринарной лаборатории
2.2 Исследования в Шымкентской городской территориальной
инспекции МСХ РК
2.2.1 Исследование последнего выявленного случая бешенства и данные
за последние три года
2.2.2 Санитарно-эпидемиологические и ветеринарно-санитарные правила
по профилактике и борьбе с бешенством
III Результаты собственных исследований
IV Безопасность жизнедеятельности и охрана труда
V Охрана окружающей среды
VI Экономика и менеджмент
VII Бизнес-план
Выводы и предложения
Список использованных источников
Приложение
Нормативные ссылки
В настоящей дипломной работе использовались ссылки на следующие
нормативные документы:
ГОСТ 2.102-68 ЕСКД. Виды и комплектность конструкторских документов.
ГОСТ 2.104-68 ЕСКД. Основные надписи.
ГОСТ 2.201-80 ЕСКД. Обозначение изделий и конструкторских документов.
ГОСТ 2.301-68 ЕСКД. Форматы.
ГОСТ 2.601-95 ЕСКД. Эксплуатационная документация.
ГОСТ 2.304-81 ЕСКД. Шрифты чертёжные.
ФС ЮКГУ 4.6-002-2004 СМК. Правила оформления учебной документации. Общие
требования к графическим документам.
Определения
Иммунизация – создание искусственного иммунитета.
Антиген – вещество, которое при парэнтеральном введении обуславливает
образование антител.
Антитела – специфические реактивные продукты, возникающие в организме
животных в результате парэнтерального введения чужеродных веществ
(антигены).
Эпизоотия – эпидемия среди животных.
Алиментарный – пищевой.
Дегенерация – вырождение; перерождение.
Инкубация – скрытый период инфекционного заболевания, протекающий от
момента заражения до появления явных клинических признаков болезни.
Атрофия – исчезание тканей с уменьшением объёма либо без воспаления
или перерождения (простая атрофия), либо с изменением тканевых элементов
(дегенеративная атрофия).
Парез – неполный паралич.
Паралич – потеря способности активно пользоваться органами движения.
Дезинфекция – обеззараживание, применение средств для уничтожения
возбудителя болезни.
Пастеризация – обеззараживание жидких пищевых продуктов путём
нагревания их до 68°.
Сенсибилизация – возбуждение в организме или клетке чувствительности к
действию какого-либо агента.
Нуклеотиды – соединения нуклеозидов с фосфорной кислотой, составные
части нуклеиновых кислот.
Гастроэнтерит – тяжело протекающие одновременно воспаления желудка и
кишок, захватывающие патологическим процессом слизистый, подслизистый,
нередко мышечный и серозный слои.
Атония преджелудков – расстройство и прекращение моторной деятельности
рубца, сетки и книжки.
Болезнь Ауески – инфекционная болезнь, проявляющаяся симптомами
воспаления лёгких, поражения центральной нервной системы, лихорадкой, а
также сильным зудом и расчёсами у всех животных, кроме свиней, норок и
соболей.
Чума плотоядных – острая контагиозная вирусная болезнь, проявляющаяся
лихорадкой, воспалением слизистой оболочки глаз, дыхательного и
пищеварительного тракта, пневмонией, экзантемой и признаками поражения
центральной нервной системы.
Биопроба - выделение вируса от больных, убитых или павших животных
путём инокулирования патологического материала белым мышам и последующей
его идентификации.
Обозначения и сокращения
нед. – неделя
мин. – минута
ч – час
см – сантиметр
мм – миллиметр
нм – нанометр
км – километр
мкм – микрометр
мкл – микролитр
г – грамм
мг – миллиграмм
л – литр
мл – миллилитр
ед. – единица измерения
ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК – рибонуклеиновая кислота
ВОЗ – Всемирная Организация Здравоохранения
°C – градус
% - процент
Введение
Бешенство (Rabies) – остро протекающая инфекционная болезнь,
характеризующаяся признаками диссеминированного полиоэнцефаломиелита.
Бешенство известно со времён глубокой древности. Упоминание о нём
найдены в кодексе законов Древнего Вавилона (2300 лет до нашей эры), в
произведениях учёных и писателей Древней Греции, Древнего Рима. Ещё в ХVI
в. Джироламо Фракасторо (Италия) отнёс бешенство к числу болезней,
вызываемых живым началом (контагием). В 1780 г. Д.Самойлович в России
высказал твёрдое убеждение в заразности этой болезни. Но бесспорные
доказательства её инфекционной природы были получены только в ХIХ в. Цинке
во Франции (1804) первым экспериментально доказал заразительность слюны
бешеных собак. Его соотечественник Галтье (1879 – 1881) искусственно
воспроизвёл бешенство у кроликов и предпринял попытку иммунизации овец
путём внутривенного введения слюны больных животных. Результаты
исследований, проведённых в этот период, создали предпосылки для открытия
Л.Пастера и его учеников (1881 – 1889). Л.Пастер доказал тропизм
возбудителя бешенства к ткани мозга и добился его ослабления путём
перевивок (пассажей) от кролика к кролику при интрацеребральном введении
мозговой суспензии. Полученный вирус, проявлявший патогенность только при
внутримозговом заражении и отличавшийся сокращённым и постоянным (6 – 7)
дней инкубационным периодом для кроликов, был назван фиксированным (Virus
fixe). После дополнительной инактивации путём высушивания над кристаллами
едкого кали Л.Пастер использовал спинной мозг заражённого кролика для
изготовления антирабической вакцины. В 1885 г. были сделаны первые
вынужденные прививки людям. Среди учеников и последователей Л.Пастера
выдающуюся роль играли русские учёные И.И.Мечников и Н.Ф.Гамалея. По их
инициативе в 1886 г. в Одессе была учреждена первая в России пастеровская
станция.
Важным этапом дальнейших научных исследований было открытие
специфических протоплазматических включений в нейронах головного мозга
(В.Бабеш, 1887, и А.Негри,1903). Микроскопическое исследование головного
мозга на наличие телец Бабеша-Негри стало распространённым методом
диагностики бешенства. В дореволюционной России большую работу по изучению
бешенства животных проводили Х.И.Гельман, Н.Н.Мари, С.С.Евсеенко,
И.Н.Ланге, Е.М.Земмер. В первые годы Советской власти значительный вклад в
изучение болезней внесли Н.А.Михин, А.В.Дидюлин, С.Н.Муромцев, Е.В.Туревич,
А.И.Савватеев, В.Г.Ушаков, П.Г.Орлов, Р.А.Канторович, М.А.Селимов,
Н.В.Лихачёв, В.П.Назаров, К.Н.Бучнев, Д.Ф.Осидзе, Н.А.Ковалёв и многие
другие представители медицинской и ветеринарной наук.
I Литературный обзор
1.1 Возбудитель болезни
Возбудитель болезни – вирус, относящийся к роду лиссавирусов семейства
рабдовирусов. Как и другие рабдовирусы, он имеет пулевидную форму. Длина
вирионов – 180 нм, диаметр – 75 – 80 нм. Вирус удаётся культивировать в
развивающихся куриных и утиных эмбрионах, в культурах некоторых клеток.
Штаммы возбудителя бешенства, циркулирующие в природе (уличный вирус),
патогенны для всех теплокровных животных. В наиболее высоких титрах вирус
накапливается в центральной нервной системе заражённых животных, особенно
аммоновых рогах и коре больших полушарий головного мозга, в мозжечке и
продолговатом мозге. Высокий титр возбудителя бешенства и в слюнных и
слёзных железах.
Вирус обладает двумя основными антигенными компонентами. Растворимый
S-антиген (нуклепротеин капсиды) является общим для всей группы вирусов
бешенства и ответствен за продукцию комплементсвязывающих, преципитирующих
антител и антител, участвующих в реакции иммунофлюоресценции. Инфекционный
V-антиген (гликопротеид наружной оболочки вириона) вызывает образование
вируснейтрализующих антител, антигемагглютининов и обеспечивает
формирование иммунитета. Этот антиген типоспецифичен. На основе различий
гликопротеидного компонента, выявляемых в реакции перекрёстной защиты и
реакции нейтрализации, в группе вирусов бешенства выделяют 4 серотипа.
Абсолютное большинство полевых и лабораторных штаммов относится к первому
серотипу. Штаммы вирусов остальных серотипов пока выделены только в Африке.
Биологические свойства вируса бешенства, как и других вирусов, подвержены
естественной изменчивости. Установлено несколько биологических вариантов
уличного вируса. Чаще всего выделяют классические штаммы, которые медленно
фиксируются, вызывают типичную картину бешенства. Штаммы уличного вируса,
напротив, быстро фиксируются и после короткого инкубационного периода
вызывают паралитическую форму болезни, при которой не обнаруживают телец
Бабеша-Негри. Имеют определённые особенности штаммы вируса, выделяемые при
арктическом бешенстве (диковании) животных; болезни безумной собаки в
Западной Африке, при бешенстве крупного рогатого скота, распространяемом
летучими мышами-вампирами в Центральной и Южной Америке. Они с трудом
фиксируются и вызывают болезнь с преобладанием паралитических признаков.
Отклоняются от классических и биологические свойства многих штаммов
лисьего бешенства и тем более так называемых бешенствоподобных вирусов,
выделенных от мышевидных грызунов в Центральной Европе и от землеройки,
летучей мыши и насекомых в Африке.
Устойчивость. При 60ºС вирус инактивируется через 10 мин, при 100ºС –
мгновенно. Он устойчив к низким температурам и месяцами сохраняется в
замороженном мозге; в гниющем материале остаются жизнеспособным в течение 2
– 3 нед. Вирус быстро инактивируется при воздействии обычно используемых
дезинфицирующих растворов лизола (1 – 2 %-ный), щелочей, формалина,
хлорамина (2 – 3 %-ные).
1.2 Эпизоотологические данные
К бешенству восприимчивы все виды домашних и диких теплокровных
животных, а также и человек. Повышенной восприимчивостью отличаются дикие
представители семейства собачьих (лисица, волк, шакал, енотовидная собака)
и куньих, летучие мыши, грызуны многих видов, а также домашняя кошка. Менее
восприимчивы человек, собаки, рогатый скот, лошади, очень слабо
восприимчивы птицы. Молодые животные более чувствительны к вирусу, чем
взрослые.
Резервуаром вируса бешенства служат только дикие домашние плотоядные
животные определённых видов, а в некоторых районах мира – и летучие мыши. С
учётом резервуара возбудителя бешенства различают эпизоотии природного и
городского типов. При эпизоотиях городского типа источниками вируса и
распространителями болезни являются бродячие и безнадзорные собаки и кошки;
их численность и определяет масштабы эпизоотий. При возникновении эпизоотий
природного типа болезнь чаще всего распространяют дикие плотоядные. Они,
как указанно выше, очень восприимчивы к возбудителю бешенства, интенсивно
выделяют вирус со слюной, склонны к миграциям и агрессивны. Всё это в
сочетании с большой плотностью популяций некоторых диких плотоядных
(лисица), быстрой сменой их поколений и длительностью инкубационного
периода бешенства обеспечивает непрерывность эпизоотического процесса,
несмотря на сравнительно скорую гибель каждого заболевшего животного.
Решающую роль в поддержании природных эпизоотий в Северной Америке играют
серая и красная лисицы, скунсы, еноты-полоскуны; на юге Азии и севере
Африки - шакалы; в ряде тропических и субтропических районах мира -
виверровые; в Центральной и Западной Европе – красная лисица; в СНГ –
красная лисица, корсак, енотовидная собака, волк, а в районах Арктики –
песец. Бешенство летучих мышей на американском континенте рассматривается
как самостоятельный тип природной эпизоотии.
Для штаммов рабического вируса, поддерживаемых в организме собак или
волков, характерна высокая тропность к центральной нервной системе и низкая
- к висцеральным органам. Поэтому вирус выделяется со слюной, но он
отсутствует в крови, моче, молоке больных животных. Соответственно
естественное распространение бешенства среди собак почти полностью зависит
от классической цепи передачи укус – рана. Алиментарный и аэрогенный пути
заражения в принципе возможны, но имеют очень небольшое значение или вообще
не играют никакой роли. Почти все случаи передачи бешенства от собак и
волков человеку и сельскохозяйственным животным также объясняются
попаданием вируссодержащей слюны в раны, нанесённые при укусах. Однако
возможно заражение и при ослюнении повреждённой кожи.
Вирус обнаруживают в слюнных железах 54 - 90% погибших от бешенства
собак. Выделение вируса обычно происходит после начала проявления
клинических болезней, но поскольку самые первые признаки заметить очень
трудно, то между началом выделения вируса и выявлением типичных симптомов
бешенства происходит несколько дней. В связи с этим подозрительных по
заболеванию (беспричинно нанёсших укусы) собак и кошек следует в течение 10
дней содержать в условиях строгой изоляции под клиническим наблюдением.
Если у них за это время не проявится признаков бешенства, то,
следовательно, их слюна в момент укуса не содержала вирус.
Локализация природных очагов болезни соответствует особенностям
расселения лисиц, корсаков, шакалов, енотовидных собак, песцов.
Интенсивность эпизоотии зависит от плотности поселения этих животных. Если
последняя высока, болезнь распространяется быстро. При средней плотности их
поселения бешенство проявляется единичными случаями в широком ареале, не
вызывая заметного снижения численности диких плотоядных. При незначительной
плотности популяций хищных животных эпизоотия затухает.
С изменениями численности диких животных – переносчиков вируса, с
активностью их передвижений связаны периодические подъёмы эпизоотии, чаще
всего повторяющиеся с интервалами в 2 – 3 г. При большой плотности животных
подъём эпизоотии приводит к гибели большого числа хищников и заметному
сокращению числа случаев бешенства. Но за 2 – 3 г. количество диких
плотоядных восстанавливается, контакты между ними учащаются, что ведёт к
новому подъёму заболеваемости. Эпизоотиям природного бешенства свойственны
и сезонные подъёмы. Число вспышек болезни, как правило, возрастает осенью и
в зимне-весенний период. Это так же связано с биологией диких плотоядных.
На январь – март приходится гон (период спаривания) лисиц с неизбежным
соперничеством между самцами. В конце лета – начале осени подросший
молодняк покидает семейные участки и расселяется, что тоже приводит к
борьбе за участки обитания. Соответственно повышается возможность
перезаражения, что ведёт к подъёму заболеваемости.
Среди лисиц, корсаков, енотовидных собак, песцов бешенство
распространяется так же, как среди собак, - при укусах. Пока нет
убедительных данных, подтверждающих эпизоотологическое значение заражения
через пищеварительный тракт. Поскольку при бешенстве нет продолжительной
виремии, артроподы тоже не могут иметь значения в передаче болезни. В
эпизоотологическую цепь иногда вовлекаются мелкие хищники (куницы, хорьки,
ласки), грызуны, дикие травоядные и всеядные. Но они, как и
сельскохозяйственные животные, не могут активно участвовать в дальнейшем
распространении бешенства в силу особенностей образа жизни и поведения. Эти
животные не обеспечивают непрерывный цикл передачи вируса при отсутствии
бешенства среди диких собачьих и становятся тупиками возбудителя
инфекции.
1.3 Патогенез
При заражении восприимчивого животного вирус непродолжительное время
сохраняется у места внедрения, а затем по центростремительным нервным
волокнам проникает в спинной и головной мозг. Размножение вируса в сером
веществе мозга обуславливает развитие диффузного негнойного энцефалита. Из
мозга по центробежным нервным путям вирус попадает в слюнные железы. Здесь
он репродуцирует в нервных узлах и после дегенерации нервных клеток выходит
в протоки желёз, инфицируя слюну. Из мозга вирус нейрогенным путём
транспортируется также в сетчатку и роговую оболочку глаз, надпочечники,
где, видимо, тоже репродуцируется.
1.4 Течение и симптомы
Инкубационный период может варьировать в пределах от нескольких дней
до года и более, но чаще всего составляет 3 – 6 нед. Его продолжительность
зависит от места и силы укусов, количества и вирулентности внесённого в
рану вируса, степени устойчивости покусанного животного. Срок инкубации у
молодняка обычно короче, чем у взрослых животных.
Для бешенства характерно острое течение. Клинические признаки в
принципе сходны у животных всех видов, но лучше всего изучены у собак.
Бешенство у них обычно проявляется в буйной или тихой форме.
При буйном бешенстве различают 3 стадии развития болезни:
продромальную, стадию возбуждения и стадию параличей.
Продромальная (начальная) стадия длится от 12 ч до трёх суток и
характеризуется изменением поведения животных. Собака выглядит скучной,
угнетённой, забивается в тёмные углы или в конуру, неохотно идёт на зов
хозяина. В других случаях она чрезмерно ласкова, не отходит от хозяина,
стареется лизнуть ему руки, лицо (слюна в это время уже содержит вирус).
Постепенно возрастают беспокойство и возбудимость. Собака постоянно
переходит с места на место, пугается шума, прикосновений. Могут появиться
признаки галлюцинаций: животное яростно лает при виде давно знакомых
предметов, как бы кусает что-то в воздухе (ловит мух). Нередко
извращается аппетит. Собака неохотно поедает обычный корм или совсем
отказывается от него и в то же время хватает тряпки, солому, собственный
кал, грызёт деревянные предметы. Иногда возникает сильный зуд в месте
укуса, животное вылизывает, расчёсывает и даже разгрызает это место. К
концу продромальной стадии вследствие пареза мышц глотки затрудняется
глотание. Создаётся впечатление, что собака чем-то подавилась. Появляется
слюнотечение, лай становится хриплым, часто переходит в вой. Нарастает
агрессивность, собака без всякого повода может укусить другое животное или
человека и даже своего хозяина. Эти симптомы свидетельствуют о переходе
болезни в стадию возбуждения, продолжающуюся 3 – 4 дня. У собаки исчезает
чувство страха. Она рвётся с привязи, грызёт цепь, бросается на людей;
характерно стремление убежать. За сутки бешеная собака может пробежать
десятки километров, нападая на встречающихся животных и людей. Нападает она
обычно молча, без лая. Находясь в клетке, собака грызёт пол и железные
прутья стен, иногда ломая себе зубы и повреждая язык. Приступы буйства
продолжаются по несколько часов, сменяются периодами угнетения, когда
обессилевшее животное неподвижно лежит. Но любое раздражение вызывает новый
приступ буйства. Нередки припадки судорог. Постепенно развиваются параличи
мышц (стадия параличей, продолжающаяся 1 – 4 дня), приводящие к полной
потере голоса (афония), отвисанию нижней челюсти, косоглазию. Развивается
паралич мышц задних конечностей (собака передвигается волоча зад), затем –
туловища, передних конечностей. Общая продолжительность болезни – 8 – 11
дней, но нередко смерть наступает уже через 3 – 4 дня.
При тихой (паралитической) форме бешенства, которая часто встречается
при заражении собак от лисиц, возбуждение выражено слабо или вообще
отсутствует. Обычно первыми заметными признаками заболевания являются
затруднение глотания, слюнотечение. Затем отвисает нижняя челюсть, быстро
развиваются параличи мышц конечностей и туловища, и уже через 2 – 4 дня
животное погибает. Признаки начального периода болезни могут вызвать
подозрение на наличие инородного тела в ротовой полости или глотке. Во всех
таких случаях необходимо остерегать заражения при оказании лечебной помощи.
Очень редки атипичные формы бешенства, при которых собаки не проявляют
агрессивности. Болезнь характеризуется подострым течением, прогрессирующим
истощением животного, атрофией мышц, признаками гастроэнтерита, поздним
развитием параличей. Иногда отмечают только прогрессирующее истощение. Ещё
реже регистрируют абортивную форму болезни, заканчивающуюся выздоровлением,
и возвратное бешенство.
Симптомы бешенства у кошек в основном такие же, как у собак.
Преобладает буйная форма. В продромальной стадии болезни кошка временами
выглядит настороженной, пугливой, стремиться спрятать в тёмных укромных
местах. При попытках извлечь её из убежища она может укусить и оцарапать
хозяина, причём часто стремиться вцепиться в лицо. Затрудняется глотание,
заметно слюнотечение, мяукание становится хриплым. В стадии возбуждения
кошка, как и собака, стремиться убежать (но убегает недалеко), становится
очень агрессивной, особенно по отношению к людям и собакам. Затем быстро
прогрессируют параличи глотки, конечностей, мышц туловища. Смерть наступает
через 2 – 5 дней после появления признаков заболевания. При паралитическом
бешенстве агрессивность выражена слабо или отсутствует.
Для бешенства диких плотоядных наиболее характерны потеря страха перед
людьми и агрессивность. Особенно агрессивны бешеные волки и шакалы.
Гидрофобии у диких хищников, как и у животных других видов, не бывает. В
стадии возбуждения они в состоянии переплывать довольно широкие реки.
Заболевшие лисицы и енотовидные собаки среди дня могут появиться в
населённом пункте и вступить в драку с собаками, не убегают и при
приближении людей. Лисицы нередко проникают в скотные дворы и кошары,
забегают в стада и отары на пастбищах, нападают на скот. Когда начинают
развиваться парезы и параличи мышц, больные лисицы, как и енотовидные
собаки, передвигаются вяло, медленно, часто ложатся. Но и в этот период они
могут покусать собаку или неосторожного человека погнавшегося за ними.
Заболевшие куницы, барсуки тоже становятся агрессивными, иногда нападают на
людей.
У крупного рогатого скота преобладает паралитическая форма бешенства,
при которой признаки возбуждения отсутствуют. Животные отстают от стада,
прекращается жвачка, затрудняется глотание (это может стать поводом для
обследования полости рта и глотки), появляются слюнотечение, мычание
становится слабым, хриплым, походка шаткой. Часто отмечают атонию
преджелудков, запор. Затем развиваются параличи конечностей. При буйном
бешенстве животное рвётся с привязи, хрипло ревёт, подняв вверх голову,
роет ногами землю, бросается на стены, ломает изгороди. Агрессивность
особенно выражена по отношению к собакам и кошкам. Отмечают слюнотечение,
потливость, частые позывы к мочеотделению и дефекации, нередко – признаки
полового возбуждения. Обессилев, животное лежит, совершая плавательные
движения конечностями. Последовательно развиваются параличи мышц нижней
челюсти, языка (язык свисает изо рта, непрерывно течёт слюна), задних, а
затем и передних конечностей. На 3 – 6-й день болезни наступает смерть.
У овец и коз при буйной форме бешенства также отмечают агрессивность,
особенно по отношению к собакам. Животные скрежещут зубами, топают ногами,
бодаются. Обычно появляются признаки полового возбуждения. Заметно
слюнотечение. Быстро развиваются параличи. Уже со второго дня болезни
отмечают шаткость зада, внезапные падения. На 3 – 5-й день болезни животное
погибает. Паралитическая форма бешенства протекает без признаков
возбуждения и агрессивности.
У лошадей первые признаки буйной формы болезни – пугливость,
беспокойство, иногда – расчёсывание места укуса. Отмечают частые позывы к
мочеиспусканию, сильные тенезмы, возможны приступы колик. Приступы буйства
характеризуются стремлением сорваться с привязи, убежать, агрессивностью;
иногда появляются признаки полового возбуждения. Буйство сменяется
депрессией, оглумоподобным состоянием. Затрудняется глотание, ржание
становится хриплым, появляется слюнотечение. Отмечают спазматические
сокращения лицевых мышц (особенно жевательных). На 2 – 3-й день болезни
становится заметным шаткость зада, а затем развиваются параличи мышц задних
конечностей и всего тела. Смерть обычно наступает на 3 – 4-й день с момента
появления первых признаков заболевания, но иногда через сутки. При
паралитической форме болезни, которая бывает нередко в случаях заражения
лошадей от диких плотоядных, стадия возбуждения выпадает.
Бешенство свиней в большинстве случаев протекает в буйной форме.
Быстро нарастает возбуждение. Свиньи мечутся в станке, хрипло хрюкают,
разбрасывают подстилку, становятся агрессивными (иногда свиноматки
набрасываются на собственных поросят), появляется сильное слюнотечение.
Иногда отмечают рвоту, зуд в местах укусов. Затем развиваются параличи.
Общая продолжительность болезни – 1 – 4, редко – 6 – 7 дней. При
паралитическом бешенстве возбуждения не отмечают. Больные свиньи становятся
вялыми, нарушается координация движений. Вскоре развиваются параличи.
1.5 Патологоанатомические изменения
У павших животных отмечают истощение, цианоз слизистых оболочек.
Желудочно-кишечный тракт часто в состоянии острого серозного воспаления.
Преджелудки жвачных переполнены сухими кормовыми массами (признак атонии).
Слизистая оболочка желудка, а жвачных сычуга гиперемированна, набухшая, по
складкам с полосчатыми, мелкопятнистыми и точечными кровоизлияниями и
отдельными эрозиями. Кровоизлияния встречаются и под серозной оболочкой
сычуга. У павших животных, особенно у собак, в желудке часто находят
различные инородные тела (перья, щепки, тряпки, солому и др.), но он может
быть и пустым. В кишечнике отмечают застойные и катаральные явления. Кожа,
подкожная клетчатка и серозные покровы сухие, кожа у животных, заболевших
после укуса, с зажившей раной, но рубцовая ткань может быть отёчна. Во
внутренних паренхиматозных органах застойные явления. Мочевой пузырь
растянут и переполнен мочой, иногда он пуст. Кровь плохо свёртывается,
тёмно-красного цвета. Головной и спинной мозг с признаками острой
гиперемии, отёка. В мозжечке и продолговатом мозге, кроме того, встречаются
диапедезные кровоизлияния. При исследовании животных, убитых в ранние
стадии болезни, вскрытие даёт отрицательные результаты.
Патогистологические изменения характеризуются развитием
диссеминированного негнойного полиэнцефаломиелита лимфоцитарного типа.
Наряду с дистрофическими и некротическими изменениями ганглиозных клеток, а
также периферических нервов и сосудистыми расстройствами наблюдают
пролиферацию глиальных элементов и лимфоидную инфильтрацию вокруг сосудов с
образованием клеточных муфт. На месте погибших ганглиозных клеток в
головном и спинном мозге, церебральных и вегетативных узлах из клеток-
сателлитов формируются узелки бешенства (истинная нейронофагия), или узелки
Бабеша. В периферических нервах закономерно развиваются воспалительно-
дистрофические процессы и лимфоидные инфильтраты по ходу нервных пучков и
их влагалищ. Осевые цилиндры и миелиновые оболочки нервных стволов обычно
в состоянии белково-жировой дистрофии и распада.
Патогномоничное значение для бешенства имеет образование в цитоплазме
ганглиозных клеток, в перикарионе и дендритах – специфических телец-
включений Бабеша-Негри величиной от 1 до 30 мкм (чаще 3 - 9 мкм), округлой
или овальной формы. В гомогенном ацидофильном белковом веществе их
содержатся базофильные зернистые образования вирусных нуклеокапсидов
различной структуры. Количество и размеры их прямо зависят от длительности
инкубационного периода и продолжительности болезни. При их отсутствии, чаще
в начальной стадии заболевания, в цитоплазме нейронов могут обнаруживаться
мелкие (размером до кокковых микроорганизмов, реже – крупнее) округлые
ацидофильные бесструктурные гранулы. При исследовании других органов
(печени, селезёнки, почек, слюнных и эндокринных желёз, лимфоузлов)
отмечают эндо- и периваскулярные клеточные инфильтраты с преобладанием в
них лимфоцитов и плазмоцитов.
1.6 Диагностика бешенства
Предварительный диагноз ставят с учётом эпизоотологических и
клинических показателей. Принимают во внимание особенности эпизоотической
ситуации в данной местности и в соседних районах, учитывают сезонность
болезни и данные анамнеза, свидетельствующие о нападении (или появлении)
подозрительных по заболеванию диких животных, собак. Из клинических
признаков наиболее важны непровоцируемая агрессивность животных, развитие
парезов и параличей. Клинико-эпизоотологический диагноз даёт основания для
немедленного проведения мероприятий, предупреждающих возможность заражения
людей и животных, но он должен быть уточнён лабораторными исследованиями.
В лабораторию направляют труп (или голову) мелкого животного, а от
крупных – голову или головной мозг. Труп, голову посылают в двойных
полиэтиленовых мешках, в металлическом контейнере или в другой
влагонепроницаемой таре, а мозг (свежий или консервированный 30 – 50%-ным
глицерином) – в плотно закрытых стеклянных банках, помещённых в ящике. При
взятии и упаковке материала обязательно соблюдают меры предосторожности,
работа должна производиться в перчатках, масках, защитных очках, тщательно
моют руки с мылом. Лабораторная диагностика заключается в исследовании
головного мозга животных с целью выявления вирусного антигена в РИФ, РДП,
ИФА, ПЦР, обнаружении телец Бабеша-Негри и биопробе на белых мышах.
При поступлении в лабораторию патологического материала с подозрением
на бешенство берут пробы органов центральной нервной системы: у крупных
животных (рогатый скот, лошади, овцы, свиньи, собаки, дикие звери) после
удаления шерстного покрова, дезинфекции и удаления кожи и мышц делают
распил черепной коробки, снимают твёрдую мозговую оболочку, и обнажённый
головной мозг целиком извлекают в стерильную посуду.
Кролика для извлечения головного мозга фиксируют на станке или
специальном лотке, затем рассекают кожу от носа до шеи, если нужно взять и
спинной мозг – до хвоста и отпрепаровывают. Череп смазывают йодом.
Вскрывают черепную коробку костоломом. Крышку черепной коробки откидывают,
твёрдую мозговую оболочку рассекают и удаляют, спинной мозг пересекают на
уровне foramen occipitale magnum и весь головной мозг извлекают вместе
мозжечком.
У морских свинок, крыс и мышей принцип взятия мозга такой же, как у
кроликов. Для вскрытия черепной коробки морских свинок и крыс применяют
остроконечные хирургические ножницы, для вскрытия черепа мышей – глазные.
Головной мозг не рекомендуется промывать растворами. При извлечении
мозга также необходимо соблюдать все предосторожности (работа в защитной
спецодежде, в резиновых перчатках, защитной маске и очках, быть предельно
аккуратным).
Метод реакции иммунофлуоресценции (РИФ)
Сущность метода заключается в соединении меченных антител со
специфическим антигеном и наблюдении светящихся комплексов антитело –
антиген в полях зрения люминесцентного микроскопа.
Аппаратура, материалы, реактивы и растворы:
- микроскоп люминесцентный;
- термостат с температурой нагрева плюс 37°C;
- холодильник;
- стёкла предметные по ГОСТ 9284-75;
- пробирки бактериологические по ГОСТ 25336-82;
- чашки Петри по ГОСТ 25336-82;
- пипетки мерные по ГОСТ 20292-74;
- набор инструментов для вскрытия черепной полости и извлечения головного
мозга животных;
- пинцеты по ГОСТ 21241-77;
- горелка газовая или спиртовая;
- ацетон по ГОСТ 2603-79;
- диагностический иммуноглобулин флуоресцирующий антирабический (ДАФИ);
- масло нефлуоресцирующее иммерсионное по ГОСТ 13739-78;
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72;
- раствор фосфатный буферный, рН 7,4.
Подготовка к исследованию.
Из каждого отдела головного мозга (аммонова рога, мозжечка, коры
больших полушарий и продолговатого мозга) готовят по два препарата – мазка-
отпечатка.
Не допускаются для исследования пробы, консервированные глицерином,
фиксированные этиловым спиртом, формалином и другими средствами,
вызывающими денатурацию и разрушение антигенов или создающими
дополнительный (свой) фон свечения.
Препараты высушивают на воздухе и фиксируют в охлаждённом ацетоне при
температуре плюс 4 или минус 12°C в течении 4 – 12 ч. Затем препараты
извлекают из ацетона, высушивают на воздухе 10 – 15 мин. И помещают их во
влажную камеру (чашки Петри с увлажнённым дном).
Диагностический антирабический флуоресцирующий иммуноглобулин (ДАФИ) в
рабочем разведении наносят равномерно на всю поверхность препарата при
помощи пипетки (примерно 0,1 см на один препарат), закрывают камеру с
препаратами, помещают в термостат и выдерживают 30 мин при температуре плюс
37°C. Затем предметные стёкла с препаратом троекратно промывают погружая их
каждый раз на 10 мин в сосуд, наполненный фосфатным буфером рН 7,4,
промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. На окрашенные
препараты наносят иммерсионное нефлуоресцирующее масло.
Проведение исследования.
Подготовленные препараты просматривают под люминесцентным микроскопом
с иммерсионной системой.
Обработка результатов.
При положительных результатах исследования в препаратах, содержащих
антиген вируса бешенства, обнаруживают разной величины и формы ярко
светящиеся жёлто-зелёным цветом гранулы в нейронах и вне клеток. Размер их
колеблется от едва заметных в виде песчинок образований до 15 – 20 мм.
Не поражённая вирусом бешенства нервная мозговая ткань светится
тусклым серовато-жёлтым или зеленоватым цветом.
Метод реакции диффузной преципитации (РДП).
Сущность метода заключается в свойстве антител-преципитинов и
гомологичных им антигенов диффундировать в агаровом геле и при соединении
образовывать видимые визуально линии преципитатов – комплексов антитело-
антиген.
Этим методом допускается исследование несвежего патологического
материала, контаминированный бактериальной микрофлорой.
Аппаратура, материалы и реактивы:
- термостат;
- баня водяная;
- осветитель для бактериологических работ;
- пипетки мерные и пастеровские по ГОСТ 20292-74;
- чашки Петри по ГОСТ 25336-82;
- трубка металлическая тонкостенная диаметром 4 – 5 мм;
- перо писчее ученическое;
- натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;
- метиловый оранжевый, 1%-ный раствор в 50%-ном этиловом спирте по ГОСТ
5962-67;
- мертиолят
- диагностический иммуноглобулин антирабический;
- антиген отрицательный контрольный;
- антиген положительный контрольный;
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72;
- гель агаровый биофабричного изготовления или приготовленный по рецептуре:
агар-агар Дифко или аналогичный – 15 г, натрий хлористый – 8,5 г, 1%-ный
раствор метилового оранжевого в 50%-ном этиловом спирте – 10 см³³,
мертиолят – 0,01 г, вода дистиллированная – 1000 см.
Агаровый гель с рН 7,2 – 7,4 разливают в стерильную посуду,
автоклавируют при 0,5 атм. в течение 30 мин, хранят в холодильнике при
температуре плюс 4°C.
Проведение исследования.
Реакцию преципитации (РП) ставят на обезжиренных предметных стёклах,
на которые предварительно наносят каплю расплавленного агара, пипеткой
равномерно распределяя её по стеклу, и делают тонкий мазок. На застывший
слой агара наливают сверху 2,5 см³ агарового геля толщиной приблизительно 2
мм.
После застывания агара делают в нём лунки металлической тонкостенной
трубочкой диаметром 4 – 5,6 мм согласно трафарету.
Агаровые столбики осторожно извлекают ученическим пером, не допуская
отслаивания от стекла тонкого слоя агарового геля.
В РП исследуют от крупных животных (лошадей, крупного рогатого скота,
собак, лисиц и др.) следующие части головного мозга – кору полушарий левой
и правой сторон, аммоновы рога – левый и правый, мозжечок и продолговатый
мозг. У мелких животных РП ставят с какими-либо тремя отделами мозга. От
мышей исследуют весь головной мозг, который растирают в ступке или в самой
черепной коробке в массу пастообразной консистенции.
Подготовленные предметные стёкла помещают во влажную камеру (чашки
Петри с увлажнённым дном) и при постановке реакции лунки заполняют
патологическим материалом и диагностическим антирабическим иммуноглобулином
(в соответствии с рисунками 1 – 4).
В центральные лунки, обозначенные на трафарете А, В, С, Д, Е, Ж,
вносят исследуемый патологический материал, в периферические лунки 1, 2, 3,
4, (в соответствии с рисунком 1) – диагностический антирабический
иммуноглобулин (1 – 2 капли) в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 (от
исходного разведения) на физиологическом растворе.
Одновременно ставят контрольные опыты с положительным и отрицательным
антигенами, но каждый на отдельном стекле, используя те же разведения
иммуноглобулина.
После заполнения лунок соответствующими компонентами чашки Петри
(влажные камеры) помещают в термостат при температуре плюс 37°C на 6 ч.
Затем выдерживают чашки при комнатной температуре ещё 42 ч.
Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч после её постановки. Предметные
стёкла просматривают визуально в затемнённой комнате, просвечивая их
осветителем снизу вверх под углом 45°.
Обработка результатов.
Реакцию считают положительной при появлении одной или двух – трёх
линий преципитации любой интенсивности между лунками, содержащими антиген и
иммуноглобулин.
Метод постановки иммуноферментного анализа (ИФА)
Принцип непрямого варианта ИФА для выявления антител основан на
взаимодействии антигена вируса бешенства, адсорбированного на поверхности
полистиролового планшета с антителами в сыворотках крови кур с последующим
выявлением специфического комплекса с помощью антивидовых антител, меченных
ферментов перокидазной хрена, активность которого проявляется хромогенным
субстратом.
Область применения.
Методика может быть использована для определения иммунного фона и
напряжённости иммунитета птице поголовья в учреждениях ветеринарного
профиля.
Аппаратура, материалы и реактивы:
- холодильник бытовой +4°C;
- термостат +37°C;
- рН – метр;
- аналитические весы;
- спектрофотометр;
- полистироловые планшеты 96-луночные;
- пипетки автомические с меняющимся объёмом: 1 – 20 мкл, 20 – 100 мкл, 100
– 1000 мкл, 20 – 200 мкл.
- стаканы, колбы мерные, пробирки, наконечники для автоматических пипеток;
- натрий хлористый;
- натрий фосфорнокислый двузамещённый, 12 – водн.;
- натрий углекислый;
- натрий углекислый кислый;
- вода дистиллированная;
- кислота соляная;
- кислота серная;
- кислота лимонная;
- ортофенилендиамин, перекись водорода, твин-20;
- трисоксиметиламинометан;
- нормальная сыворотка лошадей, конъюгат антивидовых антител с
пероксидазой, гипериммунная сыворотка кур, нормальная сыворотка кур.
Подготовка к исследованию.
0,1 М карбонатно-бикарбонатный буфер, рН 9,5 – 9,6 для разведения
антигена:
- натрия углекислого – 3,18 г, натрия углекислого кислого – 5,88 г, воды до
1000 мл. Хранить при +4°C.
- 0,05 М трис – HCI с 0,2 M NaCI рН 7,4 – 7,6
Сначала готовят два раствора: 1а – натрия хлористого 293 г, воды до
2000 мл (2,5 М), 1б – трис (оксиметил) аминометан 121,0 г, воды до 1000 мл
(1 М), добавить концентрированной соляной кислоты до рН 7,4 – 7,6. Затем
смешивать 40 мл раствора 1 и 25 мл раствора 2, и воды до 500 мл. Хранить
при +4°C.
Испытуемые сыворотки. Препараты антител (положительный и отрицательный
контроль), конъюгата антивидовых антител с пероксидазой разводят до
требуемой концентрации в растворе 0,05 М трис–HCI с 0,2 М NaCI, 0,01% твин-
20 рН 7,4 – 7,6.
Для заполнения свободных мест на твёрдофазном сорбенте (блокировка)
применяют раствор 0,05 М трис- HCI с 0,2 М NaCI, 0,01% твин-20, 10%
лошадиной сыворотки.
Отмывку сорбента от несвязавшихся компонентов проводят раствором из
п.п. 41. В качестве субстрата пероксидазы хрена используют 0,04% раствор
ортофенилдиамина в фосфатно-цитратном буфере, рН 4,9 и 0,4 Н2О2. Раствор
готовят непосредственно перед употреблением
Фосфатно-цитратный буфер готовят смешиванием 24,3 мл раствора А и 25,7
мл раствора Б. рН доводят до 4,9. Раствор А – 0,1 М лимонная кислота (19,2
г кислоты на 1000 мл воды), хранится при +4°C. Раствор Б – 0,2 М Naq HPO4
Н2О (71,6 г соли на 1000 мл воды) хранится при комнатной температуре.
Проведение исследования.
Сенсибилизация планшетов. В лунки планшетов вносят по 100 мкл антигена
вируса НБ, разведённого в 0,1 М карбанатно-бикарбонатном буфере, рН 9,5 до
концентрации 1 – 5 мкгмл. Инкубируют при +40°C 18 часов. После удаления
несвязывающего антигена в лунки вносят по 100 мкл 10% раствора лошадиной
сыворотки. Инкубируют 1 час при комнатной температуре. После этого лунки
промывают 3 – 4 раза раствором из п.н. 23.
Внесение исследуемых сывороток и антивидового конъюгата
В первый горизонтальный ряд вносят по 200 мкл исследуемых и
контрольных сывороток в разведении 1:100. Разведения сывороток готовят с 2-
х кратным шагом с 1:100 до 1:12800, используя раствор п. 23. В качестве
отрицательного контроля используют нормальную сыворотку кур, в качестве
положительного контроля сыворотку с известным титром антител, не ниже
1:1600. После инкубации в течении 1,5 – 2 часов при 37° и 3 – 4-кратной
промывки лунок планшетов буфером для промывания, в каждую лунку вносят по
100 мкл рабочего разведения конъюгата антивидовых антител с пероксидазой в
буфере п. 23 и инкубируют 1 час при 37°C. Лунки промывают трёхкратно.
Обработка результатов.
Внесение субстрата и учёт реакции.
Приготавливают субстратно-индикаторную смесь и в каждую лунку вносят
по 100 мкл раствора субстрата, инкубируют 10 – 15 минут при комнатной
температуре. Реакцию устанавливают внесением в каждую лунку по 50 мкл 10%-
ного раствора серной кислоты. Учёт реакции проводят визуально по
интенсивности окраски или спектрофотометрически при 492 нм. В последнем
случае титром сыворотки считают её максимальное разведение, величина
оптической плотности в котором в 2 раза превосходит оптическую плотность в
лунках с контрольной отрицательной сывороткой. Положительными будут
считаться пробы сывороток крови, титры которых 1:400 и выше.
Метод индикации вируса бешенства методом полимеразной цепной реакции
(ПЦР).
Сущность метода заключается в выявлении вируса бешенства в мозге с
помощью ПЦР, позволяющий всего за несколько часов получать миллионы копий
выбранного фрагмента ДНК.
Для амплификации специфического ДНК-фрагмента методом ПЦР достаточно
знать нуклеотидную последовательность двух коротких участков ДНК,
окаймляющих фрагмент-мишень. На основе этих последовательностей химически
синтезируют два олигонуклеотида (праймера), которые необходимы для
инициации полимеризации ДНК в каждом цикле ПЦР. Длина праймеров (обычно 20
– 30 нуклеотидов) должна быть такой, чтобы их последовательность была
статистически уникальна и не встречалась в других участках ДНК,
присутствующей в реакционной смеси. ПЦР включает серию повторяющихся
циклов, каждый из которых начинается со стадии денатурации молекулы ДНК.
На первой стадии при нагревании реакционной ... продолжение
Вы можете абсолютно на бесплатной основе полностью просмотреть эту работу через наше приложение.
Похожие работы
Дисциплины
- Информатика
- Банковское дело
- Оценка бизнеса
- Бухгалтерское дело
- Валеология
- География
- Геология, Геофизика, Геодезия
- Религия
- Общая история
- Журналистика
- Таможенное дело
- История Казахстана
- Финансы
- Законодательство и Право, Криминалистика
- Маркетинг
- Культурология
- Медицина
- Менеджмент
- Нефть, Газ
- Искуство, музыка
- Педагогика
- Психология
- Страхование
- Налоги
- Политология
- Сертификация, стандартизация
- Социология, Демография
- Статистика
- Туризм
- Физика
- Философия
- Химия
- Делопроизводсто
- Экология, Охрана природы, Природопользование
- Экономика
- Литература
- Биология
- Мясо, молочно, вино-водочные продукты
- Земельный кадастр, Недвижимость
- Математика, Геометрия
- Государственное управление
- Архивное дело
- Полиграфия
- Горное дело
- Языковедение, Филология
- Исторические личности
- Автоматизация, Техника
- Экономическая география
- Международные отношения
- ОБЖ (Основы безопасности жизнедеятельности), Защита труда
